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安徽省地方标准牛人工授精操作规程DB34/T089-19931主题与适用范围本规程规定了使用牛冷冻精液进行人工授精的方法和操作程序本规程适于全省各地牛人工输精站（点）应用2引用标准：GB4143-843授精前的准备3.1人工授精室（或精液处理室）应配齐显微镜、干燥箱、高压灭菌锅、天平、输精器械、冷冻精液贮存罐、液氮运输罐、消毒药品、抗菌素、二水柠檬酸钠等必需的药品和器械。3.2人工授精室应保持无尘、无烟、无蚊蝇和无味、无直射阳光。橱柜保持清洁。3.3器械使用前必须进行消毒。消毒方法：先用洗衣粉水或温肥皂水刷除污物，再用清水洗净，用过滤的温开水冲洗，然后放入纱布袋中蒸气灭菌30分钟，亦可用70%酒精棉球擦拭或用酒精火焰消毒。输精器使用前还必须再用1%灭菌盐水或解冻液冲洗。3.4输精员指甲剪短、磨光、手臂必须用肥皂水洗净，再用来苏儿消毒。3.5输精母牛要排除宿粪，尾根、肛门及外阴部先用水清洗后再用来苏儿或高锰酸钾溶液消毒。3.6授精母牛输精前要进行保定。4冷冻精液的解冻4.1颗粒冻精解冻的配方按照GB4143标准执行，推荐使用一毫升维生素B12注射液（含量0.25-0.5mg）。4.2颗粒冷冻精液解冻：用刻度吸管取解冻液一毫升注入灭菌并用解冻液冲洗的试管内，放入38-40℃温水中，待解冻液温度升至38-40℃时，用在液氮中浸过的竹镊子迅速取出颗粒精液一粒，立即投入试管中轻轻摇动，当颗粒基本融化时，把试管从温水杯中提出。不论授精母牛头数多少，均应逐颗解冻。4.3细管冻精解冻4.3.1手握法：将细管从容器中取出放入手心中用双手搓热，直至精液溶解。4.3.2水浴法：将细管冻精取出后，立即38-40℃温水中浸泡、直至精液完全溶解取出。5解冻后的精液品质检查5.1显微镜活力检查：取解冻后精液滴于载玻片上，盖上盖玻片，在37℃的温度下进行镜检，显微镜以放大到160-400倍为宜。每个滴片观察2-3个视野，并注意观察不同层次的精子运动，确定直线前进运动精子占总数的百分比即为精子活力。5.2精子活率计算：在血球计数板上数出死精子数，然后用高温杀死全部精子，数出精子总数。活率=×100%总精子数-死精子数总精子数5.3精子活率低于30%的精液不得使用。安徽省技术监督局1993-12-30批准1994-03-01实施DB34/T089-19936输精6.1输精时机输精时要采取综合判定，符合下述情况即可输精。6.1.1母牛接受爬跨（稳栏）后8-12小时进行第一次输精，间隔8-12小时再进行第二次输精。6.1.2外阴部充血肿胀稍退，下角出现皱纹。6.1.3母牛性欲稍退，不大愿意接受公牛爬跨，阴道流出粘液量减少，呈透明，稍杂一些白色丝状物，粘性较差，牵之成丝。6.1.4子宫劲外口略收缩变硬，内口尚软。6.1.5直肠触摸卵巢时，卵泡直径1-1.50cm，呈小球形，波动明显，弹性较强，有一触即破之感。6.2输精方法6.2.1输精员手臂必须先涂一薄层润滑剂，或套专用长臂手套。6.2.2采用直肠把握子宫颈法输精。输精员手伸入直肠内，摸找并握子宫颈外端，用肘压开阴裂；另一只手将输精器插入阴道，向上倾斜避开尿道口，再转平直向子宫颈口，借助入直肠内的一另手固定和协同动作，将输精器轻稳缓慢地插入子宫颈螺旋皱裂，徐徐把精液输入子宫内或子宫颈5-6cm深处。颗粒冻精输精器抽出子宫颈前不得松开胶球，以免吸回精液。6.2.3细管输精器的使用。将解冻的精液细管棉塞端插入输精器推杆0.5cm深处，剪掉细管封口部，拧紧螺丝，外面套上塑料保护套，拧紧固定圈，使护套固定在输精器上；套管中间用于固定细管的游子，应用细管轻轻推至塑料管的顶端。缓推输精推杆至管内流出少许精液，即可输精。6.2.4一支输精器只限于一头母牛输精使用。6.2.5每次输精剂量：颗粒冻精一粒或细管冻精一支。6.2.6授精结束后按附录A逐头登记，整理归档。DB34/T089-1993附录A牛繁殖情况登记表县乡站（点）年月日发情鉴定输精时间妊娠检查犊牛畜主姓名母牛月龄营养状况发情时间外观卵巢第一次第二次冻精来源品种种公牛号冻精批次输精量解冻后活力日期结果（＋－）预产期实产期胎次性别初生重特征附录B：几项记录的统计方法A．1授精率（受配率）=×100%…………………………………………（1）A．2第一情期受胎率=×100%…………………………………………（2）年度配种母牛数年度终能繁牛数第一情期受胎母牛数第一情期配种母牛数A．3受胎率=×100%……………………………………………………（3）年度受胎母牛数年度授配母牛数A．4繁殖率=×100%……………………………………………………（4）A．5繁殖成活率=×100%………………………………………………（5）本年度内出生犊牛数上年度末适繁母牛数本年度内成活犊牛数上年度末适繁母牛数附加说明本标准由安徽省农业厅提出本标准由安徽省农业厅畜牧局负责起草、省畜禽品种改站协助本标准主要起草人：李赛明、宣依群、胡仁富、吴宓本标准经安徽省农业标准化技术委员会审查通过