DB33 T 432-2003 畜禽产品质量安全监督抽查检验细则

77ICS65.020.01B00备案号：14143-2003浙江省地方标准DB33/T432-2003畜禽产品质量安全监督抽查检验细则Testregulationonqualitysafetysupervisionoflivestackandpoultryproducts2003-08-12发布2003-08-15实施浙江省质量技术监督局发布DB33DB33/T432—20032前言为保障人民群众身体健康，全面推进“无公害农产品行动计划”，保证畜禽产品质量安全，指导有关检验机构进行畜禽产品质量安全监督抽查检验工作，特制定本检验细则，作为组织监督抽查的依据。本标准所列的检验项目与法律、法规、规章有不一致时，应以法律、法规、规章的规定为准。本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E为规范性附录。本标准由浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。本标准起草单位：浙江省畜产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：朱聪英、宣士荣、陆春波、周文海、汪刚DB33/T432—20033畜禽产品质量安全监督抽查检验细则1范围本标准规定了畜禽产品的检验项目、检验方法、抽样方法、判定原则及复检。本标准适用于浙江省境内生产、屠宰或销售的畜、禽产品的质量安全监督抽查。本标准不适用于经深加工的畜、禽产品质量安全监督抽查。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.2食品卫生微生物学检验大肠菌群测定GB/T4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB/T5009.12食品中铅的测定方法GB/T5009.15食品中镉的测定方法GB/T14931.1畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留测定方法（高效液相色谱法）GB/T14931.2畜禽肉中己烯雌酚的测定方法NY5029-2001无公害食品猪肉DB33/T307-2001可食性动物组织中盐酸克仑特罗残留量的测定方法DB33/T309-2001动物尿液中盐酸克仑特罗残留量的检测方法3抽检产品和检验项目3.1猪尿样检验项目见表1。表1猪尿样检验项目样品名称检验项目要求盐酸克仑特罗不得检出(检出限0.005mg/kg)猪尿样莱克多巴胺不得检出(检出限0.005mg/kg)注：检验项目可以根据质量安全现状和管理的需要调整3.2畜禽肉类检验项目见表2。表2畜禽肉类检验项目样品名称检验项目要求盐酸克仑特罗（猪肉）不得检出(检出限0.01mg/kg)金霉素（mg/kg）≤0.10（猪肉、羊肉、牛肉）≤1（鸡肉）土霉素（mg/kg）≤0.10氯霉素不得检出(检出限0.01mg/kg)磺胺类(以磺胺类总量计)（mg/kg）≤0.10猪肉、羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉呋喃唑酮≤0.1（鸡肉、兔肉）DB33/T432—20034表2（续）己烯雌酚不得检出(检出限0.05mg/kg)铅（mg/kg）≤0.10≤0.50(猪肉、牛肉)镉（mg/kg）≤0.10沙门氏菌不得检出注1：检验项目可以根据质量安全现状和管理的需要调整注2：磺胺类总量指磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉含量之和3.3畜禽肝脏检验项目见表3。表3畜禽肝脏检验项目样品名称检验项目要求盐酸克仑特罗（猪肝）不得检出(检出限0.01mg/kg)磺胺类(以磺胺类总量计)（mg/kg）≤0.10四环素（mg/kg）≤0.3铅（mg/kg）≤0.10（猪肝）镉（mg/kg）≤0.10（猪肝）畜、禽肝脏沙门氏菌不得检出（猪肝）注1：检验项目可以根据质量安全现状和管理的需要调整注2：磺胺类总量指磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉含量之和3.4蛋类检验项目见表4。