4-外植体的选择和灭菌

1一般方法2一、外植体的部位：根、茎、叶、花、果等二、其它：如季节、生理状态和发育年龄等三、外植体的大小第四章外植体的选择和灭菌第一节外植体的选择外植体（explant）：从植物体上分离的用于离体培养的植物体部分。第一部分组织培养技术3外植体种类带芽外植体胚分化器官、组织花粉、雌配子体中的单倍体细胞4原则上可用植物的任何部位;但不同种类植物及同一植物的不同部位对诱导条件反应不同;选择优良种质、增殖能力强的外植体外植体应容易得到应考虑得到无毒苗外植体的部位选择注意：外植体的幼化程度、年龄与着生部位。植物主轴向上的部分生理年龄老易形成花器官.向基部的部分生理年龄小易形成根等器官.幼年组织较老年组织具有较高的形态发生能力5取材季节一般取母株生长旺盛的季节的材料外植体的大小一般外植体越小成活率越低，难启动或启动后仅产生愈伤组织;越大，消毒越困难大小适中.6第二节外植体的消毒一、常用消毒剂二、消毒方法7一、常用消毒剂乙醇：70％－75％；表面灭菌、浸润；30s升汞（HgCl2)：0.1%－0.2%；表面灭菌；3－10min；残留多时导致坏死（要5次以上无菌水冲洗）；注意环境污染次氯酸钠：2％－12％；表面灭菌；15－30min；次氯酸钙（漂白粉）：10％－20％；表面灭菌；20－30min；过氧化氢：6％－12％；表面灭菌；5－20min；其他：1％－2％溴水，5－10min；1％AgNO3，15－30min；8吐温的使用：0.1%，表面活性剂，浸润作用无菌水:在用灭菌剂之前和之后均需用无菌水冲洗数遍.9二、外植体的灭菌方法具体的灭菌方法和步骤:依不同的材料而不同P61：图4-1植物外植体消毒的一般程序10第三节外植体的接种和培养接种室需预先消毒；外植体接种应在接种室进行；培养可采用固体培养和液体培养两种形式；一、接种室的消毒空间——紫外线；甲醛+高锰酸钾；超净台——紫外线+75%乙醇；工作人员——清洗+新洁尔灭浸泡+75%乙醇二、外植体的接种擦—冲—开—灭—切—烧—取—烧—夹—放—烧—包11温度：25±2℃；光照：包括光照、光质和光周期；培养基的pH:5.6-6.0;但若培养基中含有铁离子，pH应在5.2以下.湿度:培养容器的湿度常保持在100%;培养室的湿度70-80%.气体:氧;二氧化碳;乙烯等.三、培养条件12第四节污染原因和预防措施外植体预先培养避免阴雨天在田间采集外植体对外植体内部有污染的材料，要取材料的深层分生组织