※※检测系统定量项目性能评价

L/O/G/O检测系统定量项目性能评价检测系统（TestSystem）？检测系统：包括测量过程的所有因素，如仪器、样本、人员、试剂、辅助材料和操作等，也包括样本类型、测试温度、湿度等。人机料法环评价：确认&验证确认（Validation）方法建立者或者实验室修改了CFDA批准的方法。Validation-AdefinedprocessbywhichalaboratoryconfirmsthatalaboratorydevelopedormodifiedFDA-cleared/approvedtestperformsasintendedorclaimed.(CAPAllCommonChecklist)验证（Verification）CFDA批准的方法，实验室未做修改，严格按照供应商说明书执行。Verification-TheprocessbywhichalaboratorydeterminesthatanFDA-cleared/approvedtestperformsaccordingtothespecificationssetforthbythemanufacturer.(CAPAllCommonChecklist)何为修改？样本处理流程样本或试剂稀释倍数样本或试剂用量校准品（厂家有赋值说明除外）反应步骤检测系统底物或结合物等等……样本类型如血浆→尿液预期用途：筛查改诊断，定性改定量孵育温度或时间纲要为什么要做（Why）？要做些什么（What）？什么时候做（When）？谁来做（Who）？4123怎么做（How）？51病人安全需要国家法律、法规和行业规范要求：《医疗机构临床实验室管理办法》(2006年卫生部)，第三十条．医疗机构临床实验室应当将尚未开展室间质量评价的临床检验项目与其他临床实验室的同类项目进行比对，或者用其他方法验证其结果的可靠性。临床检验项目比对有困难时，医疗机构临床实验室应当对方法学进行评价，包括准确性、精密度、特异性、线性范围、稳定性、抗干扰性、参考范围等，并有质量保证措施。《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》（2009年国家食品药品监督管理局医疗器械技术审评中心）认可准则、认可条款要求：CNAS-CL02：20085.5.2，实验室应只用确认过的程序证实所用检验程序适合其预期用途，证实应尽量充分以满足给定用途或满足某领域应用的需求。实验室应记录证实所得的结果及使用的程序。为什么要做（Why）？23美国Clia验证：准确度精密度可报告范围参考区间（相似的人口统计学和地理学）确认除上述参数外，还需：干扰最低检测限建立参考区间出自：Clia88-CFR-2012（493.1253）要做些什么（What）？2CAP要做些什么（What）？2ISO15189验证或确认包括，但不限于以下内容：正确度精密度分析测量范围（线性范围）可报告范围检测限参考区间确认比验证费时、费力和费钱要做些什么（What）？2新增/更改项目•编写相应操作规程与评价方案•工作人员熟悉规程与评价方案•日常检测，出具报告准备性能评价病人检测•新增项目•检测系统更改•某项目停止检测一段时间，重新检测病人•仪器挪动位置•关键部位维修•确认或验证什么时候做（When）？3实验室工作人员方案确立：包括标本选择测定重复次数时间跨度……方案实施数据处理评价结论谁来做（Who）？4依据来源：CLSI（临床实验室标准化协会）网址：标准：精密度谁来做（Who）？4怎么做（How）？5标本来源：病人血清/血浆（来源：实验室）；基质合适的商用质控品。浓度：高低2个浓度（医学决定水平）；3浓度（2个浓度的精密度有显著差异时）。测定次数：2次/批；测定天数：≥20天；离群点数据：以最初的5天数据为初步精密度（SD）,≥4SD的剔除，并补足。精密度-EP5A2方案精密度-EP5A2举例批内不精密度：（I：天数）室内总不精密度：（T：总自由度）精密度-EP5A2举例允许SD数值为厂家声明或者该方法的质量要求指标。精密度-EP5A2举例标本：2个浓度水平；测定次数：3次/批；测定时长：5天；离群点剔除：质控失败或操作失败的数据剔除，并补足；供应商声明：若供应商指出其精密度是在多个校准周期得出的，则实验方案应类似。精密度-EP15方案（验证）数据记录与统计精密度-EP15应用数据记录与统计根据υ值和浓度水平（2个水平）查卡方表得C值。精密度-EP15A2应用rrC=验证值（批内）（为供应商声明批内精密度）•-1{}DnDn为天数，为每日重）复测试数（2222224[(1)](T)1()1nSrnSbTnnSbSrDD（）为有效自由度C=llT验证值（室内）（为供应商声明批内精密度）sr与sl分别≤相应的验证值：验证通过标本来源：质控物（基质与临床标本相似）标准液病人标本混合物浓度：高低2个水平（考虑医学决定值）试验次数与周期：批内≥20次日间≥20天数据处理：均值、标准差和变异系数精密度-Westgard批内不精密度要求≤1/4TEa日间不精密度要求≤1/3TEa精密度-Westgard举例方法变更最常用的试验方案前提：方法具有可比性，厂家有偏倚声明标本来源：新鲜患者样本浓度：覆盖可报告范围份数：20份时间：3~4天，平均5~7份每天数据处理：配对样本t-检验结果判断正确度-EP15（方案1：患者样本）正确度-举例根据所得数据得到以及两组方法的平均偏倚（b）验证结果如下时：≤b≤验证通过（β为厂家声明，n为标本份数，t查表所得）正确度-结果判断标本来源：有证参考物质（CRM）能力验证（正确度计划）样品室间质评同组（Peergroup）均值（≥10家）第三方商品化定值物质浓度：高低2个浓度（可报告范围内，且需考虑医学决定水平）时间：3~5天，双份测定数据处理结果判断正确度-EP15（方案2：参考品）定值正确度-举例名称：检测限（limitofdetection）检测低限（lowerlimitofdetection）分析灵敏度（analyticalsensitivity）功能灵敏度（functionalsensitivity）CLSIEP17：空白限（LimitofBlank，LoB）：一定概率下，测量空白样本所得到的测量结果。