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中华人民共和国国家标准茶咖啡碱测定GB/T8312—87Tea-Determinationofcaffeinecontent━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定。在茶叶水浸出物中除去叶蛋白、茶多酚等物质后,留下的生物碱其测定波长为274nm者,均称茶叶咖啡碱。1原理茶叶中的咖啡碱易溶于水,除去干扰物质后,用特定波长测定其含量。2仪器和用具实验室常规仪器及下列各项:2.1紫外分光光度仪。2.2分析天平:感量0.0001g。3试剂和溶液本标准所用试剂,除另有规定外,均为分析纯(AR);水为蒸馏水。3.1碱性乙酸铅溶液:称取50g碱性乙酸铅(HG3—1396—81),加水100mL,静置过夜。3.2盐酸(GB622—77):0.01N溶液,取0.9mL盐酸,用水稀释1L,摇匀。3.3硫酸(GB625—77):9N溶液,取硫酸250mL,用水稀释至1L,摇匀。3.4咖啡碱标准液:称取100mg咖啡碱(纯度不低于99％)溶于100mL水中,作为母液,准确吸取5mL加水至100mL作为工作液(1mL含咖啡碱0.05mg)。4操作方法4.1取样按GB8302—87《茶取样》的规定取样。4.2试样的制备按GB8303—87《茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。4.3测定步骤4.3.1试液的制备按GB8305—87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。4.3.2测定用移液管准确吸取试液(4.3.1)20mL移入250mL容量瓶中,加入10mL0.01N盐酸(3.2)和2mL碱性乙酸铅溶液(3.1),用水准确稀释至刻度,充分混匀,静置澄清过滤,准确吸取滤液50mL,注入100mL容量瓶中,加入0.2m19N硫酸溶液(3.3),加水稀释至刻度,混匀,静置澄清过滤。用10mm比色杯,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。4.3.3咖啡碱标准曲线的制作分别吸取0、5、10、15、20、25、30mL咖啡碱工作液(3.4)于一组100mL容量瓶中,各加入4.0mL盐酸溶液(3.2),用水稀释至刻度,混匀,用10mm石英比色杯,在紫外分光光度仪上选择狭缝0.1～0.18mm,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线。5结果计算5.1计算方法和公式茶叶中咖啡碱含量,以干态质量百分率表示,按下式计算:C250100──×L1×──×──10002050咖啡碱(％)＝───────────×100M×m式中:C——根据试样测得的吸光度(A),从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量,mg/mL;L1——试液总量,mL;M——试样用量,g;m——试样干物质含量百分率。如果符合重复性(5.2)的要求,取两次测定的算术平均值作为结果。5.2重复性同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过0.2g。6结果报告试验报告应包括下列内容:a.使用的方法;b.测定的结果(取小数点后一位);c.本标准中末规定的或另加的操作;d.试样的名称和产地;e.试验日期,操作人员。━━━━━━━━━━━附加说明:本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院茶叶研究所、商业部杭州茶叶加工研究所和上海进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人李名君、钟萝、严家辉、程坤、郭雯飞、王济安。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━中华人民共和国商业部1987-11-19批准1988-07-01实施