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ICS67.080.10B31中华人民共和国农业行业标准NY／T2010—2011柑橘类水果及制品中总黄酮含量的测定Determinationoftotalflavonoidsincitrusfruitsandderivedproducts2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T2010—2011前言本标准按照GB／T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC／TC501)归口。本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：焦必宁、赵其阳、王成秋、苏学素。ⅠNY/T2010—2011柑橘类水果及制品中总黄酮含量的测定1范围本标准规定了柑橘类水果及制品中总黄酮含量的比色检测法。本标准适用于柑橘类水果及制品中总黄酮含量的测定。本标准总黄酮的定量测定范围：0.8mg／L～100mg／L。本标准总黄酮的定量限：0.8mg／kg。本标准总黄酮的检出限：0.3mg／kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的黄烷酮类（橙皮苷、新橙皮苷等）与碱作用,开环生成2，6-二羟基-4-环氧基苯丙酮和对甲氧基苯甲醛；在二甘醇环境中遇碱缩合生成黄色橙皮素查耳酮，其生成量相当于橙皮苷的量；在波长420nm处比色测定吸光度，扣除本底后，与标准曲线比较定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB／T6682规定的三级水。4.1氢氧化钠溶液(4.0g／L)：称取4.0g氢氧化钠于烧杯中,用水溶解，转入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.2氢氧化钠溶液(160g／L)：称取16.0g氢氧化钠于烧杯中，用水溶解，转入100mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.3柠檬酸溶液(200g／L)：称取200g柠檬酸于烧杯中，用水溶解,转入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.4一缩二乙醇（二甘醇）溶液(C4H10O3，9＋1)：量取900mL二甘醇，加入100mL水，摇匀。4.5试剂空白溶液：量取20mL氢氧化钠溶液(4.1)于50mL烧杯中，用柠檬酸溶液(4.3)调节pH至6.0，转入100mL容量瓶中，用水定容。4.6橙皮苷标准品（C28H34O15，CAS号520-26-3，纯度大于99.0%）。4.7橙皮苷标准溶液(200mg／L)：称取20.0mg橙皮苷，置于50mL烧杯中，加20mL氢氧化钠溶液(4.1)，待其完全溶解后，用柠檬酸溶液(4.3)调节pH至6.0，转入100mL容量瓶中，用水定容。此标准溶液需现用现配。5仪器和设备5.1可见分光光度计。5.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。5.3组织捣碎机。1NY/T2010—20115.4酸度计：精度到0.1pH单位。5.5恒温水浴：温控±1℃。6分析步骤6.1试样制备6.1.1果实样品，取可食部分按四分法缩分后将其切碎，放人组织捣碎机中匀浆后取样。6.1.2果酱、果汁及饮料样品，充分混匀后直接取样。6.1.3罐头样品，按四分法进行缩分后，放入组织捣碎机中匀浆后取样。6.1.4果脯蜜饯类，按四分法进行缩分后，将其切碎充分混匀后取样。6.2提取称取两份平行试料（一般果皮5g，果肉、橘子罐头及果脯蜜饯类5g～10g，原汁、浓缩汁2g～5g，果汁饮料20g～50g；精确到0.01g）于100mL烧杯中，加入10mL氢氧化钠溶液(4.1)，用氢氧化钠溶液(4.2)调节pH至13.0；摇匀，静置30min后，再用柠檬酸溶液调节pH至6.0，转移到100mL容量瓶中，定容；过滤，收集滤液，备用。6.3标准工作曲线准确吸取0mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL橙皮苷标准溶液(4.7)于六支10mL具塞试管中，用试剂空白液(4.5)定容至5.00mL，摇匀；再依次准确加入5mL二甘醇溶液(4.4)与0.1mL氢氧化钠溶液(4.2),摇匀,配制成0mg／L、20.0mg／L、40.0mg／L、60.0mg／L、80.0mg／L和100mg／L系列标准溶液。将各试管置于40℃水浴中保温10min;取出，在冷水浴中冷却5min。以零标准溶液调零，在波长420nm处测定各标准溶液的吸光度；绘制标准曲线或计算线性回归方程。6.4测定吸取1.00mL～5.00mL试液(6.2)于10mL具塞试管中，用试剂空白溶液定容至5.00mL，准确加入5mL二甘醇溶液，摇匀后加0.1mL氢氧化钠溶液(4.2)，摇匀；同时吸取一份等量的试液，不加氢氧化钠溶液，作为本底空白。将各试管置于40℃水浴中保温10min；取出，在冷水浴中冷却5min。以本底空白溶液调零，测定试液吸光度，根据标准曲线求出试样溶液的总黄酮质量浓度。7结果计算试样中总黄酮的含量以橙皮苷的质量分数w计，数值以毫克每千克(mg／kg)计，按式(1)计算：1000100010010×××××=Vmwρ……………………………(1)式中：P——在工作曲线上查出的试液中橙皮苷的质量浓度，单位为毫克每升(mg／L)；V——测定时吸取试液的体积，单位为毫升(mL)；m——试料称取质量，单位为克(g)；10——显色定容体积，单位为毫升(mL)；100——试料提取体积，单位为毫升(mL)。计算结果保留三位有效数字。8精密度8.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。8.2再现性2NY/T2010—2011在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。3