实验2-凝集反应-ELISA(双抗原夹心法)

1免疫学实验课贵阳医学院免疫学教研室21、ABO血型鉴定--玻片凝集反应（1份/1人）2、乙型肝炎病毒表面抗体检测--ELISA法(1份/1人）实验内容3（一）玻片凝集反应已知抗血清与未知颗粒性抗原置于清洁玻片上，在一定的条件下，若两者相对应，则会发生凝集。本方法主要用于抗原的定性分析，如菌种鉴定、ABO血型鉴定等。ABO血型系统45ABO血型鉴定步骤红细胞悬液的制备（用于血型鉴定及ELISA实验）1.取EP管1支，加入5滴生理盐水2.消毒耳垂或手指皮肤3.用采血针采1-2滴血，加入盛有生理盐水的EP管中混匀4.2000rpm，离心3min5.取红细胞悬液用于ABO血型鉴定6.取已加有抗A血清与抗B血清载玻片1张，分别加入待测抗原各1滴，并用牙签混匀。7.置室温5分钟左右观察结果。取上清用于ELISA实验ABO血型鉴定的判断B型抗A型标准血清抗B型标准血清抗A型标准血清抗B型标准血清A型抗A型标准血清抗B型标准血清O型抗A型标准血清抗B型标准血清AB型示意图7注意事项用牙签研磨时，注意防止将抗A血清带到抗B血清中，反之亦然。如果凝集现象不太明显时，可用显微镜观察。8乙型肝炎病毒表面抗体的检测——双抗原夹心ELISA法测定原理采用纯化乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）包被反应板，加入待检标本，当标本中存在抗-HBs时，该抗体与包被HBsAg结合，再加入辣根过氧化物酶标记乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg–HRP），最后形成HBsAg-抗HBs-酶标记抗原复合物，加入底物产生显色反应。9无菌采血，离心2000rpm,3min，取上清作为待测标本(见玻片凝集实验)每孔加入酶标记抗原1滴，37℃孵育30min反应板中各加入待测标本2滴，同时设阴性、阳性、空白对照孔(NS)（反应板已用纯化HBsAg包被）手工洗板，弃液拍干，重复5次每孔加入显色剂A液、B液各1滴，置37℃孵育15分钟每孔加入终止液1滴，混匀目测法：与阳性和阴性对照比较，观察颜色深浅判断结果【步骤】10实验报告玻片凝集反应-ABO血型鉴定酶联免疫吸附试验（双抗原夹心ELISA）