DB35 1255-2012 云纹石斑鱼种质标准

ICS67.120.30B51DB35福建省地方标准DB35/1255—2012云纹石斑鱼种质标准ThegermplasmofEpinephelusmoara2012-05-04发布2012-08-05实施福建省质量技术监督局发布DB35/1255—2012I前言本标准为强制性标准。本标准由福建省海洋与渔业厅提出并归口。本标准由福建省质量技术监督局批准发布。本标准起草单位：厦门大学海洋与地球学院、漳州市水产技术推广站。本标准主要起草人：尤颖哲、丁少雄、王军、郭明兰、傅蒙娜、曲朦。DB35/1255—20121云纹石斑鱼种质标准1范围本标准规定了云纹石斑鱼（Epinephelusmoara(Temminck&Schlegel,1842）)的学名与分类、生长与繁殖特性、形态特征标准、遗传学特性及所遵循的检验方法与判定规则。本标准适用于云纹石斑鱼的种质检测与鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18654.1-2008养殖鱼类种质检验第1部分检验规则GB/T18654.2-2008养殖鱼类种质检验第2部分抽样方法GB/T18654.3-2008养殖鱼类种质检验第3部分性状测定GB/T18654.4-2008养殖鱼类种质检验第4部分年龄与生长的测定GB/T18654.6-2008养殖鱼类种质检验第6部分繁殖性能的测定GB/T18654.10-2008养殖鱼类种质检验第10部分肌肉营养成分的测定GB/T18654.11-2008养殖鱼类种质检验第11部分肌肉中主要氨基酸含量的测定GB/T18654.12-2008养殖鱼类种质检验第12部分染色体组型分析GB/T18654.14-2008养殖鱼类种质检验第14部分DNA含量的测定GB/T18654.15-2008养殖鱼类种质检验第15部分RAPD分析3名称与分类地位3.1学名云纹石斑鱼Epinephelusmoara(Temminck&Schlegel,1842）。3.2俗名草斑、油斑。3.3分类地位辐鳍亚纲（Actinopterygii），鲈形目（Perciformes），鲈亚目（Percoidei），鮨科(Serranidae)，石斑鱼亚科(Epinephelinae)，石斑鱼属(Epinephelus)。4分布与生态习性云纹石斑鱼栖息于海水的中下层，主要分布于中国的南海、东海和日本海域等，底质类型为岩礁。其耐受温度为10℃～35℃，适宜生长温度范围为20℃～30℃，耐受盐度范围11～41。肉食性鱼类。DB35/1255—201225形态特征5.1外部形态鱼体粗壮偏扁，体褐色或棕色，眼间隔微突；眼中大，短于吻长；口大，两颌具犬齿，上颌前端具2圆锥牙及1个能向后倾伏的牙丛，两侧外行牙较大，内行牙细尖，下颌牙细尖，排列不规则；具明显的辅上颌骨，腭骨具齿，舌上平滑无齿；前鳃盖骨隅角有5～6枚细锯齿棘，具假鳃，鳃条骨7条；体被细栉鳞；背鳍鳍棘部与鳍条部相连，无缺刻；胸鳍后端圆形，尾鳍圆形。背鳍、尾鳍和臀鳍的边缘具白边。云纹石斑鱼的外部形态见图1。图1云纹石斑鱼外形（A示鳃盖骨隅角锯齿棘；B示背鳍边缘白边；C示尾鳍边缘白边；D示臀鳍边缘白边。）5.2可数性状5.2.1背鳍鳍式D.XI-15～16。5.2.2臀鳍鳍式A.Ⅲ-8。5.2.3胸鳍鳍式P.17～18。5.2.4腹鳍鳍式V.I-5。5.2.5尾鳍条数C.18～19。DB35/1255—201235.2.6第一鳃弓外鳃耙数30。5.3可量性状体长为体高3.3～3.7倍，为头长2.4～2.6倍，为肛长的1.5～1.7倍；头长为吻长3.7～4.4倍，为眼径6.5～7.3倍，为眼间距4.9～6.1倍；尾柄长为尾柄高1.4～1.6倍；背鳍基长为臀鳍基长3.2～3.6倍。5.4内部构造特征5.4.1鳔鳔无鳔管，1室。