基于网络药理学探讨左归丸治疗早发性卵巢功能不全机制-曾丽华

58第22卷第10期2020年10月辽宁中医药大学学报JOURNALOFLIAONINGUNIVERSITYOFTCMVol.22No.10Oct.，2020基于网络药理学探讨左归丸治疗早发性卵巢功能不全机制曾丽华1，朱玲2，叶金飞1，李茂飞1（1.广州中医药大学，广东广州510405；2.广州中医药大学第一附属医院，广东广州510405）基金项目：国家自然科学基金（81674016）作者简介：曾丽华（1995-），女，湖北荆州人，硕士研究生，研究方向：中医药防治卵巢功能障碍。通讯作者：朱玲（1970-），女，贵州毕节人，教授、主任医师，博士，研究方向：生殖障碍与生殖健康的中医药研究。摘要：目的基于网络药理学分析左归丸治疗早发性卵巢功能不全的有效活性成分，预测其作用靶点，并探讨其潜在作用机制。方法采用中药系统药理学技术平台筛选左归丸的活性成分及预测作用靶点，并在Uniprot数据库搜索靶点基因，在GeneCards数据库、CTD数据库、OMIM数据库筛选出早发性卵巢功能不全的靶点基因，通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络和“药物-活性成分-靶点”网络，通过DAVID数据库对核心靶点进行GO富集分析及KEGG通路富集分析并利用R语言和Cytoscape软件绘图。结果以OB值和DL值两个参数筛选得到83个有效化合物，包括槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、异鼠李素、豆甾醇等。与疾病相关的候选作用靶点共181个，关键靶点涉及细胞肿瘤抗原53（TP53）、RAC-α丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶（AKT1）、转录因子AP-1家族成员（JUN）、肿瘤坏死因子（TNF）。GO富集分析涉及对药物、毒物的应答，基因转录，抑制凋亡等。KEGG通路富集分析显示含靶点数较多的是癌症信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、叉头框蛋白O亚家族信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B通路和丝裂原活化蛋白激酶信号通路。结论研究通过网络药理学系统探讨了左归丸有效成分对应的靶点，以及治疗早发性卵巢功能不全的作用机制，可为今后基础或临床研究提供科学依据。关键词：网络药理学；左归丸；早发性卵巢功能不全中图分类号：R711.75文献标志码：A文章编号：1673-842X(2020)10-0058-08MechanismofZuoguiPillinTreatingPrematureOvarianInsufficiencyBasedonNetworkPharmacologyZENGLihua1，ZHULing2，YEJinfei1，LIMaofei1（1.GuangzhouUniversityofChineseMedicine，Guangzhou510405，Guangdong，China；2.TheFirstAffiliatedHospitalofGuangzhouUniversityofChineseMedicine，Guangzhou510405，Guangdong，China）Abstract：ObjectiveToanalyzetheeffectiveactiveingredientsofZuoguiPillinthetreatment用中医药杂志，2018，34(12)：1523-1524.[5]杨慧文，田会军，何敏，等.针刺配合关节松动术治疗肩周炎的临床探讨[J].中国中医药现代远程教育，2018，16(16)：127-128.[6]国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[M].南京：南京大学出版社，1994.[7]罗杰，冷卫东.系统评价/Meta分析理论与实践[M].北京：军事医学科学出版社，2013.[8]陈长生，徐勇勇.如何进行meta分析[J].中华预防医学杂志，2003，4(2)：66-68.[9]周旭毓，方积乾.Meta分析的常见偏倚[J].循证医学，2002，2(4)：216-20.[10]范宏元，向开维，孙珺，等.刃针结合关节松动术治疗肩关节周围炎的临床疗效[J].中国老年学杂志，2013，33(17)：4286-4288.[11]郭克勤，李常法.刃针结合关节松动术治疗顽固性肩周炎临床研究[J].河北中医药学报，2016，31(1)：38-40.[12]郭艳明，王宁，谭政.滞针刺法联合关节松动术治疗肩关节周围炎88例疗效观察[J].颈腰痛杂志，2016，37(4)：326-328.[13]解涛，侯京山，肖红雨，等.关节松动术结合银质针针刺疗法治疗肩关节周围炎的临床对比研究[J].中华保健医学杂志，2015，17(1)：36-38.[14]孔德聪，黎洪健，陈剑飞.温针灸、运动疗法结合关节松动技术治疗肩周炎的疗效观察[J].中国医药科学，2018，8(2)：42-44，198.[15]李永凤.温针灸配合关节松动术治疗肩周炎46例[J].内蒙古中医药，2011，30(14)：24-25.[16]刘飞，王俊华.电针配合关节松动术治疗肩周炎的临床疗效[J].大家健康：学术版，2014，8(9)：107-108.[17]刘铭，黄礼韬.温针联合关节松动术治疗肩周炎50例临床观察[J].实用医院临床杂志，2014，11(5)：136-138.[18]王育庆，段俊峰，王正和，等.激光针刀配合松动术治疗肩周炎疗效观察[J].颈腰痛杂志，2009，30(3)：282-283.[19]叶红.电针加关节松动术治疗肩周炎疗效观察[J].社区医学杂志，2009，7(12)：42-43.[20]于文欢，张文乾.滞针刺法结合关节松动术治疗肩周炎36例临床观察[J].亚太传统医药，2018，14(8)：157-159.[21]于新虎.针刺结合关节松动术治疗肩周炎的临床疗效观察[J].内蒙古中医药，2016，35(6)：66-67.[22]张慧芳.关节松动术加激发点针刺治疗肩周炎临床疗效观察[J].