DBS22 001-2013 食品安全地方标准 豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的测定 高效液相色谱法

DBS22吉林省地方标准DBS22/001—2013食品安全地方标准豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的测定高效液相色谱法2013-10-08发布2013-10-08实施吉林省卫生厅发布DBS22/001—2013I前言本标准的附录A为资料性附录。本标准起草单位：吉林农业大学本标准主要起草人：李泽鸿，刘莹，刘继阳，王桂芹，于新海，孙炀，张文慧，张继元，刘树英，刘洪章，汪树理，李昌昊，陈屏，史飞。DBS22/001—20131食品安全地方标准豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的测定高效液相色谱法1范围本标准适用于豆芽中高效液相色谱法测定4-氯苯氧乙酸钠的非法添加残留量。本标准方法检出限为0.1mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理豆芽中的4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取，酸性条件下用乙醚提取，再用氯化钠酸性溶液净化，蒸发乙醚近干，甲醇洗脱供液相色谱紫外检测器测定，保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T6682规定的一级水。4.1氢氧化钠。4.2盐酸。4.3乙醚。4.4甲醇：色谱纯。4.5冰醋酸。4.6氢氧化钠溶液（0.01mol/L）：称取0.40g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL。4.7盐酸溶液（1:1）：取100mL盐酸，加水稀释至200mL。4.8氯化钠酸性溶液（40g/L）：于100mL氯化钠溶液（40g/L）中加1.0mL盐酸酸化。4.9磷酸盐缓冲液（0.01mol/L）：称取1.56g的磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）加水溶解，并定容至1000mL，用50%的H3PO4溶液调节pH至4.0。4.104-氯苯氧乙酸标准储备液：精密称取4-氯苯氧乙酸(含量≥99.0%)0.1000g，用甲醇溶解并移入100mL容量瓶中，稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.00mg4-氯苯氧乙酸。在4℃冰箱中避光储存，有效期1个月。临用时用甲醇稀释至每毫升相当于0.10mg4-氯苯氧乙酸。4.11滤膜：0.45µm，有机系。5仪器和设备DBS22/001—201325.1高效液相色谱仪（带紫外检测器）。5.2天平（精度0.01g和0.0001g）。5.3组织捣碎机。5.4超声波仪。5.5均质机（速度范围：6,50024,000r/min）。5.6旋转蒸发仪。5.7酸度计。5.8离心机，5000r/min。6分析方法6.1试样处理6.1.1试样制备：称取经组织捣碎机捣碎的豆芽样品10g（精确至0.01g）于50mL比色管中，加入30.0mL氢氧化钠溶液（4.6），用均质机均质（10,000r/min-）混匀3min，8000r/min离心10min，上清液转入50mL容量瓶中。样品再用少量氢氧化钠溶液（4.6）重复提取1次，离心后合并上清液，并用氢氧化钠溶液（4.6）定容至刻度，摇匀。6.1.2提取：取此液10.0mL于150mL分液漏斗中，加盐酸溶液（4.7）2.0mL，共用50.0mL乙醚（4.3）分3次萃取，每次振摇1min，合并乙醚层。6.1.3净化：用5.0mL氯化钠酸性溶液（4.8）洗涤，弃去水层，乙醚层用旋转蒸发仪在30℃蒸至近干，用甲醇溶解并定容至1.0mL，过0.45m滤膜后，供液相色谱分析。6.24-氯苯氧乙酸标准工作溶液准确吸取每毫升相当于0.10mg的4-氯苯氧乙酸0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL于100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。制成浓度依次为0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L的标准工作溶液，供液相色谱分析。标准工作溶液现用现配。6.3色谱参考条件色谱柱：ZORBAXSBC18柱（4.6mm×250mm×5m）或等效柱。检测波长：228nm。流动相：甲醇+0.01mol/L磷酸盐缓冲液=40+60。流速：1.0mL/min。柱温：30℃。进样量：10L。6.4测定吸取10.0μL标准样品液和试样液注入液相色谱仪，按照6.3项条件进行检测，以保留时间定性，外标法定量。谱图参见附录A。6.5结果计算外标法按公式（1）计算试样中4-氯苯氧乙酸钠的含量。12.110001000mfAX…………………………（1）DBS22/001—20133式中：X—试样中4-氯苯氧乙酸钠的含量，mg/kg；A—从标准曲线上求出的试样液中4-氯苯氧乙酸的质量，g；f—试样的稀释倍数；m—试样的取样量，g；1.12—4-氯苯氧乙酸转换为4-氯苯氧乙酸钠的系数。计算结果保留两位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。DBS22/001—20134AA附录A（资料性附录）4-氯苯氧乙酸标准溶液的液相色谱图_________________________________