DB21T 1693-2008 食用菌液体菌种生产技术规程

ICS备案号：辽宁省地方标准DB21DB21/T1693—2008食用菌液体菌种生产技术规程2008-11-28发布2008-12-01实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T1693—2008I目次前言.................................................................................II1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13术语和定义..........................................................................14技术要求............................................................................35接种三级固体种袋（瓶）和栽培袋（瓶）................................................86记录与存档..........................................................................87贮藏运输............................................................................88操作人员培训........................................................................9DB21/T1693—2008II前言本标准的编写原则是依据GB/T1.1－2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》及GB/T1.2－2002《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》而制定的。本标准由大连市质量技术监督局提出。本标准由大连市质量技术监督局归口。本标准由大连春天生物技术有限公司负责起草。本标准主要起草人：李东海、孙建军、韩玉才。本标准属首次发布。DB21/T1693—20081食用菌液体菌种生产技术规程1范围本标准规定了食用菌液体菌种生产厂房设施、生产设备、品种、生产工艺流程、技术要求、储藏运输和操作人员培训。本标准适用于食用菌液体菌种的生产。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验—染色法、培养基和试剂GB5749-2006生活饮用水卫生标准GB9687-1988食品包装用聚乙烯成型品卫生标准GB9688-1988食品包装用聚丙烯成型品卫生标准GB50073-2001洁净厂房设计规范GB/T12728-2006食用菌术语GB150-1998钢制压力容器NY/T528-2002食用菌菌种生产技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1食用菌液体菌种培养器cultivationapparatusforediblefungusliquidspawn也称之为液体菌种发酵罐，是指进行食用菌液体菌种培养的专用设备。要求不锈钢材质，符合GB150—1998钢制压力容器标准。3.2移动式食用菌液体菌种培养器mobilecultivationapparatusforediblefungusliquidspawn指在食用菌液体菌种培养器上安装了可移动的装置，培养器工作时能整体移动，而移动中又不影响培养器的性能。3.3食用菌液体菌种接种器ediblefungus-liquidinterfacetrapinoculator指能将液体菌种从培养器中按无菌操作要求转接到食用菌固体培养基物料上的设备。3.4空气压缩机aircompressor指能为培养器提供压缩空气的设备。3.5空气过滤器airfilter指能对培养器所用空气进行过滤的设备。3.6罐压jar-pressure指食用菌液体菌种培养过程中培养器保持的空气压力，单位：Mpa。DB21/T1693—200823.7通风量ventilationvolume指液体菌种培养过程中每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用V/V（培养基体积/通入空气体积）标示。3.8接种量inoculationamount指接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比标示。3.9液体菌种菌龄periodofliquidspawnrunning指菌种接入培养基开始计算的液体菌种生长发育时间。3.10煮罐boiler指将内置电热棒式培养器加水后，进行高压蒸汽灭菌处理。3.11培养器空消emptyfermentercultivationapparatus指对用外源蒸汽灭菌，尚未加水投料的空培养器进行高压蒸汽灭菌。3.12培养器实消fullfermentercultivationapparatus指对投料后的培养器进行高压蒸汽灭菌。3.13投料feeding指将配置好的培养基投放到培养器中。3.14定容constantvolume指培养器中加入培养料后，加水至所要求体积。3.15排料discharging指从培养器放料口排出培养料。3.16放罐emptypot指培养结束，将液体菌种从培养器内排出，接种到三级固体种袋（瓶）或栽培袋中。3.17摇瓶液体种liquidspawninshakepot指装在玻璃三角瓶内在摇床上恒温振荡培养的液体菌种。3.18固体专用种solidspecialspawn指在玻璃三角瓶或聚丙烯瓶固体培养基内生长的纯食用菌菌丝体培养物。专供接入液体菌种培养器用。3.19起始pH值initialpHvalue指液体培养基配制后尚未接种时的pH值。