GBT15401-1994

GB/T15401—1994中华人民共和国国家标准水果、蔬菜及其制品亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定Fruits,vegetablesandderivedproducts—DeterminationofnitriteandnitratecontentGB/T15401—1994本标准等效采作国际标准ISO6635—1984《水果、蔬菜及其制品——亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定》。1主题内容与适用范围本标准规定了水果、蔬菜及其制品亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定方法。本标准适用于水果、蔬菜及其制品亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定。2原理在弱碱性条件下，用热水从样品中提取亚硝酸离子（）和硝酸离子（），然后用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白，过滤。分取两整份溶液。一份直接加磺胺和萘乙二胺盐酸盐，在波长538nm处测量生成的红色复合物的吸光度，计算样品中原有的亚硝酸离子（）含量；另一份用金属镉还原硝酸离子（）为亚硝酸离子（），然后同上显色，测量样品中原有的亚硝酸离子（）和硝酸离子（）还原生成的亚硝酸离子（）的总量，由二者之差计算硝酸离子（）含量。−2NO−3NO−2NO−3NO−2NO−2NO−3NO−2NO−3NO3试剂所用试剂除注明者外，均为分析纯，水为去离子水，不含亚硝酸盐及硝酸盐。3．1饱和硼砂溶液：称取50g硼酸钠（GB632），溶于1000mL温水中，冷却至室温。3．2亚铁氰化钾溶液：0.25mol/L。称取106g亚铁氰化钾（GB1273），溶于水，定容至1000mL。3．3乙酸锌溶液：1mol/L。称取220g乙酸锌。溶于30mL冰乙酸（GB676）和水的混合液中，再用水定容至1000mL。3．4显色溶液3．4．1溶液Ⅰ称取0.4g磺胺，放入盛有160mL水的200mL容量瓶中，在沸水浴上加热溶解。冷却后（必要时过滤）加入20mL盐酸（ρ20=1.19g/mL，GB622），用水定容，避光保存。3．4．2溶液Ⅱ称取0.1g萘乙二胺盐酸盐（C10H7NHCH2CH2NH2·2HCL，国家技术监督局1994—12—30批准1995—07—01实施国家技术监督局1994—12—30批准1995—07—01实施GB/T15401—1994含量98.5%以上），放入100mL容量瓶中，加水溶解后定容，避光保存。3．4．3溶液Ⅲ量取445mL盐酸（ρ20=1.19g/mL），放入1000mL容量瓶中，加水定容。3．5锌棒：长约150mm，直径5～7mm。3．6硫酸镉溶液：200g/L。称取40g硫酸镉（GB1286），于200mL容量瓶中，加水溶解后定容。3．7镉粒置锌棒（3.5）于盛有200mL硫酸镉溶液（3.6）的高型烧杯中，及时用刮勺（4.4）将还原生成的镉刮下来，并用捣碎机（4.5）打碎，再用0.1mol/L盐酸处理镉粒，然后用蒸馏水冲洗数次，保存于蒸馏水中备用。3．8氨缓冲液（pH9.6）：称取37.4g氯化铵（GB658），溶于约900mL水中，用浓氨水（ρ20=0.88g/mL，GB631）调节pH至9.6，再用水稀释至1000mL。3．9亚硝酸钠标准储备溶液：称取在115±5℃下烘至恒重的亚硝酸钠（GB633，基准试剂）0.1500g，于50mL容量瓶中，加水溶解后定容。此溶液含亚硝酸离子（）2000mg/L。−NO22用移液管吸取亚硝酸钠标准储备溶液5mL于1000mL容量瓶中，用水定容。该溶液为标准工作溶液，含亚硝酸离子（）10μg/mL，宜使用时现配。−2NO3．10活性炭：粉末状。4仪器设备试验中所用玻璃器皿需彻底洗净，并用蒸馏水或去离子水冲洗，以确保无硝酸离子（）和亚硝酸离子（）存在。−3NO−2NO4．1折成槽纹的滤纸：无亚硝酸离子（）；−NO4．2锥形瓶：50mL，具有磨口玻璃塞；4．3电热恒温水浴锅：温度可调；4．4刮勺：末端用聚四氟乙烯包裹；4．5高速组织捣碎机：10000～12000r/min；4．6振荡机：275次/min；4．7大试管：50mL；4．8分光光度计；4．9分析天平：感量0.001、0.0001g。5样品的制备5．1新鲜果蔬先将新鲜水果、蔬菜洗净，晾去表面水分，用四分法取可食部分，切碎，按比例加入一定量水（番茄、桔子等多汁样品可不加水），用捣碎机（4.5）制成匀浆，但在称取试样时，应扣除加水量。5．2冷冻罐头及酱制品罐头及酱制品应全部倒出，制成匀浆备用。冷冻制品应先在密闭容器中解冻，混匀，分取一部分备用。6分析步骤6．1试样中亚硝酸盐、硝酸盐的提取国家技术监督局1994—12—30批准1995—07—01实施GB/T15401—1994依试样中亚硝酸盐和硝酸盐含量的大小，准确称取匀浆样2～20g（精确到0.001g）或准确量取2～20mL。