中国民康医学，2009，21(18)：2231，2280.[23]张新田.温针灸配关节松动术治疗肩周炎118例疗效观察[J].黑龙江医药，2018，31(4)：869-870.[24]赵明华，徐帮杰，赵文华.针刺配合关节松动术治疗肩关节周围炎疗效观察[J].上海针灸杂志，2010，29(1)：31-33.[25]周桂香.肩关节松动术配合温针灸治疗肩周炎的疗效观察[J].医学综述，2011，17(18)：2862-2864.[26]罗慧麟，罗青锋，付贵平，等.热敏灸结合电针治疗良性前列腺增生症的临床疗效观察[J].针灸临床杂志，2016，32(4)：1-3.[27]廖志英，陈婉蓉.温针灸治疗肩关节周围炎的临床效果Meta分析[J].海南医学，2016，27(14)：2382-2384.[28]王成龙，董宝强，曲超，等.针刺结合医用臭氧注射在膝骨性关节炎治疗作用中的系统评价[J].针灸临床杂志，2020，36(2)：60-65.[29]曲超，杨宇峰，石岩，等.血府逐瘀汤治疗糖尿病视网膜病变Meta分析[J].辽宁中医药大学学报，2018，20(9)：184-188.DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2020.10.0165922卷辽宁中医药大学学报早发性卵巢功能不全（Prematureovarianinsufficiency，POI）是指女性40岁以前出现月经稀发或闭经，伴有高水平促性腺激素及低水平雌激素，可导致不孕、围绝经期综合征及心血管事件的发生[1]。随着现代女性工作及生活压力增大，该病发病率呈逐年增长的趋势，极大影响着女性生殖健康。POI的发病机制复杂，受遗传、免疫、医源性损伤等因素的影响，当前文献研究多认为POI发生的本质是卵泡过早过快耗竭[2]。目前西医对于POI的管理以人工周期疗法为主，但不能从根本上治愈POI，停药后往往不能重新恢复卵巢功能，并且长期服用激素类药物容易出现胃肠道反应、体质量增加、头痛、乳胀等不良反应，以及增加乳腺癌及心血管事件的发生风险[3]。因此，对于POI的临床治疗与管理方案有待进一步优化。根据POI的临床表现，将其归属于中医“月经后期”“闭经”“血枯”“不孕症”等范畴。《类经》曰：“肾脉濇者为精伤，为血少……微则为不月。”故POI的基本病机为肾精亏虚，天癸匮源，冲任失养，胞宫无以定期藏泻。补肾填精代表方药左归丸出自《景岳全书·新方八阵》，由金匮肾气丸化裁而来，具有滋阴补肾、填精补髓之功。方中君药熟地黄大补真阴、益精填髓，臣以山茱萸养肝滋肾，山药补脾益阴，配伍龟板胶、鹿角胶血肉有情之品助熟地黄滋阴填精补髓，佐以菟丝子温阳益阴，合鹿角胶在全方中寓有“阳中求阴”之意。再佐以枸杞子、川牛膝补益肝肾，川牛膝同时具有活血化瘀之功，使全方补而不滞。前期临床研究表明，左归丸不仅能改善POI患者月经情况及围绝经期症状，而且能使血清卵泡刺激素水平降低，抗苗勒氏管激素水平升高[4-5]。实验研究发现，左归丸能抑制卵泡颗粒细胞的凋亡，促进各级卵泡发育及提高卵泡存活率[6-9]。中医药防治卵巢早衰虽取得良好疗效，但由于中药复方是基于整体观念辨证施治，目前尚缺乏左归丸防治POI的系统性研究。网络药理学作为一种新的药物研究模式，通过构建药物、活性成分、靶点、疾病相互作用网络，挖掘药物中多成分、多靶点、多通路间的协同作用，系统性分析预测药物对疾病的作用机制，与中医整体观念具有一致性[10]。本研究运用网络药理学的方法初步探讨了左归丸治疗POI的作用靶点及相关信号通路，并结合前期临床和实验研究，进一步阐释左归丸治疗POI的作用机制，为后续研究和进一步开发利用提供参考。1材料与方法1.1材料中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP，http：//Lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php），GeneCards数据库（https：//），比较毒物数据库（CTD，https：//ctdbase.org/），在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM，https：//），Uniprot数据库（http：//），生物信息学&进化遗传学平台（Bioinformatics&EvolutionaryGenomics，http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/），STRING数据库（https：//string-db.org/），Cytoscape软件（版本号3.7.1），DAVID数据库（https：//david.ncifcrf.gov/），R语言（版本号3.6.1），京都基因与基因组百科全书（KEGG，https：//）。1.2方法1.2.1预测左归丸的作用靶点通过中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）检索左归丸全方中熟地黄、枸杞、山茱萸、菟丝子、山药、川牛膝的所有活性成分，TCMSP尚未纳入“龟板胶”和“鹿角胶”。因口服生物利用度（Oralbioavailability，OB）反映了药物吸收、分布、代谢、排泄过程，类药性（Drug-likeness，DL）反映了化合物与已知药物分子的相似性，以OB≥30%、DL≥0.18为条件，筛选出左归丸的生物活性成分及对应的靶点信息。然后在Uniprot数据库中用“UniProtKB”功能逐一搜索靶点信息，将其转化成基因名，保留条目编号（EntryID）。1.2.2POI的作用靶点及共同靶点筛选在GeneCards数据库、CTD数据库、OMIM数据库以“prematureovarianinsufficiency”为关键词进行检索，获得疾病相关靶点基因。将药物活性成分对应靶点和疾病靶点共同导入Bioinformatics&EvolutionaryGenomics平台，筛选出共同靶点并绘制ofprematureovarianinsufficiencybasedonnetworkpharmacology，inordertopredicttheirpotentialtargetsandexplorethemechanism.MethodsA