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化学分析方法验证与方法确认鄢国强CNAS主任评审员术语和定义方法验证verificationofmethod阐明实验室的检测条件确实适合于方法的过程。是实验室对拟采用的标准检测方法的操作能力进行验证，以证实实验室具备检测标准所要求的各项资源保证和掌握标准检测的能力要求。方法确认validationofmethod核实一种方法是否适合分析目的的过程。是对实验室所制订的非标准方法、实验室设计（制定）的方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法通过实验，优化技术操作，以确认所制订的非标准方法、实验室设计（制定）的方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法所获得的检测结果具有科学、准确、有效和灵敏的特性，并能满足检测要求的评价过程。筛选方法screeningmethods具有处理大量（高通量）样品的能力，用于检测一种物质或一组物质在所关注的浓度水平上是否存在的方法。这些方法用于筛选大量样品可能的阳性结果，并用来避免假阴性结果。此类方法所获得的检测结果通常为定性结果或半定量结果。确证方法confirmatorymethods能提供全部或部分信息，以明确定性，在必要时可在关注的浓度水平上进行定量的方法。2018-09-012准则对方法验证的要求7.2.1.5实验室在引入方法前，应验证能够正确地运用该方法，以确保实现所需的方法性能。应保存验证记录。如果发布机构修订了方法，应在所需的程度上重新进行验证。2018-09-013方法验证实验室使用的化学检测标准必须适合检测目的，即方法的适用范围、方法灵敏度和准确度等技术指标和实验室执行标准的能力能满足客户的检测要求。实验室首次采用的标准方法，在应用于样品检测前应证实实验室是否具备准确操作标准的人员、设备、标准物质、环境条件和质量控制手段等资源条件，并对方法的技术要素进行试验确认，至少应验证标准方法的灵敏度、正确度、精密度是否满足检测要求。当实验室使用新的分析人员、新的设备或者新的基质时必须进行验证。至少在方法使用前用已知浓度的样品或有证标准物质进行验证，以证实实验室对标准方法的操作能力达到所期望的准确度和精确度。当实验室使用标准方法时。如果缺少指导书可能影响检测和/或校准结果，实验室可对所有相关设备的使用和操作、检测和/或校准样品的准备（或者二者兼有）、关键性操作步骤编制指导书。当所选择的标准方法为国际标准、区域标准时，有必要时应将国际标准、区域标准翻译成实验室相关人员能理解的文字表述，以作业指导书的方式来指导检测人员的操作。标准方法在投入使用前应经过实验室技术管理层的审批。当检测标准发生变更，需要对新标准进行审查和评价，如果标准的技术要求未发生变化，只要实验室的各项资源条件未发生变化，即可使用新版标准方法，并可向认可机构申请标准变更。如果新版标准的技术要求发生变化，则必须按照新标准投入使用前的验证要求重新对新标准的操作能力进行验证。标准方法发生变更时，如技术要求未发生变化，则如新标准的技术要求发生变化，则应重新进行方法验证，再向认可机构申请标准变更。2018-09-014典型方法验证参数的选择定量分析-方法验证过程中关键的参数应当取决于方法的特性和可能用到的样品基质的检测范围，至少应当如通过加标回收和重复试验等方法测定正确度和精密度。对于痕量化学分析实验室，实验室还应确保实现适当的LOD和LOQ。定性分析-定性分析的精密度通常表示为假阳性或假阴性率，其可以用不同的浓度水平来确定。实验室进行方法验证可分析一组阴性或阳性加强样品。如对每个不同的样品基体，两个重复样品在三个含量水平上加以分析。建议的含量水平为空白（无分析物）、低浓度（接近方法的最低适用范围）和高浓度（接近方法的最高适用范围），可用标准添加法得到适当的浓度含量。假阳性或假阴性率应与方法确认的数据相当，才能证明实验室有能力使用该方法。