5.4.2幽门盲囊数幽门盲囊呈树叶状，基部支数9～12条，分支数68～183条。5.5骨骼主要特征5.5.1眶前骨眶前骨近似长方形,后缘缩小。5.5.2眶后骨第5眶后骨呈“T”字形。5.5.3尾舌骨尾舌骨后端分叉成燕尾状,燕尾下摆尖突平滑。5.5.4尾下骨第2和3块尾下骨后端分别接2和3根鳍条。5.5.5脊椎骨脊椎骨为24枚，其中腹椎10枚，尾椎14枚。6生长与繁殖特性6.1生长特性6.1.1生长方程式云纹石斑鱼的体长、体重的生长方程式分别见式（1）和式（2）L=105.134[1-e-0.208(t+0.308)]R2=0.993(1)W=18251.468[1-e-0.208(t+0.308)]2.982R2=0.994(2)DB35/1255—20124式中：L——体长，单位为厘米（cm）；W——体重，单位为克（g）；t——年龄，单位为龄（龄）。6.1.2体长与体重关系式：云纹石斑鱼体长与体重的关系式见式（3）：W=0.032L2.830R2=0.999（3）式中：W——体重，单位为克（g）；L——体长，单位为厘米（cm）；6.2繁殖特性6.2.1性成熟年龄云纹石斑鱼具有性反转现象，雌性先熟。雌鱼4龄以上达到性成熟；6龄以上部分雌鱼转为雄鱼并达到性成熟。6.2.2绝对怀卵量50万粒/尾～350万粒/尾。6.2.3繁殖季节主要繁殖季节3月到5月，产卵水温18℃～25℃，分批产卵。6.2.4受精卵特征卵径0.78+0.08mm，浮性卵。6.2.5初孵仔鱼特征初孵仔鱼全长1.5mm～2.0mm，在水温23℃～24℃，孵出后72小时左右开始开口摄食。7肌肉生化组分和主要氨基酸组成7.1肌肉生化组分每100g肌肉中的生化组分质量见表1。表1肌肉生化组分粗蛋白质/g粗脂肪/g粗灰分/g水分/g19.7±0.458.4±0.221.34±0.1170.2±0.677.2主要氨基酸组成每100g肌肉中的氨基酸质量见表2。DB35/1255—20125表2肌肉中主要氨基酸组成单位为克氨基酸种类质量氨基酸种类质量天冬氨酸1.83±0.04苏氨酸0.78±0.02丝氨酸0.68±0.02谷氨酸2.56±0.04甘氨酸0.80±0.03丙氨酸1.04±0.03缬氨酸0.84±0.02蛋氨酸0.54±0.01胱氨酸0.15±0.01异亮氨酸0.77±0.02亮氨酸1.44±0.03酪氨酸0.62±0.02苯丙氨酸0.74±0.02赖氨酸1.68±0.03组氨酸0.38±0.01精氨酸1.04±0.02脯氨酸0.54±0.01氨基酸总量16.43±0.118遗传学特性8.1细胞遗传学特性8.1.1染色体数2n=48。8.1.2核型公式2n=2sm+46t；NF=50。云纹石斑鱼核型见图2。图2云纹石斑鱼核型图8.2分子遗传学特征8.2.1云纹石斑鱼DNA含量2C=2.52±0.12pg。DB35/1255—201268.2.2随机扩增多态性DNA（RAPD）8.2.2.1云纹石斑鱼群体RAPD扩增图谱云纹石斑鱼群体RAPD扩增图谱见图3。图3云纹石斑鱼群体的RAPD扩增图谱（随机引物1126，序列为：GGGAACCCGT，M为分子量markerDL2000）8.2.2.2群体遗传特性群体内多态位点百分率P为36.08%，个体间的遗传相似系数Fxy在0.9454～1.0000之间，平均遗传相似系数F为0.9775。个体间平均差异度D为0.0225。（所使用的随机引物及扩增结果见资料性附录A）8.2.3云纹石斑鱼DNA条形码云纹石斑鱼条形码靶基因为COI基因，全序列共655个碱基，云纹石斑鱼种内的序列歧异度D≤0.5%，与种间的同源序列差异极显著（p0.01）。云纹石斑鱼DNA条形码序列见图4。图4云纹石斑鱼DNA条形码序列图DB35/1255—201279检验方法9.1性状检测按GB/T18654.3-2008执行。