NYT 2032-2011 农作物优异种质资源评价规范 梨

ICS67.080.10B31中华人民共和国农业行业标准NY／T2032—2011农作物优异种质资源评价规范梨Evaluatingstandardsforeliteandraregermplasmresources—Pear(PyrusL.)2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布NY／T2032—2011前言本标准按照GB／T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC／TC501)归口。本标准起草单位：中国农业科学院茶叶研究所、中国农业科学院果树研究所、湖北省农业科学院果树茶叶研究所。本标准主要起草人：曹玉芬、胡红菊、江用文、田路明、田瑞、董星光、杨晓平、熊兴平。ⅠNY／T2032—2011农作物优异种质资源评价规范梨1范围本标准规定了梨属(PyrusL．)优异种质资源评价的术语定义、技术要求、鉴定方法和判定。本标准适用于梨属(PyrusL．)优异种质资源评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB／T6194水果、蔬菜可溶性糖测定法GB／T12456食品中总酸的测定NY／T1307农作物种质资源鉴定技术规程梨NY／T1388梨果肉中石细胞含量的测定重量法3术语和定义NY／T1307中界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1优良种质资源elitegermplasmresources主要经济性状表现好且具有重要价值的种质资源。3.2特异种质资源raregermplasmresources性状表现特殊的、稀有的种质资源。3.3优异种质资源eliteandraregermplasmresources优良种质资源和特异种质资源的总称。4技术要求4.1样品采集按NY／T1307的规定执行。4.2鉴定数据每个性状至少应在同一地点进行3年的重复鉴定。性状观测值取其3年平均值进行判定。4.3指标4.3.1优良种质资源指标优良种质资源指标见表1。表1优良种质资源指标序号性状指标1单果重秋子梨≥50g；白梨、砂梨、西洋梨≥150g2汁液多（参照种质：砀山酥梨*）3可溶性固形物含量早熟种质≥11%;中熟种质≥12%；晚熟种质≥13%1NY／T2032—2011表1(续)序号性状指标4石细胞含量每百克果肉石细胞含量≤0.5g5果心大小果心横径与果实横径比值＜1／36贮藏性贮藏期≥120d7始果年龄≤3年*提供参照种质的信息是为了方便本标准的使用，不代表对该种质的认可和推荐，任何可以得到与参照种质结果相同的种质均可作为参照样品。4.3.2特异种质资源指标特异种质资源指标见表2。表2特异种质资源指标序号性状指标l树姿下垂2节间长度≤2.0cm3花冠直径≥5.0cm4花瓣层数双层以上5单果重≥500g6果面颜色全红7果肉颜色红色8香气浓（参照种质：南果梨*）9种子数量010果实发育期≤80d11自花结实率≥30%12可溶性糖含量≥12.5%13可滴定酸含量≥1.5%14褐变度OD值≤0.0315石细胞含量每百克果肉石细胞含量≤0.05g16染色体数2n≠3417梨黑星病抗性病情指数(SI)＜10.018梨黑斑病抗性病情指数(BI)＜10.019梨腐烂病抗性发病率(x)＜10.020梨轮纹病抗性病情指数(RI)＜5.021耐盐性盐害指数(SI)＜10.022耐旱性旱害指数(DI)＜20.023耐涝性涝害指数(WI)＜20.0*提供参照种质的信息是为了方便本标准的使用，不代表对该种质的认可和推荐，任何可以得到与参照种质结呆相同的种质均可作为参照样品。5鉴定方法5.1树姿按NY／T1307的规定执行。5.2节间长度按NY／T1307的规定执行。5.3花冠直径按NY／T1307的规定执行。