DB51T 1211-2011 桔实雷瘿蚊监测与鉴定技术规程

65.020.01B16DB51四川省地方标准DB51/T1211—2011桔实雷瘿蚊监测与鉴定技术规程2011-01-25发布2011-03-01实施四川省质量技术监督局发布DB51/T1211—2011I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语及定义........................................................................14原理..............................................................................15仪器及用具........................................................................16试剂及溶液配制....................................................................27虫情监测..........................................................................28室内检验鉴定......................................................................29结果判定..........................................................................310样品保存及处理...................................................................3附录A（资料性附录）桔实雷瘿蚊的形态特征............................................5附录B（资料性附录）桔实雷瘿蚊形态特征图............................................6附录C（资料性附录）桔实雷瘿蚊为害症状描述..........................................7DB51/T1211—2011II前言本标准分为范围、规范性引用文件、术语及定义、原理、仪器及用具、试剂及溶液配制、虫情监测、室内检验鉴定、结果判定、样品保存及处理等部分。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准起草单位：四川省农业厅植物检疫站，成都市植保植检站，蒲江县植保植检站，丹棱县植保植检站。本标准主要起草人：蒋辉、郭迪金、刘可、谭家兴、余坚志、汪世元、王黎明、唐建中。DB51/T1211—2011I桔实雷瘿蚊监测与鉴定技术规程1范围本标准规定了桔实雷瘿蚊的虫情监测、室内检验鉴定、结果判定、样品处理及标本保存的技术要求。本标准适用于桔实雷瘿蚊的监测与鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB15569-2009农业植物调运检疫规程3术语及定义下列术语和定义适用于本标准。3.1监测Monitoring证实植物检疫状况的官方持续过程。是一种早期发现某种有害生物入侵定居的有效方法。3.2桔实雷瘿蚊ResseliellacitrifrugisJiang属双翅目（Diptera）、瘿蚊科(Cecidomyiidae)、瘿蚊亚科(Cecidomyiinae)、瘿蚊超族(Cecidomyidi)、雷瘿蚊属(Resseliella)昆虫。主要危害柑橘果实，以幼虫随被害果作远距离传播，其卵也可随果实传播，蛹则可随带土苗木进行远距离传播。4原理桔实雷瘿蚊的形态特征、传播途径、生物学特性及受害果实症状，为制定监测鉴定技术规程提供了依据。5仪器及用具5.1仪器体视显微镜、干燥器。5.2用具0号画笔、试管、载玻片、盖玻片、解剖针、表面皿、养虫杯、养虫箱、小型喷雾器。DB51/T1211—2011II6试剂及溶液配制除非另有说明，在检验中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水。6.1试剂试剂包括：——无水乙醇——无水乙酸（冰醋酸）——丁香油——加拿大胶6.2溶液配制溶液配制包括：——二甲苯酚混合液苯酚晶体＋二甲苯，（1＋3）。——10%氢氧化钾溶液称取10g无水氢氧化钾溶于100mL水中。——75%乙醇溶液量取无水乙醇75mL加入25mL水。——90%乙醇溶液量取无水乙醇90mL加入10mL水。——保存液量取无水乙醇75mL加入25mL水，再加入1mL丙三醇混匀备用。7虫情监测7.1监测范围监测范围包括各柑桔生产地、水果市场，重点是柚类和橙类。7.2监测方法7.2.1田间监测7.2.1.1成虫的监测6月上旬到10月上旬，在果园的荫蔽、潮湿处，于果实的背阴面仔细查找桔实雷瘿蚊成虫，发现疑似成虫，收集在75%乙醇溶液中，带回室内鉴定。7.2.1.2幼虫和蛹的监测分别于7月上、中旬的第一次落果高峰、9月中、下旬的第二、三次落果高峰和10月中、下旬第四次落果高峰，在柑桔果园中采集未熟先黄果和落地果，发现符合附录C描述症状的果实，带回室内培养、鉴定。并取落地果周围2cm～5cm深的表土，带回室内检查。