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ICS67.120X04DB34安徽省地方标准DB34/T1370—2011动物组织中三聚氰胺的残留测定-气相色谱质谱法Determinationmelamineresidueinanimaltissue－Gaschromatographymassspectrometrymethod2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1370—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：张莉、吴蕾、明文庆、刘红云、蔡一杰、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。DB34/T1370—20111动物组织中三聚氰胺的残留测定—气相色谱质谱法1范围本标准规定了用气相色谱质谱法测定动物猪、鸡组织中三聚氰胺残留测定方法。本标准适用于动物猪、鸡组织中三聚氰胺的残留测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样制备猪、鸡的肌肉、肝脏、肾脏等动物组织，去筋后切成小块，制成糜状后，于-18℃以下温度冷冻保存。4原理试样中的三聚氰胺用1％三氯乙酸提取，用阳离子交换柱净化，用N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1％三甲基氯硅烷（TMCS）衍生化，用气相色谱质谱进行定性和定量分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水的规定。5.2三聚氰胺对照品：纯度≥99％。5.3标准储备液：准确称取三聚氰胺对照品，用甲醇配制成1mg/mL的标准储备液，-18℃冰箱保存，有效期90d。5.4标准工作液：量取适量三聚氰胺储备液，用甲醇溶液稀释为0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0µg/mL的标准工作液。4℃冰箱保存，备用，有效期7d。5.5甲醇：色谱纯。5.6三氯乙酸。5.7乙酸铅。5.81％三氯乙酸：称取10g三氯乙酸加水溶解定容至1000mL，混匀。5.95％氨化甲醇：量取5mL氨水，用甲醇定容到100mL。5.10乙酸铅溶液（22g/L）：称取22g乙酸铅加水溶解后定容至1L。5.11甲醇溶液：取甲醇200mL加水800mL，混匀。DB34/T1370—201125.12衍生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）[99+1]。5.13吡啶：色谱纯。5.14固相萃取小柱（MCX）：混合型阳离子交换固相萃取柱，规格60mg/3mL。5.15微孔滤膜：孔径0.25µm，有机相。6仪器设备6.1气相色谱质谱仪。6.2旋转蒸发仪。6.3氮吹仪。6.4离心机，转速不低于4000r/min6.5振荡器。6.6涡旋混合器。6.7分析天平：感量0.0001g，0.001g。6.8鸡心瓶：50mL。6.9离心管：50mL、10mL。6.10固相萃取装置。7测定步骤7.1试样提取称取5g（精确至0.001g）匀浆后的样品，置离心管中，依次加入1％的三氯乙酸18mL和2mL乙酸铅溶液，10000r/min均质1min，振荡20min，12000r/min离心5min。取上清液待用。7.2试样净化MCX柱活化和上样：分别用3mL甲醇，3mL水活化MCX柱，准确移取5mL离心上清液分次上柱。再用3mL水和3mL甲醇洗涤MCX柱，抽近干后用5％氨化甲醇溶液3mL洗脱，收集洗脱液，抽干。洗脱液于氮吹仪上50℃吹干，加甲醇溶液1mL，振荡溶解，摇匀，备用。7.3衍生化取7.2的净化液，用甲醇溶液进行适当稀释，取400μL氮气吹干，加入200μL的吡啶和200μL的BSTFA，混匀，在70℃衍生30min，同时分别取三聚氰胺标准系列(5.3)400μL，氮气吹干，做同步衍生化。待气相色谱质谱测定。7.4气相条件色谱柱：DB-5MS柱，柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm或性能相当的色谱柱。进样口温度：250℃。升温程序：起始温度75℃保持1min，以30℃/min的速率升温至300℃（保持2min）。载气：氦气纯度99.999％。流量：1.3mL／min。进样方式：不分流进样。进样体积：1.0μL。DB34/T1370—201137.5质谱条件样品离子源：EI源。传输线温度：280℃。四极杆温度:150℃。离子源温度:230℃。溶剂延迟:6.9min。EI源轰击能：70eV。选择离子收集模式，收集99、171、327、342m/z的4个碎片离子。8定性定量方法定性方法：样品待测物质与标准品衍生物保留时间的相对标准偏差不大于0.5％。特征离子基峰丰度与标准品相差不大于20％。定量方法：以342，327，171，和99峰面积之和进行校正定量。9结果计算和表述按照下式计算试样中三聚氰胺的含量：21nnmAsVCsAX×××××=...............................(1)式中：X——试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——净化后加入的甲醇溶液体积，单位为毫升（mL）；Cs——三聚氰胺标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）；n1——提取稀释倍数；n2——衍生前稀释倍数。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。10检测方法灵敏度、准确度、精密度10.1灵敏度本方法三聚氰胺的检测限为0.05mg/kg。10.2准确度本方法在添加浓度为0.2mg/kg时，回收率为70％～120％。。10.3精密度本方法的批内变异系数CV≤15％，批间变异系数CV≤20％。DB34/T1370—20114AA附录A（资料性附录）三氯氰胺的气相质谱监测的离子图图A.1三聚氰胺的气相质谱监测的离子图_________________________________