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福建省地方标准DB35/T916—2009猪瘟抗体金标试纸检测方法2009-04-24发布2009-05-30实施DB35福建省质量技术监督局发布食品伙伴网—2009I前言为开展猪瘟免疫监测，了解生猪猪瘟抗体水平，指导猪瘟免疫工作，特制定本标准。本标准由福建省农业厅提出并归口。本标准由福建省质量技术监督局批准发布。本标准起草单位：福建省动物疫病预防控制中心、福建省标准化研究所。本标准主要起草人：金颜辉、林臻毅、吴波平、林芬、梁静、许先明、黄雁、洪英、王海瀛。本标准为首次发布。食品伙伴网—20091猪瘟抗体金标试纸检测方法1范围本标准规定了猪瘟抗体的免疫金标试纸法的检测方法。本标准适用于猪血液或血清中猪瘟抗体水平的测定。2试验原理应用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪瘟抗体的免疫金标试纸。试纸由加样区，检测区和吸水区三个部分组成。将猪瘟抗原和兔抗猪瘟抗体分别包被在检测区的检测线（T）和对照线上（C），并在加样区包被胶体金标记的猪瘟抗原，组成免疫金标试纸。检测时，在加样孔（S）内加入待检的猪血液或血清样品，由于层析的作用，血清向检测试纸的上部移动，首先将遇到干燥的猪瘟金标抗原并将其溶解，带着猪瘟胶体金标记的抗原继续往检测区移动至检测线（T）。如果样品中有猪瘟抗体存在，包被在检测线（T）上猪瘟抗原和猪瘟金标抗原与样品中的猪瘟抗体反应，形成免疫复合物，则出现一条紫红色色带。如果待检样品中没有猪瘟抗体，金标抗原将不会与包被在检测线（T）上的猪瘟抗原结合，检测线（T）不出现色带，样品与金标猪瘟抗原继续往检测区移动至对照线上（C），就与兔抗猪瘟抗体相结合形成一条紫红色的色带，以此证明该检测试纸有效。根椐检测线（T）色带深浅，判定样品中猪瘟抗体的水平高低，即当抗体水平高时，结合的胶体金抗原多，检测线（T）会出现紫红色带，色带颜色的深浅与猪瘟抗体水平成正相关。3测试卡猪瘟抗体免疫金标试纸装在塑料卡中制成测试卡，铝箔密封，内装干燥剂，谨防破口吸湿。室温或冷藏保存。测试卡结构及测试部位如下图所示。猪瘟抗体免疫金标测试卡示意图4试验仪器及材料微量加样器或滴管。5试验步骤5.1将测试卡平放在桌面上，在测试卡的隋圆形加样孔内加入50μL~100μL或用滴管滴入2滴~3滴待检样品（待检样品不能腐败变质）。5.2常温静置20min~30min判定结果。检测区对照线（C）检测线（T）加样孔（S）食品伙伴网—200926结果判定6.1阳性在对照线（C）和检测线（T）各出现一条紫红色带，判定为被检样品中含有猪瘟抗体。抗体水平越高，色带颜色越深。6.2阴性对照线（C）出现一条紫红色带，检测线（T）不出现色带，判定为被检样品中的猪瘟抗体阴性。6.3无效对照线（C）不出现色带，试验无效。食品伙伴网－2009福建省地方标准猪瘟抗体金标试纸检测方法DB35/T916—2009*2009年5月第一版2009年6月第一次印刷食品伙伴网