人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立

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资源描述

人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立动物:BALB/c(nu/nu)裸小鼠,鼠龄6~10周,体重l5~25g,雄性。饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内,室内恒温、恒湿,定期消毒。笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌,并在无菌条件下适时更换。方法:收集培养的BGC-823细胞(癌细胞在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中,于CO2恒温孵育箱中培养,常规传代。)在细胞培养至对数期时,用RPMI-1640制成约2×l07个/ml细胞悬液,取0.2ml(4x106个BGC-823细胞/只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下,每组接种3只鼠,当皮下移植瘤长至直径为lcm3左右时取出移肿瘤(大约在10d左右),及时放入含无血清培养液的平皿中,A再在超净工作台内修剪肿瘤组织,去除脂肪,结缔组织及坏死肿瘤组织,并用无血清培养液洗涤2次,将瘤组织切成约lmm×lmm×2mm的小块,加入适量的pbs备用。以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠,常规消毒背部肩胛区,(切开局部皮肤)用无菌套管针抽吸准备好的2mm3大小瘤块,将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下,建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。作鼠间传代(2只/代)。移植瘤生长特性:胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节,直径约1.5mm,质地较硬,在以后的几天中,上述皮下结节没有继续增大,此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期(7-10d左右)。随后,裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长.体积逐渐增大。大概(25-30d)传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。A具体操作:1一般要求需在无菌条件下进行。可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。动物处死后,用新吉尔灭(1∶1000)或碘酊、酒精消毒,对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取,对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。瘤块污染常是接种失败的主要原因,应予注意在高温季节操作时,应注意降温,可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。常用腋下部位皮下作为实体瘤接种部位;肌肉接种则用大腿肌肉;腹水型接种于腹腔。2瘤块的制备接种用的瘤块应选择接种后7-10d、肿瘤生长旺盛且无溃破而动物健康较好的瘤源动物,颈椎脱臼,固定于蜡板上,用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤(消毒面应尽可能大一些)。切开皮肤、选择生长良好无坏死或液化的瘤组织。在无菌平皿内,剪成2-3mm3的小块。平皿内放置少许消毒的生理盐水缓冲液或其它营养液,以保存瘤块。平皿应放置在冰块上。用无菌套管针抽吸或向套管针内塞进一小瘤块,接种于同种受体动物右前肢腋窝皮下(接种部位皮肤应先用碘酊、酒精消毒)。接种操作时间应尽可能的缩短,从一个瘤块所取的材料一般应在30min内接种完。3瘤细胞悬液的制备如每次需要接种的动物数量较多时,可用瘤细胞悬液接种。具体方法为,在无菌操作下取瘤块,除去坏死组织,将数个瘤块混合,剪成小块,用玻璃组织匀浆器研磨,磨匀后放入无菌容器内,加生理盐水适量稀释成1∶3-1∶4的瘤细胞悬液。容器置冰块上,用空针抽吸,每次抽吸前应将细胞混匀。每个动物接种0.2mL。整个操作应在30min内完成。停止给予受试物之次日(或停止给予受试物后1-5d)处死动物,先称体重,后解剖皮下瘤块,称重。如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400mg,大白鼠肿瘤平均重量小于2g,表示肿瘤生长不良。在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%,或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15%者,表示受试物的毒性反应。应当减少剂量重新试验。取平衡饲养1周的BALB/C裸鼠若干只,于第3d将瘤细胞悬液按0.5ml/只(含瘤细胞7.5X10e个)接种于BALB/C裸鼠左侧肋部皮下。BGC823单细胞悬液的制备:将BGC823细胞,用RPMI一1640培养基培养基(PH7.2,含10%胎牛血清,青霉素100U/ml,链霉素100U/ml),于37度,5%C02,饱和湿度的C02培养箱中培养,2~3d传代一次。该细胞贴壁生长,呈多角形。实验时取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶消化后机械吹打成单细胞悬液,1500rpm离心smin,弃上清液,用适量PBS配制成细胞浓度分别为1.5x1)/ml悬液,0.4%台盼蓝染色法测细胞活力在95%以上。18号的硬脊膜外穿刺针,把外面的套管针部分磨平磨尖(为什么要磨,看到实物你就明白了),里面的实体针不用磨。一次用6根左右就可以了,先用一个不锈钢饭盒之类的东西作一个手术包,把所有相关的手术器械(剪刀镊子什么的,包括接种针)都装进去,盖上盖子,8层纱布包裹,121度,半个小时。操作的时候在超净台里面进行无菌操作,接种针一字排开,一个塞个5、6根,然后一起接种,一轮完了以后继续塞,不用消毒处理,但是接种的时候要保证无菌操作,如果接种针碰到什么非无菌的地方,这根针这次就不能接着用了,要下次高压消毒后才能用。

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