3.20镜检microscopicexamination指通过显微镜观察食用菌菌丝生长发育状态和有无杂菌污染的过程。3.21加热棒灭菌heatingrodsterilization指用培养器内安置的电加热棒加热灭菌的方法。3.22外源蒸汽灭菌exogenoussteamsterilization指用锅炉蒸汽给培养器灭菌的方法。3.23固体专用种并瓶solidspecialstraincombination指将检验合格的固体专用种按无菌操作要求，转移至装有无菌水的大三角瓶中，充分搅拌呈均匀的液态菌种的过程。3.24死角deadangle指培养器蒸汽灭菌时未能达到彻底灭菌的地方。3.25罐压回零jar-pressurereturningtozeroDB21/T1693—20083指液体菌种培养过程中，培养器内压力回到零点或成负压。3.26除油去湿oil-removalandmoisture-removing指用专用设备将压缩空气中的油污和水分除去。4技术要求4.1技术人员4.1.1液体菌种生产厂应有与液体菌种生产所需的专业技术人员。4.1.2工作人员卫生要求4.1.2.1工作人员应该保持良好的个人卫生，勤洗澡、勤换衣、勤理发、不保留长指甲。4.1.2.2进车间必须穿戴经灭菌的工作服、口罩、鞋、帽。4.1.2.3严禁在车间内吸烟、随地吐痰和乱扔杂物。4.2液体菌种生产厂房厂房设计达到NY/T528-2002标准要求。4.2.1厂址要求食用菌液体菌种生产车间必须建在交通方便，水源和电源充足，无有害气体、烟雾、灰沙，远离垃圾场、畜禽场舍的地方，有硬质路面排水良好的道路。4.2.1.1食用菌液体菌种生产车间必须建在交通方便，水源和电源充足，无有害气体、烟雾、灰沙，远离垃圾场、畜禽场舍的地方，有硬质路面排水良好的道路。4.2.1.2车间地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，有适当的排水坡度（1.0%～1.5%）和良好的排水系统，排水沟必须是圆弧式的明沟。4.2.1.3墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水、易清洗。4.2.1.4门窗应设置防蚊蝇纱网。4.2.1.5车间入口处应设置洗手、消毒和干手设施。4.2.1.6车间安装排气管道或者排风设备。4.2.1.7液体种菌种接种间必须设置缓冲间。4.2.1.8应设置与职工人数相适应的更衣室、浴室、厕所和工作休息室。4.2.1.9车间设封闭式废物桶。4.2.2发酵间按照GB50073-2001洁净厂房设计规范执行。4.2.3接种间按照GB50073-2001洁净厂房设计规范执行。4.2.4固体栽培种的灭菌间、冷却间、培养间符合NY/T528-2002食用菌菌种生产技术规程要求。4.3生产设备与设施4.3.1基本生产设备培养器、空气压缩机、空气过滤器、液体菌种接种器、高压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅炉、净化工作台、恒温摇床、恒温培养箱、冰箱、显微镜、磁力搅拌机、磅秤、天平、酸度计等。在经常停电的地方应有自备电源（发电机）。培养器、高压灭菌锅和蒸汽锅炉应使用经政府有关部门检验合格，符合国家压力容器标准的产品。4.3.2常用生产用具玻璃三角瓶、接种器、接种用火环圈、试管、量杯量瓶、玻璃漏斗、定量定性滤纸、精密pH试纸等生物实验室常规用品。4.3.3基本设施配料间、发菌间、冷却间、接种间、培养间规模要配套，布局合理，要有调温设施。4.3.4化验室和菌种室化验室和菌种室要有相应的实验检测设备和制种用的灭菌设施和常规用具。DB21/T1693—20084于接种器内检验符合放罐标准罐压0.03Mpa温度24℃～26℃通风量1：0.5～1：1.2（v/v）无菌空气除油去湿并瓶检验合格磁力搅拌接种26℃～28℃121℃～123℃高压蒸汽灭菌40min定容投料振荡培养3d～5d经镜检符合标准检验合格液体菌种专用培养基空气摇瓶液体种调制压缩机固体专用种灭菌高压灭菌过滤器冷却培养器液体菌种培养合格液体菌种三级固体种袋（瓶）栽培菌袋液体菌种生产工艺流程图母种4.4培养原料符合NY/T528-2002食用菌菌种生产技术规程要求。4.4.1化学试剂类符合NY/T528-2002食用菌菌种生产技术规程要求。4.4.2生物制剂和天然材料类除符合NY/T528-2002食用菌菌种生产技术规程要求外，水不溶性固体物料要过40目筛。4.5生产品种符合NY/T528-2002食用菌菌种生产技术规程要求和GB/T12728-2006食用菌术语相关规定。应使用经省级以上农作物品种审定委员会登记的品种，并且从具有相应技术资质的供种单位引种且种性清楚。不应使用来源和种性不清或者生产性状未经系统验证的组织分离物作为菌种进入大规模生产。4.6液体菌种生产工艺流程4.7生产过程工艺要求4.7.1容器4.7.1.1母种使用玻璃试管和棉塞，试管18mm×180mm或20mm×200mm，棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。4.7.1.2专用固体种和摇瓶液体种DB21/T1693—20085使用500ml～1000ml、耐126℃高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶。各类容器都应使用棉塞，棉塞应符合4.7.1.1规定；棉塞外要加盖4层纱布，灭菌时纱布外加盖牛皮纸防潮。4.7.2培养基配方4.7.2.1母种培养基一般使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA），特殊种类需加入其生长所需特殊物质，如酵母粉、蛋白胨、麦芽汁、麦芽糖等，但不应过高，严格掌握pH值。固体专用种和摇瓶液体种培养基。4.7.2.2固体专用种和摇瓶液体种培养基按4.4中培养原料的规定，根据当地原料资源和所生产品种的要求，使用适宜的培养基配方，严格掌握含水量和pH值。用水符合GB-5749生活用水标准。4.7.3分装母种培养基的分装量掌握在试管长度的四分