9.2生长与繁殖测定按GB/T18654.4-2008执行，按GB/T18654.6-2008执行。9.3染色体的检测标准按GB/T19654.12-2008执行。9.4DNA含量的测定标准按GB/T19654.14-2008执行。9.5RAPD检测标准9.5.1DNA的提取、PCR扩增DNA的提取、PCR扩增按GB/T19654.15-2008执行。9.5.2结果计算个体间遗传相似度（Sxy）、群体内平均相似度（S）按式（7）、（8）计算：Fxy=yxxyNNN+2(7)式中：Fxy——个体x和y间的遗传相似度；Nxy——个体x和y共同拥有的带数；Nx——个体x所具有的总带数；Ny——个体y所具有的总带数F=2nxyCF∑(8)式中：Fxy——个体x和y间的遗传相似度；F——群体内平均相似度；n——群体内个体数9.6DNA条形码检测9.6.1DNA提取取肌肉组织，尽量剪碎，用常规酚氯仿方法提取基因组DNA，双蒸水溶解后-20℃保存备用。9.6.2PCR扩增DB35/1255—20128引物序列：上游引物：5游-AAGGGCCACTTTGATAGAGTG-3D；下游引物：5’-GTRAGTRYGGGGGYTTTTGCYCA-3’。扩增反应条件Tag酶及缓冲液购自Takara公司。反应体积为25µL，其中含10中含及缓冲液购自Tak2.5µL，25mmol/LMg2+2µL，5pmol引物各11p，DNA模板25ng，Taq酶1U，无菌ddw补足25µL。扩增程序为：95程2min为（95i1min为52i1min为72i1min）×30cys→72i5min9.6.3序列测定PCR产物经回收纯化后，在DNA测序仪上测序；为保证测序的可靠性和准确性，采用双向测序，并进行人工核对、校正。9.6.4结果计算序列歧异度(D)按式(9)计算D=序列碱基总数序列内变异碱基数（9）10判定规则检测结果不符合第5章要求的，则判定为不合格项，有不合格项的样品为不合格样品。DB35/1255—20129AA附录A（资料性附录）表A.1RAPD检测使用的随机引物扩增结果引物序列(5'-3')位点总数多态位点数多态位点百分率(%)S1021GGCATCGGCT6116.67S1026TGCCGCACTT8562.50S1027ACGAGCATGG7228.57S1028AAGCCCCCCA5120.00S1030TCGGGGCATC8450.00S1034TGGTGCACTC5240.00S1036AAGGCACGAG7228.57S1046GTCGGAGTGG7228.57S1060ACACGTGGTC11327.27S1107AACCGCGGCA3266.67S1109TGCCGGTTCA4375.00S1113CACGGCACAA6583.33S1115GATGCGATGG5240.00S1116TGGCGGTTTG6466.67S1117GCTAACGTCC5240.0S1118ACGGGACTCT600S1126GGGAACCCGT9444.44S1127TCGCTGCGGA8337.50S1130CTGTGTGCTC9555.55S1132AACGGCGGTC7342.86S1134AGCCGGGTAA8112.50S1135TGATGCCGCT6350.00S1136GTGTCGAGTC4375.00S1137TCAGCACAGG6116.67S1139ACCACGCCTT7114.29S2106TCCACGGGCA6116.67S2108CCTGGGTCCA5120.00S2111GACGACCGCA8337.50S2112CTTCGCTGTC4125.00S2115ACGCGAACCT8225.00合计19470多态位点百分率P(%)36.08_________________________________