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中华人民共和国国家标准UDC634.1/.8:635.1/.8水果、蔬菜维生素C含量测定法:543(2,6－二氯靛酚滴定法)GB/T6195—86DeterminationofvitaminCinvegetablesandfruits(2,6-dichloro-indophenoltitrationmethod)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1适用范围本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定(不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐),不适用于深色样品。2测定原理染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一是取决于其氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色;二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。3仪器设备a.高速组织捣碎机:8000～12000r/min。b.分析天平。c.滴定管:25ml、10ml。d.容量瓶:100ml。e.锥形瓶:100ml、50ml。f.吸管:10ml、5ml、2ml、1ml。g.烧杯:250ml、50ml。h.漏斗。4试剂(凡未加说明者均为分析纯)4.1浸提剂4.1.1偏磷酸:2%溶液(W/V)*,4.1.2草酸:2%溶液(W/V)。4.2抗坏血酸标准溶液(1mg/ml):称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸**,溶于浸提剂中并稀至100ml。现配现用。──────────*偏磷酸不稳定,切勿加热。**一般抗坏血酸纯度为99.5%以上,可不标定。如试剂发黄,则弃去不用。若要检查其纯度,可按附录B方法标定。4.32,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热蒸馏水中,然后称取2,6－二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用前,用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇刀,用2,6－二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取10ml浸提剂做空白试验。滴定度按式(1)计算:C·V滴定度T(mg/ml)＝─────…………………………(1)V1－V2式中:T—─每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数;C—─抗坏血酸的浓度,mg/ml;V—─吸取抗坏血酸的体积,ml;V1—─滴定抗坏血酸溶液所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;V2—─滴定空白所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml。4.4白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。5测定步骤5.1样液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g,放入组织捣碎机中,加100ml浸提剂,迅速捣成刀浆。称10～40g浆状样品,用浸提剂将样品移入100ml容量瓶,并稀释至刻度,摇刀过滤。若滤液有色,可按每克样品加0.4g白陶土脱色后再过滤。5.2滴定:吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中,用已标定过的2,6－二氯靛酚溶液滴定,直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。6结果计算6.1计算公式:维生素C按式(2)计算:(V－V0)·T·A维生素C(mg/100g)＝────────-×100…………………(2)W式中:V——滴定样液时消耗染料溶液的体积,ml;V0——滴定空白时消耗染料溶液的体积,ml;T——2,6－二氯靛酚染料滴定度,mg/ml;A——稀释倍数;W——样品重量,g。6.2平行测定的结果,用算术平均值表示,取三位有效数字,含量低的保留小数点后两位数字。6.3平行测定结果的相对相差,在维生素C含量大于20mg/100g时,不得超过2%,小于20mg/100g时,不得超过5%。附录A二甲苯－二氯靛酚比色法(补充法)A.1适用范围测定深色样品中还原型抗坏血酸。A.2测定原理用定量的2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应,多余的染料在酸性环境中呈红色,用二甲苯萃取后比色,在一定范围内,吸光度与染料浓度呈线性相关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素C含量。A.3仪器设备A.3.1分光光度计或比色计。A.3.2具塞试管:50ml。A.4试剂(皆为分析纯)A.4.1偏磷酸:2%溶液(W/V)。A.4.2乙酸钠缓冲溶液(pH4.0):500ml50%(W/V)的乙酸钠溶液与500ml冰乙酸混合。A.4.32,6－二氯靛酚溶液:参照4.3条。A.4.4二甲苯。A.5测定步骤A.5.1标准曲线的绘制:用6只50ml具塞试管加入5ml2%偏磷酸和5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液,然后依次加入0.0,0.1,0.3,0.6,0.9,1.2及1.5ml2,6－二氯靛酚溶液,用力摇动5s,再向各试管中加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,静置分层后与试样管同时比色(无染料的试液作空白),以吸光度为纵坐标,2,6－二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标准曲线。A.5.2吸取5ml2%偏磷酸样品浸出液(参照5.1条)于50ml具塞试管中,加5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液和2ml染料溶液,激烈摇动5s,立即加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,待静置分层后,从二甲苯层中小心吸取一份,放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色。记录吸光度A,在标准曲线上查出二甲苯层中2,6－二氯靛酚的毫升数。整个操作应在30min内完成。A.6计算公式(2－V)·T·A维生素C(mg/100g)＝──────×100W式中:2—─所用2,6－二氯靛酚染料的体积,ml;V—─查得2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;A—─稀释倍数;T—─染料滴定度,mg/ml;W—─样品重量,g。附录B抗坏血酸纯度检验法(补充件)B.1称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸待测样品,用2%偏磷酸或2%草酸溶液溶解稀释至100ml。B.2吸取抗坏血酸溶液1ml于盛10ml2%偏磷酸或2%草酸溶液的锥形瓶中,加入6%碘化钾溶液0.5ml和1%淀粉溶液五滴,摇刀。用1.67×10**－4M碘酸钾标准溶液滴定,终点为极淡蓝色。B.3计算公式B.3.1抗坏血酸浓度按式(B1)计算:V1×0.088抗坏血酸浓度＝──────………………………………(B1)V2式中:V1—─滴定时消耗1.67×10**－4M碘酸钾标准溶液的体积,ml;V2—─所取抗坏血酸溶液的体积,ml;0.088—─1ml1.67×10**－4M碘酸钾溶液相当于抗坏血酸的重量,mg;B.3.2抗坏血酸纯度(%)按式(B2)计算:C·V抗坏血酸纯度(%)＝───×100……………………………(B2)W式中:C—─所标定抗坏血酸的浓度,mg/ml;V—─抗坏血酸溶液总体积,ml;W—─抗坏血酸重量,mg。━━━━━━━━━━━附加说明:本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━国家标准局1986-01-18发布1986-08-01实施