7.2.2水果市场监测按GB15569-2009《农业植物调运检疫规程》6.2进行抽样，用肉眼或手持放大镜对样品果实逐个进行检查，发现符合附录C描述症状的果实，带回室内检验鉴定。8室内检验鉴定DB51/T1211—2011III8.1幼虫和蛹的检查将取回的土样用清水漂浮法检查，发现疑似幼虫和蛹，收集在75%乙醇溶液中，待鉴定。8.2成虫培养取一养虫杯，加入经用水煮沸5min处理过的砂土，将采集到的疑似虫果置于砂土表面，然后置于养虫箱中室温下饲养，并用小型喷雾器喷水,进行沙土保湿处理。待成虫羽化后，用0号画笔蘸取75%乙醇溶液将活成虫浸入75%乙醇溶液中，待鉴定。8.3玻片标本制作8.3.1翅脉标本制作从75%乙醇溶液中的成虫标本上取下一翅，在体视显微镜下放于载玻片上，盖上盖玻片即成翅脉标本。8.3.2虫体标本制作8.3.2.1标本软化将标本（成虫、幼虫或蛹）从75%乙醇溶液中取出，用10%氢氧化钾溶液浸渍，或短时加热（100℃下处理2min～5min），或长时冷处理（在酒精里保持6个月以上的标本要12h以上）。在处理过程中观察到标本软化而且部分透明时即停止。将标本转入表面皿中，用解剖针轻轻挤压腹腔内容物，若觉仍然坚硬，应继续浸渍直至软化。8.3.2.2脱水透明将标本转入蒸馏水中5min～10min洗去氢氧化钾，加数滴冰醋酸中和多余的氢氧化钾。把标本依次转入75%乙醇溶液和90%乙醇溶液各10min，并轻轻挤压除去残存的蒸馏水后，再转入无水乙醇中浸2min～5min，最后将标本转入二甲苯酚混合液中1min～2min，虫体即可完全脱水透明。8.3.2.3解剖封片将标本转入无水乙醇中清洗后，移入滴有丁香油的载玻片上，在体视显微镜下把成虫解剖成头、胸（具胸足）和腹三部分，再进行整姿。整姿时，使头正面朝上，触角披向两边；使腹部背面朝上，雄性外生殖器和雌虫产卵管对称地展示出来；使胸部侧面向上，足和剩下的另一翅展示出来。整姿完成后，用三块小圆盖片（7mm～10mm）分别盖住三部分，滴上加拿大胶封片。贴上标签，置于35℃的烘干器上干燥数日。制作幼虫玻片时，使腹面朝上而且应放置对称。8.4鉴定将制作的带有翅脉、头、胸和腹的成虫玻片标本或幼虫玻片标本置于显微镜下，观察其形态特征，按附录A和附录B进行鉴定。9结果判定——成虫符合附录A.1形态特征，可判定为桔实雷瘿蚊。——老熟幼虫和蛹的鉴别作为辅助鉴定手段。DB51/T1211—2011IV10样品保存及处理10.1标本保存10.1.1玻片标本的保存将制好的玻片标本移入标本柜中保存。10.1.2幼虫、蛹标本的保存将采集到的幼虫或蛹用水清洗后，投入60℃（±5℃）热水中浸泡杀死，在室温下冷却后，置于保存液中保存。10.1.3样品处理样品检验完成后，除用作标本保存的样品外，其它样品连同寄主果实及其培养介质进行灭活处理。DB51/T1211—2011VAA附录A（资料性附录）桔实雷瘿蚊的形态特征A.1成虫的形态特征成虫雄虫体长1.6mm～2.3mm，淡红色至褐红色，下颚须4节，稀被刚毛，基节长稍大于宽，4节长度比为0.7：1.7：2：2。触角14节，鞭节二结型；第1、2节愈合；基肿节色较深，环丝1轮，长达中茎中部，基部具1轮刚毛；端肿节具2轮环丝和1轮刚毛，环丝较短，端轮环丝伸达下节基部。翅展1.8mm～1.9mm，翅面有不规则毛斑，仅具纵脉3条，R5脉端微向后弯曲，在翅顶与C脉相接，Cu脉分叉。足长，密被针形鳞片，前中足跗爪分齿，后足跗爪简单无齿，爪间突短于爪。腹部被针形鳞片，第2至6腹板尾毛1排，中部两侧各具1组刚毛，第1至6背板尾毛1排。雄外生殖器基抱节较短，均匀被毛，端抱节较长，基1/3光滑，其余被毛，端齿强；上板V形深裂，被微毛，下板较长，端缘微凹，端1/4被微毛；阳茎略长于下板。雌虫体形比雄虫大，体长2.1mm～2.5mm，触角鞭节圆柱形，端颈短；环丝紧贴。翅长1.8mm～2.3mm。产卵管极长，可翻缩，尾叶分离，长椭圆形，稀被刚毛，其余同雄虫。A.2幼虫的形态特征初孵时白色透明，肉眼难以察觉。成熟幼虫体长3mm～4mm，红色，13节，纺锤形或圆锥形。头壳较短。胸部有三角形红色斑点，末端有4个突起，中胸腹板有“Y”形剑骨片。腹部有浅黄斑，第8腹节尾瘤4对，其中1对无毛，大型，圆锥形。A.3卵的形态特征卵长椭圆形，微小，初呈白色透明，孵化前卵内出现红色点状。A.4蛹的形态特征被蛹，长2.7mm～3.2mm，外被褐黄色丝茧，体红褐色，近羽化时呈黑褐色，头顶具分叉的额刺1对；雌蛹足达腹部第5节。雄蛹足较长，达腹部第6节。DB51/T1211—2011VIBB附录B（资料性附录）桔实雷瘿蚊形态特征图桔实雷瘿蚊各虫态形态特征图1、雌成虫2、雄成虫3、蛹4、雌翅5、雌平衡棒6、卵7、幼虫8、雌触角9、雄触角（选自倪朝选等《桔实雷瘿蚊发生及防治研究初报》）DB51/T1211—2011VIICC附录C（资料性附录）桔实雷瘿蚊为害症状描述桔实雷瘿蚊成虫多产卵于果实背阴处的蒂部、脐部缝隙处、果间交接处的幼果皮层，卵散产或聚生，产卵处常为极细小的愈合硬结点，用手持放大镜很难观察到，体视显微镜下观察受害果实，在产卵部位可见到类似擦伤的疤痕，幼虫一经孵化，即开始取食果实白皮层，沿果心柱潜食，将白皮层蛀成隧道，横剖可见明显幼虫蛀食隧道，初期水浸状，后期蛀道变褐有红色粉末状物，不取食果肉和瓤瓣。幼果期受害的果实的蒂部周围表现出针眼状的浅黄症状，随着虫龄增大，被害果的被害部果皮皱缩呈黑褐色，常出现龟裂，外部呈现不均匀的未熟先黄，然后脱落、腐烂。_________________________________DB51/T1211—2011VIII