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ICSDB34备案号：安徽省地方标准DB34/T828—2008尿液中莱克多巴胺的残留测定——气相色谱质谱法2008-08-01发布2008-08-01实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T828—2008I前言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省质量技术监督局批准。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。本标准起草人：许世富、汤春莲、陶小平、蔡东东、明文庆。本标准于2008年8月1日首次发布。DB34/T828—20081尿液中莱克多巴胺的残留测定——气相色谱质谱法1范围本标准规定了尿液中莱克多巴胺检验的制样和气相色谱质谱（GC/MS）法测定方法。本标准适用于尿液中莱克多巴胺的定量仲裁检测。本标准定量限为1.0μg/L，线性范围：0.05ng～1.0ng。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样制备采集的尿样应保存于4℃左右的冰箱中。尿样如有混浊，应经离心处理。4原理用叔丁基甲醚为提取剂提取动物尿样中游离的莱克多巴胺，然后用固相萃取柱净化，双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）衍生，最后用GC/MS进行分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。5.2双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1％三甲基氯硅烷（TMCS）。5.3莱克多巴胺标准贮备溶液（5mg/mL）：准确称取50mg莱克多巴胺对照品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用（－18℃保存90d）。5.4莱克多巴胺标准工作溶液：取莱克多巴胺标准贮备溶液，用甲醇稀释至所需浓度（4℃保存7d）。5.5甲苯。5.6甲醇色谱纯。5.7乙酸乙酯。5.8叔丁基甲醚。5.9无水硫酸钠。5.10氢氧化钠。5.11氯化钠。5.12氢氧化钠溶液（1mol/L）：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加水至1000mL，摇匀。5.133％甲醇－乙酸乙酯溶液：取15mL甲醇加乙酸乙酯至500mL，混匀。5.1450％甲醇－乙酸乙酯溶液：取250mL甲醇加乙酸乙酯至500mL，混匀。5.15固相萃取柱：500mg/3mL，填充料为硅藻土和硅胶，或相当者。6仪器设备DB34/T828—200826.1气相色谱－质谱仪。6.2干燥箱。6.3冷冻离心机。6.4振荡器。6.5涡旋混合器。6.6分析天平：感量0.0001g。6.7旋转蒸发仪。6.8固相萃取装备。6.9离心管：50mL，10mL。6.10氮吹仪。6.11鸡心瓶，50mL。7测定步骤7.1试样提取取试样10.0mL至50mL离心管中，用氢氧化钠溶液（5.12）调节pH值为10，加1g氯化钠，振摇数秒，加l0mL叔丁基甲醚提取，涡旋lmin，中速振荡l0min，4℃条件下5000g离心5min，取上清液经无水硫酸钠过滤，收集于50mL鸡心瓶中；另取10mL叔丁基甲醚重复提取一次。用2mL叔丁基甲醚洗涤无水硫酸钠，50℃旋转蒸发至干。7.2试样净化依次用5mL甲醇和5mL乙酸乙酯润洗固相萃取柱，用2mL乙酸乙酯溶解鸡心瓶中的残余物，过固相萃取柱（5.15），另取3mL3％甲醇－乙酸乙酯（5.13）洗涤鸡心瓶的残余物，过柱，抽干；再用5mL50％甲醇－乙酸乙酯（5.14）洗脱，氮气吹干。7.3试样衍生吹干剩余物加0.1mL双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1％三甲基氯硅烷（TMCS）（5.2），加盖于旋涡混合器上振荡，80℃的干燥箱加热1h，氮气吹干，加0.2mL甲苯溶解。另取适量的莱克多巴胺标准工作溶液，氮气吹干，与试样同法进行衍生化。7.4色谱条件色谱柱：5％苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm），或相当者。进样口温度：300℃。柱温程序：初温150℃，保持3min，然后以10℃/min升至230℃，保持10min，再以20℃/min升至280℃保持10min。载气：高纯氦气（99.999％）。流速：1.0mL/min，不分流进样。进样量：1.0μL。7.5质谱条件El源：源温230℃。电子能量：70eV。接口温度：280℃。电子倍增器电压：高于调谐电压200V。质量扫描范围：30U～550U。选择离子监测方式（SIM）监测离子（m/z）：250、267、179、502。溶剂延迟：5min。7.6上机测定莱克多巴胺对照溶液和样品液分别注入气相色谱－质谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。DB34/T828—200838结果计算结果按下式计算：X=nmm1×…………………………………………………………………（1）式中：X——样品中莱克多巴胺含量（ng/mL）m1——质谱测定对应莱克多巴胺量（ng）m——取样量（mL）n——稀释倍数测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法莱克多巴胺的检测限为0.5μg/kg。9.2准确度本方法回收率均为70％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤15％，批间变异系数CV≤20％。