表4蛋类检验项目样品名称检验项目要求土霉素（mg/kg）≤0.1≤0.2（皮蛋、咸鸭蛋）呋喃唑酮≤0.1（鸡蛋）磺胺类(以磺胺类总量计)（mg/kg）≤0.1（鸡蛋）铅（mg/kg）≤0.1（鸡蛋、咸鸭蛋）≤0.5（无铅皮蛋）≤2.0（普通皮蛋）镉（mg/kg）≤0.05大肠菌群(MPN/100g)≤100（鸡蛋、咸鸭蛋）≤30（皮蛋）鸡蛋、皮蛋、咸鸭蛋沙门氏菌不得检出注1：检验项目可以根据质量安全现状和管理的需要调整注2：磺胺类总量指磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉含量之和4检验方法DB33/T432—200354.1盐酸克仑特罗4.1.1猪尿样中盐酸克仑特罗：按DB33/T309-2001规定检验。4.1.1.1按DB33/T309-2001中第一篇的规定筛选。4.1.1.2筛选结果为阳性的样品按DB33/T307-2001中第二篇的规定重新检验，结果判定以本次检验结果为准。4.1.2猪肉和肝脏中的盐酸克仑特罗4.1.2.1按DB33/T307-2001中第三篇的规定筛选。4.1.2.2筛选结果为阳性的样品按DB33/T307-2001中第二篇的规定重新检验，结果判定以本次检验结果为准。4.2莱克多巴胺4.2.1按本标准附录A中方法1筛选。4.2.1筛选结果为阳性的样品按本标准附录A中方法1的规定重新检验，结果判定以本次检验结果为准。4.3土霉素、金霉素、四环素4.3.1按本标准附录B的规定筛选。。4.3.2筛选结果为不合格的样品按GB/T14931.1的规定重新检验，结果判定以本次检验结果为准。4.4呋喃唑酮按NY5039-2001中附录A规定检验。4.5氯霉素4.5.1按本标准附录C的规定筛选。。4.5.2筛选结果为阳性的样品按NY5029-2001中附录D的规定重新检验，结果判定以本次检验结果为准。4.6磺胺类4.6.1按本标准附录E的规定筛选。4.6.2筛选结果为不合格的样品按NY5029-2001中附录E的规定重新检验，结果判定以本次检验结果为准。4.7己烯雌酚4.7.1按本标准附录D的规定筛选。。4.7.2筛选结果为阳性的样品按GB/T14931.2的规定重新检验，结果判定以本次检验结果为准。4.8铅按GB/T5009.12规定检验。4.9镉按GB/T5009.15规定检验。4.10大肠菌群按GB4789.3规定检验。4.11沙门氏菌按GB4789.4规定检验。5抽样方法5.1组批产地检验以同一养殖场、同一品种、同一批饲养的动物或动物产品为一抽样批次。屠宰、加工环节的抽样以同群动物或动物产品为一抽样批次。市场抽检以同一产地、同一品种、同一批号的产品为一批次。DB33/T432—200365.2抽样方法采取随机多点抽样，样品数量：猪尿样不少于50ml，肉不少于1000g，肝脏不少于500g(鸡\鸭肝脏不少于6只完整的肝脏)，蛋类不少于20个。混合后平均分成二份。5.3注意事项5.3.1抽样时抽样人员应认真填写《浙江省农产品质量监督检查抽样单》，样品一式二份，其中一份用于检验，一份为备样。抽取的样品应采用干净容器妥善保存，尿样和蛋类应保存于4℃条件下，肉和肝样品于-10℃以下保存。5.3.2抽样后应及时将样品送至相应的检验机构检验。5.3.3抽样单位或人员应采取必要的措施，保证送检样品满足检验需要。6判定原则6.1药物残留项目盐酸克仑特罗、莱克多巴多胺、土霉素、金霉素、四环素、氯霉素、己烯雌酚可按本标准规定用酶联免疫法筛选。筛选结果在规定限量范围内的，单项判定为合格，超出规定范围的，必须按本标准规定的第二种方法重新检验，检验结果仍不合格的，单项判定为不合格；本法检验结果合格的，则单项判定合格。6.2按本标准检验，所有项目均符合标准要求，判定该批样品为合格；有一项或一项以上不符合标准要求的，判定该批样品不合格。7复检检验结果有异议时，可申请复检（微生物指标除外），微生物指标不予复检。复检申请向原检验机构提出。原检验机构应在三个工作日内做出受理或不受理决定。若受检方对不受理决定仍有异议的，可由受检单位向农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。不合格结果以检验结果通知书方式送达受检方。