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ICS65.020.30B45DB34安徽省地方标准DB34/T1375—2011鸡蛋中三聚氰胺的残留测定—气相色谱质谱法DeterminationofmelamineresiduesineggsbyGC-MSmethod2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1375—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：李珲、许世富、汤春莲、陶小平、丁作坤、陈文帮。DB34/T1375—20111鸡蛋中三聚氰胺的残留测定—气相色谱质谱法1范围本标准规定了鸡蛋中三聚氰胺的残留检测的气相色谱质谱（GC-MS）测定方法。本标准适用于鸡蛋中三聚氰胺残留的定性定量检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的不少于500g的鸡蛋样品，经过匀浆后装入磨口瓶中在-18℃冰箱保存备用。4原理试样经超声提取、固相萃取净化后，进行硅烷化衍生，衍生产物采用选择离子监测质谱扫描模式（SIM），用化合物保留时间和质谱碎片的丰度比定性，外标法定量。5试剂和材料5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。5.2吡啶：优级纯。5.3乙酸铅。5.4衍生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氯乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）(99+1),色谱纯。5.5乙酸铅溶液：称取22g乙酸铅用水溶解后定容至1L。5.6甲醇水溶液：准确量取50mL甲醇和50mL水，混匀后备用。5.7三氯乙酸溶液：称取10g三氯乙酸，用水溶解并定容至1L，备用。5.8固相萃取柱（SPE）：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg/3mL，或相当者。使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。5.9氨化甲醇溶液：准确量取5mL氨水和95mL甲醇，混匀后备用。5.10微孔滤膜：0.22μm，有机相。5.11氮气：纯度≥99.99％。5.12三聚氰胺标准品：纯度≥99.0％。DB34/T1375—201125.13三聚氰胺标准储备液（1mg/mL）：准确称取100mg（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品，用甲醇水溶液（5.5）溶解并稀释至100mL，摇匀，4℃保存，有效期90d。5.14三聚氰胺工作液（10μg/mL）：准确吸取三聚氰胺标准储备液（5.8）1mL于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液（5.5）定容至刻度，摇匀，4℃保存，有效期30d。5.15三聚氰胺标准溶液：准确移取三聚氰胺工作液（5.13）适量，分别用甲醇水溶液（5.5）稀释为0.00、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00μg/mL的标准溶液，摇匀，4℃保存，有效期7d。6仪器和设备6.1气相色谱-质谱仪（GC-MS）：配有电子轰击电离离子源（EI）。6.2电热恒温箱。6.3分析天平：感量为0.0001g和0.01g。6.4离心机：转速不低于4000r/min。6.5超声波清洗器。6.6涡旋混合器。6.7氮气吹干仪。6.8固相萃取装置。7测定步骤7.1试样提取称取匀浆后的鸡蛋5g(精确至0.01g),于50mL具塞塑料离心管中，加入25mL三氯乙酸溶液（5.6），涡旋振荡30s，再加入15mL三氯乙酸溶液（5.6），超声提取15min，加入2mL乙酸铅溶液（5.4），用三氯乙酸溶液（5.6）定容至刻度，充分混匀后，转移上层提取液至50mL离心管中，4000r/min离心10min，备用。7.2试样净化准确移取7.1项下上清液5mL，至活化好的固相萃取柱（5.7）中，依次用3mL水、3mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽近干后用3mL氨化甲醇溶液（5.8）洗脱，收集洗脱液，50℃水浴氮气吹干。7.3衍生化取7.2项下氮气吹干残留物，加入600μL的吡啶（5.1）和200μL衍生化试剂（5.3），混匀，70℃下反应30min后，放冷后供GC-MS法定性定量检测，同时分别取三聚氰胺标准溶液(5.14)800μL，氮气吹干，做同步衍生。7.4气相色谱-质谱测定7.4.1GC-MS参考条件a)色谱柱：5％苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱，30m×0.25mm（i.d.）×0.25μm，或相当者；b)流速：10mL/min；c)程序升温：70℃保持1min，以10℃/min的速率升温至200℃，保持10min；d)传输线温度：200℃；DB34/T1375—20113e)进样口温度：250℃；f)进样方式：不分流进样；g)进样量：1μL；h)电离方式：电子轰击电离（EI）；i)电离能量：70eV；j)离子源温度：230℃；k)扫描模式：选择离子扫描，定性离子m/z99、171、327、342，定量离子m/z327。7.4.2定量测定待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应对净化液稀释，重新衍生化后再进样分析。7.4.3定性判定以标准样品的保留时间和监测离子（m/z99、171和342）定性，待测样品中4个离子（m/z99、171、327和342）丰度比与标准品的相对离子丰度比相差不大于20％。8结果计算按照下式计算试样中各种药物的含量：1000mAs1000VCsAX×××××=.................................(1)式中：X——试样中各种药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——定容体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法在生鲜乳中的检出限为0.05mg/kg。9.2准确度本方法在添加浓度为0.2mg/kg时回收率均为70％～110％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV％≤10％，批间变异系数CV％≤15％。DB34/T1375—20114AA附录A（资料性附录）色谱图A.1三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子色谱图图A.1三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子色谱图A.2三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子质谱图图A.2三聚氰胺标准溶液衍生物选择离子质谱图（定性离子：m/z99、171、327和342）_________________________________