放入200mL烧杯中，加入5mL饱和硼砂溶液（3.1）和100mL（70～80℃）热水；置沸水浴（4.3）中，加热15min，并不断摇动。取出后冷至室温，再加入10mL亚铁氰化钾溶液（3.2），10mL乙酸锌溶液（3.3）和2g活性碳粉（3.10），每次加后均充分摇匀。然后定量转入200mL容量瓶中，用水定容。用折成槽纹的滤纸（4.1）过滤，得无色清亮提取液。6．2工作曲线的绘制用移液管吸取亚硝酸钠标准工作溶液（10μg/mL）0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，分别置入7个50mL容量瓶中，各加水至约30mL；然后加入5.0mL溶液Ⅰ（3.4.1）3.0mL溶液Ⅲ（3.4.3）混匀，置于室温下遮光处，再加入1.0mL溶液Ⅱ（3.4.2），混匀，3min后用定容，即得每50mL中分别含0、5、10、15、20、25、30μg亚硝酸离子（）的系列标准工作溶液。于15min内，在分光光度计（4.8）上，用1cm光径吸收池，以零管调零，于波长538nm处测其吸光度。在方格坐标纸上以吸光度为纵坐标，50mL中亚硝酸离子（）的质量（μg）为横坐标，绘制工作曲线。−2NO−2NO−NO26．3亚硝酸盐的测定用移液管吸取提取液（6.1）10mL于50mL容量并中，用水稀释至约30mL。加入溶液Ⅰ（3.4.1）5mL，再加入溶液Ⅲ（3.4.3）3mL，混匀。置于室温遮光处，再加入溶液Ⅱ（3.4.2）1mL，混匀，3min后用水定容。于15min内，用1cm吸收池，以空白溶液调零，在波长538nm处测其吸光度。从工作曲线上查得相应的亚硝酸离子（）质量（μg）。−2NO同一试样应做两个平行测定。同时做空白试验。6．4硝酸盐的测定用移液管吸取提取液（6.1）10mL于50mL具塞锥形瓶（4.2）中，加入5.00mL蒸馏水，5.00mL氨缓冲液（3.8）（使总体积为20mL）和2g镉粒（加前用滤纸吸干镉粒上的水分），盖好瓶塞，置振荡机（4.6）上振荡5min。过滤，弃去部分初滤液，收集滤液于大试管（4.7）中。用移液管吸取还原滤液10mL于50mL容量瓶中，显色步骤同（6.3），在分光光度计（4.8）上，用538nm波长、1cm光径吸收池，以空白试验作参比液调零，进行比色测定，读取吸光度，从工作曲线上查得相应的亚硝酸离子（）质量（μg）。计算硝酸离子（）还原后的亚硝酸离子（）总量，从中减去试样亚硝酸离子（）含量，再乘以1.348即为硝酸离子（）含量。−2NO−3NO−2NO−2NO−3NO同一试样应作两个平行测定。同时做空白试验。7分析结果的表述7．1计算公式国家技术监督局1994—12—30批准1995—07—01实施GB/T15401—19947．1．1样品中亚硝酸离子（）和硝酸离子（）含量以mg/kg表示。按公式（1）、（2）计算：−2NO−3NO1012200)/(VmmkgmgNO××=−……………………………………（1）式中：m1——从工作曲线上查得的测试液中亚硝酸离子（）−NO2质量，μg；m0——匀浆样的称取量，g；V1——整取过滤液体积，mL。××−×××=−10102232002200348.1)/(VmmmVmkgmgNO……………………（2）式中：m2——从工作曲线上查得的测试液中亚硝酸离子（）质量，μg；−NO2V2——硝酸离子（）还原为亚硝酸离子（）后的过滤液整取体积，mL；−3NO−2NO2——硝酸离子（）还原前后吸取液的体积比值；−3NO1.348——亚硝酸离子（）换算为硝酸离子（）的系数；−2NO−3NOm0、m1、V1的含义同公式（1）。7．1．2样品中亚硝酸离子（）和硝酸离子（）含量以mg/L表示。分别按公式（3）、（4）计算：−2NO−3NO1012200)/(VVmLmgNO−×=−……………………………………（3）式中：m1——从工作曲线上查得的测试液中亚硝酸离子（）质量，μg；−NO2V0——试样的吸取量，mL；V1——整取过滤液体积，mL。××−×××=−10120232002200348.1)/(VmmVVmkgmgNO……………………（4）式中：m2——从工作曲线上查得的测试液中亚硝酸离子（）质量，μg；−2NOV2——硝酸离子（）还原为亚硝酸离子（）后的过滤液整取体积，mL；−3NO−2NO2——硝酸离子（）还原前后吸取液的体积比值；−3NO国家技术监督局1994—12—30批准1995—07—01实施GB/T15401—19941.348——亚硝酸离子（）换算为硝酸离子（）的系数；−2NO−3NOm1、V0、V1的含义同公式（3）。7．2用平行测定结果的算术平均值表示，小数点后保留两位。7．3重复性平行测定结果的相对误差不得大于3%。附加说明：本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国农业分析标准化技术委员会归口。本标准由陕西省农业科学院黄土高原农业测试中心负责起草。本标准主要起草人李鸿恩、周聪韧、李亚兰、田华。国家技术监督局1994—12—30批准1995—07—01实施国家技术监督局1994—12—30批准1995—07—01实施