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ICS67.080.10X24中华人民共和国农业行业标准NY/T2011—2011柑橘类水果及制品中柠碱含量的测定Determinationoflimoninincitrusfruitsandderivedproducts2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T2011—2011前言本标准按照GB／T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC／TC501)归口。本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：焦必宁、赵其阳、王成秋、苏学素、付陈梅。ⅠNY/T2011—2011柑橘类水果及制品中柠碱含量的测定1范围本标准规定了柑橘类水果及其制品中柠碱含量的液相色谱测定方法。本标准适用于柑橘类水果及其制品中柠碱含量的测定。本标准定量测定范围：1.0mg／L～200mg／L。本标准定量限：0.7mg／kg。本标准检出限：0.2mg／kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的柠碱用有机溶剂提取,经浓缩、定容、离心、微孔滤膜过滤后,高效液相色谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和GB／T6682规定的一级水。4.1二氯甲烷（CH2Cl2，CAS号1975-09-2）。4.2甲醇(CH3OH，CAS号67-56-1)。4.3乙腈(CH3CN，CAS号1975-05-8)。4.4柠碱标准品(C26H30O8，CAS号1180-71-8，纯度大于99.0%)。4.5柠碱标准储备溶液：称取5.0mg(精确到0.1mg)的柠碱品(4.4)，用甲醇(4.2)溶解定容至10mL，配制成质量浓度为0.50mg／mL标准储备溶液，于-20℃冰箱内贮存。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器(UV)。5.2分析天平：感量为0.01g和0.0001g。5.3离心机：转速不低于10000r／min。5.4组织捣碎机。5.5旋转蒸发仪。5.6超声波清洗器。5.7离心管：1.5mL。5.8滤膜：0.45µm，有机相。6分析步骤6.1试样制备1NY/T2011—20116.1.1果实样品，取可食部分按四分法缩分后将其切碎，放入组织捣碎机中匀浆后取样。6.1.2果酱、果汁及饮料样品，充分混匀后直接取样。6.1.3罐头样品，按四分法进行缩分后，放入组织捣碎机中匀浆后取样。6.1.4果脯蜜饯类，按四分法进行缩分后，将其切碎充分混匀后取样。6.2提取净化平行称取两份试料,每份试料10g（精确到0.01g）于50mL烧杯中,加10mL二氯甲烷(4.1)，超声萃取10min,分液,有机相转入50mL蒸馏瓶中,残渣再加10mL二氯甲烷(4.1)，超声萃取10min，合并有机相于蒸馏瓶中，40℃下减压蒸馏至近干，用1.00mL甲醇(4.2)溶解，转入1.5mL的离心管中，离心，上清液过滤膜(5.8)，得到待测液。6.3仪器参考条件色谱柱：C18色谱柱(粒度5µm，4.6mm×250mm)或同等性能的色谱柱。柱温：30℃。进样量：10µL。检测波长：210nm。流动相：见表l。表1流动相梯度洗脱程序时间min流速mL／minA相（水）%B相（乙腈）%1.006535161.006535171.003070251.003070261.006535351.0065356.4标准工作曲线取柠碱标准储备溶液(4.5)用甲醇逐级稀释，得到质量浓度分别为1.0mg／L、5.0mg／L、10mg／L、25mg／L、50mg／L、100mg／L和200mg／L的标准工作溶液,按6.3进行测定(色谱图参见附录A)。以柠碱质量浓度为横坐标，相应的积分峰面积为纵坐标，计算标准曲线或求线性回归方程。6.5测定做两份试料的平行测定。取10μL试样溶液和相应的标准工作溶液顺序进样，以保留时间定性，以色谱峰面积积分值定量，试样溶液中柠碱响应值均应在定量测定范围之内。6.6空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行操作。7结果计算试样中柠碱的含量以质量分数w计，数值以毫克每千克(mg／kg)计，按式(1)计算：10001000Vwmnρ××=××………………………………………………(1)式中：ρ——样液中柠碱测定质量浓度，单位为毫克每升(mg／L)；V——样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m——试料质量，单位为克(g)；n——稀释倍数。2NY/T2011—2011计算结果保留三位有效数字。8精密度8.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。8.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。3NY/T2011—20114