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ICSDB34备案号：安徽省地方标准DB34/T820—2008饲料中莱克多巴胺的测定——气相色谱质谱法2008-08-01发布2008-08-01实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T820—2008I前言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省质量技术监督局批准。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。本标准起草人：许世富、汤春莲、丁再亮、明文庆。本标准于2008年8月1日首次发布。DB34/T820—20081饲料中莱克多巴胺的测定——气相色谱质谱法1范围本标准规定了饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺检验的制样和定量仲裁测定方法。本标准适用于饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺的定量仲裁检测。本标准定量限0.05mg/kg，线性范围：0.05ng－1.0ng。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。4原理试样中莱克多巴胺先用氨化甲醇溶液提取，用固相萃取柱净化，双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）衍生，最后用GC/MS法进行分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。5.2双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+l％三甲基氯硅烷（TMCS）。5.3莱克多巴胺标准贮备溶液（5mg/mL）：准确称取50mg莱克多巴胺对照品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用（－18℃保存90d）。5.4莱克多巴胺标准工作溶液：取莱克多巴胺标准贮备溶液，用甲醇稀释至所需浓度（4℃保存7d）。5.5甲苯。5.6甲醇色谱纯。5.7乙腈。5.8乙酸乙酯。5.9无水硫酸钠。5.10正己烷。5.11氨水。5.1250％乙腈－乙酸乙酯溶液：取250mL乙腈加乙酸乙酯至500mL，混匀。5.1350％甲醇－乙酸乙酯溶液：取250mL甲醇加乙酸乙酯至500mL，混匀。5.14氨化甲醇溶液（2％）：取20mL氨水加甲醇至1000mL，混匀。5.15固相萃取柱：500mg/3mL，填充料为聚苯乙烯，或相当者。DB34/T820—200826仪器设备6.1气相色谱－质谱仪。6.2干燥箱。6.3冷冻离心机。6.4振荡器。6.5涡旋混合器。6.6分析天平：感量0.0001g。6.7旋转蒸发仪。6.8鸡心瓶50mL。6.9氮吹仪。6.10固相萃取装备。7测定步骤7.1试样提取称取粉碎后样品3±0.01g，加20mL氨化甲醇溶液（5.14），涡旋振荡1min，超声10min，4℃条件下5000g离心5min，取上清液10mL至鸡心瓶中，50℃旋转蒸发至干。7.2试样净化用2mL甲醇和2mL正己烷溶解残余物，转入10mL离心管，重复一次，合并溶解液，摇匀，静置后弃去上层液。再加2mL正己烷，摇匀，静置后弃去上层液，重复一次。45℃条件下氮气吹干，加5mL乙酸乙酯溶解，加0.5g无水硫酸钠，4℃条件下5000g离心5min，上清液备用。固相萃取柱5mL乙酸乙酯润洗，上清液过固相萃取柱（5.15），用3mL50％乙腈－乙酸乙酯溶液（5.12）洗涤柱子，抽干，用5mL50％甲醇－乙酸乙酯溶液（5.13）洗脱收集，氮气吹干。7.3试样衍生吹干剩余物加0.1mL双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+l％三甲基氯硅烷（TMCS）（5.2），加盖后于旋涡混合器上震荡，在80℃的烘箱中加热1h，氮气吹干，加0.2mL甲苯溶解。取适量的莱克多巴胺标准工作溶液（5.4），氮气吹干，与试样同法进行衍生化。7.4色谱条件色谱柱：5％苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm），或相当者。进样口温度：300℃。柱温程序：初温150℃，保持3min，然后以10℃/min升至230℃，保持10min，再以20℃/min升至280℃保持10min。载气：高纯氦气（99.999％）。流速：l.0mL/min，不分流进样。进样量：1.0μL。7.5质谱条件El源：源温230℃。电子能量：70eV。接口温度：280℃。电子倍增器电压：高于调谐电压200V。质量扫描范围：30U～550U。选择离子监测方式（SIM）。监测离子（m/z）：267，250，502，定量离子250。溶剂延迟：5min。7.6上机测定DB34/T820—20083莱克多巴胺对照溶液和试液分别注入气相色谱－质谱联用仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算结果按下式计算：X=n1000mm1××…………………………………………………………………（1）式中：x——样品中莱克多巴胺含量（mg/kg）；ml——质谱测定对应的莱克多巴胺量（ng）；m——取样量（g）；n——稀释倍数。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法莱克多巴胺的检测限为0.05mg/kg。9.2准确度本方法回收率均为70％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤15％，批间变异系数CV≤20％。