受检方应在收到不合格通知之日起三日内提出复检申请，逾期不予受理。DB33/T432—20037附录A（规范性附录）动物尿样中莱克多巴胺残留量的检测方法方法1酶联免疫色谱法A.1原理利用固相酶联免疫吸附原理，加入尿样及酶标莱克多巴胺抗原（已知抗原）与抗体进行免疫竞争反应，未反应的酶标物在洗涤中被清除，结合了的酶可以由显色物显示出来。用目测法或酶标法来判断。显色的强弱与样品中的莱克多巴胺成反比。A.2试剂与材料美国TCC莱克多巴胺酶联免疫试剂盒或类似产品。A.3仪器与设备A.3.1微孔板酶标仪(450nm)。A.3.2振荡器。A.3.3离心机（0rpm-10000rpm）。A.3.420ul,50ul,100ul,200ul微量加样器及配套吸头。A.3.5冰箱（2℃-8℃）。A.3.6洗板机。A.4测定步骤A.4.1样品处理用PBS缓冲液以1：3稀释尿液样品，4000转离心5分钟，取上清液测定。A.4.2使用之前将所有试剂回升至室温20℃-24℃。A.4.3将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架,标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。A.4.4加入50ul的标准和处理好的样品到各自的微孔中，标准和样品做两个平行实验。A.4.5加入100ul第一抗体溶液到每一个微孔中底部，在37℃孵育30分钟后用工作洗液洗板，最后用洗水纸洗干。A.4.6加入150ul稀释的酶标记的第二抗体37℃孵育30分钟后用工作洗液洗板，最后用洗水纸洗干。A.4.7加入100ul底物液到微孔中，充分混合并在室温孵育3分钟-8分钟。A.4.8加入50ul反应终止液到微孔中，混合好在450nm处测量吸光度值。A.5结果计算以0标准吸光度值为100%计算，折算出各标准和样品的相对吸光度值。标准的吸光度值(或样品)相对吸光度值（%）=---------------------------------x1000标准的吸光度值DB33/T432—20038计算出的标准相对吸光度值绘成为一个对应浓度(ng/L)的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在200ng/L-2000ng/L(ppt)范围内应当成为线性。相对应每一个样品的浓度(ng/L)可以从校正曲线上读出。本方法检测限为500ng/L。A.6注意事项A.6.1试剂盒应放在2℃-8℃保存。A.6.2为分析人员安全，操作时要戴上医用乳胶手套。方法二气相色谱—质谱法测定A.7原理动物尿样中总的莱克多巴胺需要通过β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，本方法仅测定尿样中游离的莱克多巴胺含量。用乙酸乙酯提取后，提取液蒸发至干，用乙酸乙酯溶解后加到SPE-SLH净化柱上，先用乙酸乙酯溶液洗脱除杂，然后用10%乙醇/乙酸乙酯将莱克多巴胺洗脱，洗脱液蒸发至干后，用BSTFA（双三甲基硅基三氟乙酰胺）+1%TMCS（三甲基氯硅烷）衍生，然后用GC/MS法测定OHNHOHOH图A.1标准莱克多巴胺分子结构式A.8试剂莱克多巴胺标准品（纯度大于98%）；甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氨水、无水硫酸钠等均为分析纯；BSTFA（双三甲基硅基三氟乙酰胺）、TMCS（三甲基氯硅烷）。CLE—SLH型SPE净化柱或同等效果的净化柱。莱克多巴胺标准储备溶液（5mg/mL）：准确称取50mg莱克多巴胺于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用。使用时稀释到一定浓度。A.9仪器设备色质联用仪；旋转蒸发仪；A.10试验方法A.10..1样品处理A.10..1.1莱克多巴胺的提取：取10.0mL动物尿样，加10ml乙酸乙酯，振荡萃取，重复2次，有机相过无水硫酸钠在60℃水浴中真空蒸发，氮气吹干。A10.1.2加4.0ml乙酸乙酯溶解剩余物，移2mL到CLE-SLH型SPE净化柱上，然后用10mL乙酸乙酯淋洗除杂，最后用10mL10%乙醇/乙酸乙酯（V：V）洗脱，洗脱液在水浴