2018-09-015方法验证待评估性能参数定量方法定性方法检出限*√-定量限√-灵敏度√√选择性√√线性范围√-测量区间√-基质效应√√精密度（重复性和再现性）√√正确度√-稳健度--测量不确定度(MU)（1）-注：*：被测物的浓度接近于“零”时需要；√：表示正常情况下需要的性能参数；-：表示正常情况下不需要；（1）：表示如果一个公认测试方法中对不确定度的主要影响因素贡献值和对结果的表达方式有要求，则实验室应该满足于ISO/IEC17025或同类标准的要求。2018-09-016序计划内容责任人（部门）期限执行结果及说明1立项研讨主持人：技术负责人参加人：技术骨干是否需要立项要2标准收集负责人：3熟悉标准负责人：4人员培训负责人：参加者：5设备配备负责人：6设施与环境条件配置负责人：7编制检验检测规范负责人：8编制原始记录表格负责人：9编制检验检测报告格式负责人：10检验检测样品准备负责人：11开展检验检测负责人：参加者12测量不确定度评估负责人：参加者13原始记录编写人：校核人：14检验检测报告编写人：审核人：批准人：15新项目评审负责人：参加者16参加CNAS能力验证计划负责人：参加者：CNCA,CNAS网上有能力验证计划新项目开展计划表QR-06-0504-2-C/0项目名称：XXX标准方法编号：新项目评审表新项目名称：依据标准：评审结论：检验检测机构经过对“人、机、料、法、环、测”六个因素的评价，并按标准进行了2次完整的检验检测，出具了2份完整典型报告，证明检验检测机构有能力按该标准方法开展检验检测。评审内容：1.收集标准：2.熟悉标准：3.人员培训：4.设备配备：5.设施与环境条件配置：6.编制检验检测规范：7.编制原始记录表格：8.编制检验检测报告格式：9.检验检测样品准备：10.开展检验检测：11.测量不确定度评估12.原始记录：13.检验检测报告。14.参加CNAS能力验证计划技术负责人年月日2018-09-017QR-06-0504-2-C/0编号：准则对方法确认的要求7.2.2.1实验室应对非标准方法、实验室制定的方法、超出预定范围使用的标准方法、或其他修改的标准方法进行确认。确认应尽可能全面，以满足预期用途或应用领域的需要。注1：确认可包括检测或校准物品的抽样、处置和运输程序。注2：可用以下一种或多种技术进行方法确认：a）使用参考标准或标准物质进行校准或评估偏倚和精密度；b）对影响结果的因素进行系统性评审；c）通过改变控制检验方法的稳健度，如培养箱温度、加样体积等；d）与其他已确认的方法进行结果比对；e）实验室间比对；f）根据对方法原理的理解以及抽样或检测方法的实践经验，评定结果的测量不确定度。2018-09-018方法确认实验室需对非标准方法、实验室设计（制定）的方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法进行确认的程序制订相应的文件，以规范方法确认的程序及确认要求。实验室可在综合考虑成本、风险和技术可行性基础上，并根据预期的用途来进行方法确认。实验室进行方法确认的内容应完整，包括但不限于以下内容：方法适用范围、结果的不确定度、检出限、方法的选择性、线性、重复性限和/或复现性限、抵御外来影响的稳健度和/或抵御来自样品（或测试物）基体干扰的交互灵敏度。准确度确认可采用与标准物质、质量控制样、参考方法、或其他常规方法进行比对及参加能力验证等方法。通过评价方法的相关特性用客观证据证明方法能够满足测试要求。实验室应经过技术条件优化确认非标准方法、实验室设计（制定）的方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法的科学性、准确性、有效性和灵敏性。任何对标准方法的偏离，都须确认,即使所采用的替代技术可能具有更好的分析性能。实验室经过确认的方法所得数据的范围、准确度和灵敏度应满足客户的需求。