检出限（LimitofDetection，LoD）：检测方法可检测出的最低被测物的浓度。定量限（LimitofQuantitation，LoQ）：检测系统能够得到可靠结果的被测物最低浓度。在规定实验条件下，其正确度与精密度可接受。检测限LoB＜LoD≤LoQ检测限-EP17LoB：实验前：同批试剂、校准批号；样本测定数：建立n≥60，验证n≥20；样本类型：临床样本（不含被测物）；基质类似的样本（5%牛血清，人血清白蛋白溶液）※基质互通性参见EP14或《基质效应与互通性评估指南》（WS/T356-2011）测定时间安排：多样本，多天，如5个样本，5天内测定；结果计算（正态分布or非正态分布？）；验证：20次，≤3个不大于LoB，验证通过。检测限-EP17LoD：样本类型：低值临床样本；浓度范围：LoB～4LoB之间。样本测定数：建立：n≥60；验证：n≥20；浓度分组：4～6组。结果计算：正态分布or非正态分布？验证：20次，≤3个不大于声明的LoD，验证通过。检测限-EP17LoQ：测定方法：多样本、多天、重复测定建立：n≥40（测定总数）；TEa=|偏差|+2SD＜规定的质量目标，则LoQ=LoD，否则，需检测稍微高的标本验证：n≥25；≤3个不大于声明的LoQ，验证通过。检测限-EP17定义：低值测定结果变异系数等于20%时分析物浓度制备：浓度：5~10个水平，对数递增/减；N=20（每个浓度测定数）；结果计算：每个浓度均值、SD与CV%作图（可选）。检测限-功能灵敏度可报告范围可报告范围ReportableRange分析测量范围analyticmeasurementrange(AMR)定量限LoQ线性范围最大可稀释倍数可报告范围：理论数据：{LoQ~AMR上限×最大可稀释倍数}实际应用：考虑临床需求线性范围：覆盖检测系统可接受线性关系的范围，非线性误差小于设定标准。--EP6-A可报告范围样本：与临床标本基质相似临床标本高低混合物厂家提供质控物PT中的线性质控品（如CAP的LN质控品）浓度：建立：9~11个水平验证：5~7个覆盖整个预期测定范围测量重复次数：建立：2~4次验证：2~3次测量时间：较短时间内（最好1天内）线性范围-EP6标本制备举例：数据记录：离群数据剔除：目测或GRUBBS法线性范围-EP6样本号12345低浓度血清(ml)1.000.750.500.250.00高浓度血清(ml)0.000.250.500.751.00项目：样品：仪器：试剂/批号：校准品/批号：操作者：审核者：测定日期：样本号测定1测定2测定3测定4均值12数据统计（多项回归）：以测量数据均值作为Y值，预期值作为X值作图（散点图）--目测判断用非线性多项式拟合数据是否比线性好判断最适非线性模型与线性拟合之间的差值是否小于预先设定的该方法的允许偏差离群数据剔除：GRUBBS法（查表）线性范围-EP6阶别回归方程回归自由度（Rdf）一次Y=b0+b1X2二次Y=b0+b1X+b2X23三次Y=b0+b1X+b2X2+b3X34结果判断：b2/b3（非线性系数）与零差异无显著性，线性关系成立，偏差（%）与不精密度均≤实验室质量目标，验证（建立）通过线性范围-EP6b2/b3（非线性系数）与零有显著性差异，统计学线性不成立：二项/三项拟合曲线与一阶线性的差值≤质量目标不精密度≤质量目标临床线性成立，验证通过，否则失败。※线性试验×：找原因找厂家缩小范围（前提：满足临床需求且非线性原因在高低两端）线性范围-EP6标本选择：浓度：线性范围上1/3区域（高/混合/添加）稀释倍数：供应商建议，临床需求测定：3个浓度，每个浓度测定3次结果记录与计算：离群数据剔除：GRUBBS法（查表）最大可稀释倍数浓度1浓度2浓度3重复1重复2重复3均值稀释倍数还原浓度理论浓度偏差（%）偏差（%）≤质量目标配套/批准方法（ISO15189与CAP）：引用供应商资料引用官方出版物资料修改/自建方法：确定干扰物及来源（内源/外源）：异常标本，如黄疸，脂浊与溶血等药物及代谢产物被测物相似物质处理过程的添加物，如抗凝剂、防腐剂等食物中的某些物质，如β-胡萝卜素、咖啡因等干扰-EP7选择实验方案：加入可疑干扰物前后测定比较选代表性病人样本与高特异性方法比较※两种方法各有优劣，可以互补干扰筛查：选择合适待评分析物浓度（考虑Xc）确定该浓度分析物时，干扰引起的最大临床允许差异（dmax）确定实验重复次数：双侧实验/对照交替测定干扰-EP721-/21-2[()/]amaxnZZsd数据统计与结果判断：dnull无效假设值，通常=0dobs95%可信区间的值为dobs≤dc认为干扰物质引起的偏差＜dmax；否则假设成立，有干扰。干扰效应特征：干扰物不同浓度时对待测物的干扰程度，可通过剂量响应曲线（Dose-ResponseCurve）描述。干扰-EP7实验设计：1.确定待测物高低浓度（考虑Xc）2.制备干扰物各系列浓度（如高低混合）3.确定重复测试次数与测试顺序（随机或低→高，高→低）4.确定临床显著性差异值数据处理与统计：干扰物浓度为X轴，待测物浓度为Y轴作图1.举例：溶血对AST测定的影响（软件）干