5.4花瓣层数2NY／T2032—2011在盛花期，观察记载发育正常的花朵花瓣的层数。5.5单果重按NY／T1307的规定执行。5.6果面颜色在果实成熟期，选取10个典型果实，用标准比色卡按最大相似原则确定果面颜色。5.7果肉颜色在果实成熟期，选取典型果实，将果实切开，用标准比色卡按最大相似原则确定果面颜色。5.8汁液按NY／T1307的规定执行。5.9香气按NY／T1307的规定执行。5.10果心大小按NY／T1307的规定执行。5.11种子数量在果实成熟期，从树体的不同方位，随机选取10个典型果实，将果实切开取出种子,计数每个果实种子数量，计算平均每个果实种子数目。5.12果实发育期盛花期至果实成熟期所经历的天数。5.13自花结实率于大蕾期，对100个花序进行套袋；落花后4周摘袋，调查统计花序坐果的百分率。5.14可溶性固形物含量在果实成熟期，从树体的不同部位随机取鲜果20个。按NY／T1307的规定测定可溶性固形物。5.15可溶性糖含量在果实成熟期，根据果实大小，从树体的不同方位随机取鲜果20个。按GB／T6194的规定测定可溶性糖含量。5.16可滴定酸含量在果实成熟期，根据果实大小，从树体的不同方位随机取鲜果20个。按GB／T12456的规定测定可滴定酸含量。5.17褐变度参见附录A。5.18石细胞含量按NY／T1388的规定执行。5.19始果年龄按NY／T1307的规定执行。5.20染色体数参见附录B。5.21梨黑星病抗性按NY／T1307的规定执行。5.22梨黑斑病抗性按NY／T1307的规定执行。3NY／T2032—20115.23梨腐烂病抗性按NY／T1307的规定执行5.24梨轮纹病抗性按NY／T1307的规定执行5.25耐盐性参见附录C。5.26耐旱性参见附录D。5.27耐涝性参见附录E。5.28贮藏性参见附录F。6判定6.1优良种质资源符合表1中7项指标中任意5项以上（含5项）指标的梨种质资源。6.2特异种质资源符合表2中任意1项以上（含1项）指标的梨种质资源。4NY／T2032—2011附录A（资料性附录）梨种质资源果实褐变度测定方法A．1试剂与材料A．1.1试剂90%乙醇。A．1.2材料梨成熟的果实。A．2仪器A．2.1紫外可见分光光度计：波长范围200nm～l000nm。A．2.2高速组织捣碎机：转速10000r／min～12000r／min。A．2.3离心机：转速10000r／min～12000r／min。A．2.4电子天平：精密度0.001g。A．2.5移液器：1000µL～5000µL。A．2.6量筒：100mL。A．3采样于果实成熟期,选择生长势中等、产量较一致的植株10株，根据果实大小，从树体的不同方位随机取鲜果10个～20个（单果重＞200g取10个果实,50g＜单果重≤200g取15个果实，单果重≤50g取20个果实）用于测定。A．4分析步骤去掉果皮,采用四分法称取果肉50g，加入100mL蒸馏水，放入高速组织捣碎机捣碎，将匀浆离心20min;静置30min后取上清液10mL，加入90%乙醇15mL，摇匀，离心10min，取上清液。用紫外可见分光光度计，以蒸馏水为空白对照，测定420nm下上清液的OD值。A．5结果计算数值测定重复3次，结果取平均值。计算结果表示到小数点后三位。5NY／T2032—2011附录B（资料性附录）梨种质资源染色体数鉴定方法B．1试剂与材料B．1.1试剂B．1.1.18-羟基喹啉(2mmol／L)：称取0.3g8-羟基喹啉溶于100mL蒸馏水中。溶液避光保存。B．1.1.20.05%秋水仙碱溶液。B．1.1.30.075mol／L氯化钾：称取氯化钾5.592g，置于容量瓶内，加蒸馏水至1000mL。B．1.1.4甲醇冰醋酸固定液：甲醇和冰醋酸按体积3:1配制而成，现用现配。B．1.1.5混合酶溶液：2.5%纤维素酶溶液和2.5%果胶酶溶液1﹕1混合。B．1.1.6磷酸盐缓冲液(0.2mol／LpH6.8)：0.2mol／L的磷酸氢二钠49mL与0.2mol／L的磷酸二氢钠51mL混合而成。