2018-09-019实验室在建立非标方法或偏离标准方法的研究过程中，应包括以下内容或相关技术组合：（1）优化样品前处理条件和仪器分析条件；（2）分析干扰因素及其对测试的影响，确定排除干扰的方法；（3）给出方法的线性回归方程、相关系数和线性范围；（4）对不同浓度水平的样品进行大于6次的重复测定，计算精密度、相对标准偏差或变异系数，确认方法的重复性；（5）加标回收试验；（6）确定方法的测定低限；（7）对不同类型、不同浓度的实际样品进行测定，以确定方法的适用范围；（8）与标准方法或公认方法进行比较，两者测定结果经t检验应无显著性差异；（9）使用标准物质或实物标样证明方法的准确性或有效性；（10）不同实验室中进行方法的再现性试验。2018-09-0110实验室通过试验方法的检出限、精密度、回收率、适用的浓度范围和样品基体等特性来对检测方法进行确认，还应包括对测量不确定度的评估。偏离标准的方法应经方法确认，并通过方法比对证明偏离的有效性。方法应经方法确认，并通过下列方法的比对确认:a)通过对标准方法的偏离(如试验条件适当放宽，对操作步骤适当简化)，以缩短检测时间，且这种偏离已被证实对结果的影响在标准允许的范围之内；b)对标准方法中某一步骤采用新的检测技术，能在保证检测结果准确度的情况下，提高效率，或是能提高原标准方法的灵敏度和准确度；c)由于实验室条件的限制，无法严格按标准方法中所述的要求进行检测，不得不作偏离，但在检测过程中同时使用标准物质或参考物质加以对照，以抵消条件变化带来的影响。实验室使用非标准方法时应按照实验室质量体系文件的规定编写作业指导书或标准操作规程，在投入使用前应经过实验室技术领导层的审批并获得客户的同意。2018-09-0111确认方法特性参数的选择化学检测方法的技术验证应对实验室完成的方法检出限、方法线性范围、精密度、回收率进行测试，以验证实验室的各项资源对标准方法的满足程度。当使用非标准方法、实验室设计（制定）的方法、超出其预定范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法进行检测前，除对测试条件的优化，还应进行方法检出限、方法线性范围、精密度、回收率确认试验，还需要对方法适用的浓度范围、样品基体和测量不确定度等特性进行确认。2018-09-0112方法类型检出限定量限正确度重复性再现性特异性稳健性测定范围定性分析方法S-----C-----定量分析方法S--C-注：“S”=筛选方法（Screeningmethods）；“C”=确证方法（Confirmatorymethods）；“”=必选参数。2018-09-0113实验室在选择确认样品基质时，应注意样品的代表性和典型性。对于样品基质差异会导致方法的技术参数发生显著变化时，应分别进行确认。方法的预期用途决定了对方法性能的具体要求，确认参数的选择应根据方法的预期用途加以确定。对于不同类型的化学检测方法，典型参数的选择见表1。表1：典型确认参数的选择分析方法特性参数的确认要求选择性对于化学分析方法，在有干扰（如：异构体、代谢物、降解产物、内源性物质、基质成分等）的情况下保证检测结果的准确性至关重要。实验室可联合使用下述两种方法检查干扰：分析一定数量的代表性空白样品，检查在目标分析物出现的区域是否有干扰（信号、峰等）；在代表性空白样品中添加一定浓度的有可能干扰分析物的定性和/或定量的物质。原则上，分析方法在没有重大干扰的情况下应具有一定的选择性。2018-09-0114测定范围方法的测定范围通常应当满足以下条件：方法的测定范围应当覆盖方法的最低浓度水平（定量限）和关注浓度水平；至少需要确认方法测定范围的最低浓度水平（定量限）、关注浓度水平和最高浓度水平的正确度和精密度，必要时可增加确认浓度水平；若方法的测定范围呈线性，还需满足“线性范围”条款的要求。2018-09-0115线性范围线性范围通常可参照相关国际标准或国家标准，尽量满足如下要求：采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点（包括空白），浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少以随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多；对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98；对于准确定量方法，线性回归方程的相关系数不低