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ICSDB34备案号：安徽省地方标准DB34/T826—2008动物组织中莱克多巴胺的残留测定——气相色谱质谱法2008-08-01发布2008-08-01实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T826—2008I前言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省质量技术监督局批准。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准由起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。本标准起草人：许世富、汤春莲、明文庆、陶小平、蔡东东。本标准于2008年8月1日首次发布。DB34/T826—20081动物组织中莱克多巴胺的残留测定——气相色谱质谱法1范围本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中莱克多巴胺检验的制样和气相色谱－质谱（GC/MS）法测定方法。本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中莱克多巴胺的定量检测和仲裁测定。本标准在动物肌肉、肝脏、肾脏中定量限为1.0μg/kg，线性范围：0.05ng～1.0ng。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3试样制备肌肉、肝脏、肾脏动物组织，去筋后切成小块，制成肉糜后，于－18℃以下温度冷冻保存。4原理用乙腈为提取剂提取试样中游离的莱克多巴胺，然后用固相萃取柱净化，双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）衍生，最后用GC/MS法进行分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。5.2双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+l％三甲基氯硅烷（TMCS）。5.3莱克多巴胺标准贮备溶液（5mg/mL）：准确称取50mg莱克多巴胺对照品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用（－18℃保存90d）。5.4莱克多巴胺标准工作溶液：取莱克多巴胺标准贮备溶液，用甲醇稀释至所需浓度（4℃保存7d）。5.5乙腈。5.6正己烷。5.7氯化钠。5.8饱和氯化钠溶液：取过量氯化钠溶解于水中，取上清液。5.9无水硫酸钠。5.10甲醇色谱纯。5.11乙酸乙酯。5.123％甲醇－乙酸乙酯溶液：取15mL甲醇加乙酸乙酯至500mL，混匀。5.1350％甲醇－乙酸乙酯溶液：取250mL甲醇加乙酸乙酯至500mL，混匀。5.14甲苯。5.15固相萃取柱：500mg/3mL，填充料为硅藻土和硅胶，或相当者。DB34/T826—200826仪器设备6.1气相色谱－质谱仪。6.2干燥箱。6.3冷冻离心机。6.4振荡器。6.5涡旋混合器。6.6分析天平：感量0.0001g。6.7旋转蒸发仪。6.8鸡心瓶50mL。6.9离心管：50mL，10mL。6.10氮吹仪。6.11固相萃取装备。7测定步骤7.1试样提取称取匀浆后的动物组织样品试样10±0.1g至50mL离心管中，加10mL乙腈，涡旋2min，4℃条件下4000g离心5min，取上清液于分液漏斗中，加入10mL正己烷充分振摇，静置后分离乙腈相；另取10mL乙腈重复提取一次，再用同一份正己烷分配，合并两次分离的乙腈相，加入10mL饱和氯化钠溶液（5.8）充分振摇，静置后分离乙腈相，经无水硫酸钠过滤，用2mL乙腈洗涤无水硫酸钠，旋转蒸干。7.2试样净化固相萃取柱依次用5mL甲醇和5mL乙酸乙酯润洗，用2mL乙酸乙酯溶解鸡心瓶中的残留物，过固相萃取柱（5.15）；另取5mL3％甲醇－乙酸乙酯（5.12）洗涤鸡心瓶中的残留物，过柱，抽干；再用5mL50％甲醇－乙酸乙酯（5.13）洗脱，收集，氮气吹干。7.3试样衍生吹干剩余物加0.1mL双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+l％三甲基氯硅烷（TMCS），加盖于旋涡混合器上振荡，80℃的干燥箱加热1h，氮气吹干，加0.2mL甲苯溶解。另取适量的莱克多巴胺标准工作溶液（5.4），氮气吹干，与试样同法进行衍生化。7.4色谱条件色谱柱：HP-5MS5％苯基甲基聚硅氧烷，（柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm），或相当者。进样口温度：300℃。升温程序：起始温度150℃，保持3min，以l0℃/min升至230℃，保持l0min，再以20℃/min升至280℃保持10min。载气：高纯氦气（99.999％）。流速：1.0mL/min（恒流），不分流进样。进样量：1.0μL。7.5质谱条件El源：离子源温度：200℃。El源轰击能：70eV。传输线温度：280℃。EM电压：高于调谐电压200V。扫描范围：30U～550U。四极杆温度：160℃。选择离子扫描（SIM）监测离子（m/z）：250、267、179、502。溶剂延迟：5min。DB34/T826—200837.6上机测定莱克多巴胺对照溶液和试液分别注入气相色谱－质谱联用仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算结果按下式计算：X=nmm1×…………………………………………………………………………（1）式中：X——样品中莱克多巴胺含量（μg/kg）；ml——质谱测定对应莱克多巴胺量（ng）；m——取样量（g）；n——稀释倍数。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法莱克多巴胺的检测限为1.0μg/kg。9.2准确度本方法回收率均为70％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤15％，批间变异系数CV≤20％。