B．1.1.7吉姆萨染色液：称取吉姆萨粉末1g,甘油66mL。先将吉姆萨粉末溶于少量甘油中，在研钵内研磨30min以上，至无颗粒为止，再倒入剩余甘油，于56℃恒温箱中保温2h后，再加入66mL甲醇，搅匀后保存于棕色瓶中，即成吉姆萨母液。取吉姆萨母液1mL，加入0.2mol／LpH6.8的磷酸盐缓冲液9mL稀释。B．1.2材料梨幼叶或幼芽。B．2仪器设备B．2.1显微镜。B．2.2眼科镊子。B．2.3刀片。B．2.4载玻片。B．2.5照相机。B．2.6移液器：1000µL～5000µL。B．2.7电子天平：精密度为0.001g。B．2.8容量瓶：50mL、100mL。B．2.9量筒：100mL。B．2.10恒温培养箱。B．2.11酒精灯。B．3采样在新梢生长期，上午采集幼叶或幼芽。B．4分析步骤将采集的幼叶或幼芽，置于0.002mol／L8羟基喹林的0.05%秋水仙碱溶液里浸泡3h～5h，进行6NY／T2032—2011前处理；将材料切碎,约1mm3左右，在0.075mol／LKCl溶液里处理30min;去掉KC1，加入新配制的甲醇冰醋酸固定液固定30min以上；去掉固定液，用蒸馏水冲洗2次～3次，加入2.5%混合酶液，25℃条件下酶解去壁2h～3h；用重蒸水冲洗酶液，材料在重蒸水中停留10min～15min，进行低渗处理；弃去重蒸水，加入新配制的甲醇冰醋酸固定液；涂片，将材料放在预先在冷水中预冷的载玻片上，加一滴固定液，用镊子涂片，火焰干燥；用40﹕1的pH6.8～7.2磷酸缓冲液稀释的Giemsa液染色3h～4h；流水冲洗；空气干燥。B．5结果计算在100倍生物显微镜下观察，取形态清晰，数目完整的分裂相，对单个细胞中分散良好的染色体进行计数。每一份种质计数20个细胞以上。染色体数精确到“条”。7NY／T2032—2011附录C（资料性附录）梨种质资源耐盐性鉴定方法C．1试剂与材料C．1.1试剂NaCl。C．1.2材料试材为种子，处理与对照各100粒～200粒。C．2仪器与设备有遮雨设备的栽培槽。槽底部应保持不渗漏水。土壤质地为砂壤土。C．3采样在果实成熟期，采集待鉴定及对照种子各100粒～200粒，经层积处理，备用。C．4分析步骤将通过层积解除休眠的种子，播种于有遮雨设备的栽培槽中，常规管理，待实生苗长至30cm高时，测定土壤含盐浓度，并向槽内土壤均匀浇人可使土壤盐含量达到0.3%的相应NaCl溶液。以不浇NaCl溶液并含有相同土壤水含量槽的实生苗木为对照组。保持土壤中水的含量和盐的浓度至2个月。目测观察方式，按表C．1分级标准调查记载实生苗木受盐害的状况。3次重复。C．5结果计算C．5.1盐害级别盐害分级按表C．1的标准确定。表C．1盐害分级标准级别012345分级标准与对照无明显区别个别叶缘出现浅褐色多数叶缘出现浅褐色30%以下叶片枯死30%～50%叶片枯死50%以上叶片枯死C5.2盐害指数盐害指数以SI表示，按式(C．1)计算。()1005iixnSIN=×∑………………………………………(C．1)ni——各级盐害株数，单位为个;xi——各级盐害代表级值；N——总株数，单位为个。盐害指数以2次～3次重复测定的平均值计。结果表示到小数点后2位。C．5.3耐盐性8NY／T2032—2011依据盐害指数按表C．2的标准确定耐盐性。表C2耐盐性评价标准级别极强强中等弱极弱分级标准SI＜3030≤SI＜5050≤SI＜6060≤SI＜70SI≥709NY／T2032—2011附录D（资料性附录）梨种质资源耐旱性鉴定方法D．1试剂与材料试材为种子，处理与对照各100粒～200粒。D．2仪器设备有遮雨设备的栽培槽。池底部应保持不渗漏水。土壤质地为砂壤土。D．3采样在果实成熟期，采集待鉴定及对照种子各100粒～200粒，经层积处理，备用。D．4实验步骤将通过层积解除休眠的种子，播种于有遮雨设备的栽培槽中，常规管理，待实生苗长至30cm高时，停止灌水，停水50d后调查旱害情