实验一--细菌形态观察和染色实验

实验一细菌形态观察和染色实验一、目的要求学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操作技术;初步掌握革兰氏染色法;巩固显微镜（油镜）的使用方法;初步认识细菌的形态特征。二、基本原理革兰氏染色程序结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色番红复染最终结果原理革兰氏阳性菌(G+)蓝紫色蓝紫色蓝紫色蓝紫色蓝紫色细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，透性降低，结晶紫—碘的复合物仍保留在细胞内革兰氏阴性菌(G-)蓝紫色蓝紫色无色红色红色细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高，乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫—碘的复合物较易洗脱出来三、器材菌种大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物，枯草芽孢杆菌12～24h营养琼脂斜面培养物。染色剂革兰氏染色液。仪器或者其他用具显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，生理盐水等涂片涂成薄膜干燥自然干燥固定通过火焰2～3次结晶紫初染1-2min碘液媒染1min乙醇脱色至流出的乙醇无紫色番红复染2min油镜镜检观察。四、操作步骤混合涂片涂色按上述方法，在同一载玻片上，以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。现场演示六、思考题你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎么运用大肠杆菌来证明结果的正确性？热固定的目的是什么？