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出口山羊板皮辐射灭菌规程RegulationfortheradiationsterilizationofgoatskinforexportSN／T0677—1997前言 本标准是根据GB／T1.1—1993《标准化工作导则 第l单元：标准的起草与表述规则 第1部分：标准编写的基本规定》制定的。本标准中的灭菌剂量和灭菌效果的评定指标是依据湖北省农业科学院原子能应用研究所和中华人民共和国湖北进出口商品检验局微生物实验室1986年至1987年的研究结果确定的。 本标准的附录A、附录B都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出并归口。 本标准由中华人民共和国湖北进出口商品检验局、湖北省农业科学院原子能应用研究所负责起草。 本标准主要起草人：张宗显、汪炎生、徐新生。1范围 本标准规定了出口山羊板皮辐射灭菌的技术要求及灭菌效果的评定方法。 本标准适用于钴-60射线对山羊板皮的灭菌，其他皮张及鬃毛类亦可参照使用。2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GBl0252 辐射加工用钴—60辐照装置的辐射防护规定 JJG591 射线辐射源(辐射加工用) 3术语、符号3.1射线 rays 核跃迁或粒子湮灭过程中发射的电磁辐射。3.2Gy gray 戈瑞，辐射吸收剂量国际单位。3.3SAL sterilityassurancelevel 灭菌保证水平。3.4D10值 D10value 辐照后存活的微生物数量减少到原有总数的十分之一所需要的吸收剂量值。 4辐照设施4.1辐射源：钴—60辐射源。源的排列为栅板状或其他形式。4.1.1辐射源的放置和升降装置，产品的传输系统和辐射场及其他有关设施必须符合国家计量检定规程JJG591的规定，并经卫生、公安、环保等部门审查验收合格，发给许可证后，方可正式使用。4.1.2辐射设施应有安全保证和事故指示报警设备，其安全性能必须符合GBl0252和中华人民共和国国务院令(89)第44号《放射性同位素与射线装置放射防护条例》中规定的要求。4.2辐射场4.2.1辐射场装源后，应按照JJG591的规定，标定辐射场空间剂量分布，剂量均匀(工作)区、最大和最小剂量区。4.2.2必须使用JJG59l所规定的剂量测定方法。并应保存测定的完整记录和运行的各种参数。所用测量仪表须经中国计量院检定确认。4.2.3放射源到任何辐照位置的剂量率相对标准偏差小于1％。4.2.4被辐照皮捆中吸收剂量分布的不均匀度不得大于1.5。4.2.5按照JJG591的规定，定期修正各种参数和剂量率。辐射源衰变参数每月校正一次，辐射场的剂量分布每年标定一次。4.3待辐照和已辐照山羊板皮的储存库必须严格分开。4.4操作人员须经专业培训、考核合格后方能上岗。 5辐照程序5.1辐照前的处理：申请灭菌的单位应根据辐照的要求，将皮张制成统一化和标准化的皮捆，其体积不得大于100cm×50cm×50cm。辐照前应根据辐照方式确定装载模式。5.2粘贴指示标签：根据采用的辐照剂量，选择适宜的变色指示标签。从每批辐照皮捆中随机取一捆或一捆以上按图l中数字所示位置粘贴指示标签。其余皮捆只在9或10号位置粘贴。5.3本规程使用国际通用辐照指示菌短小杆菌E601(BacilluspumilusE601)菌株的芽胞菌片(1×107个芽胞／片)作指示菌，定期与指示标签同时用于监测灭菌效果。5.3.1指示菌片制备程序：见附录A。5.3.2指示菌片的放置：用灭菌纸或塑料袋将芽胞菌片封装，再放入袋口系有较长细绳的小布袋中，然后布放于皮捆的中央。细绳一端露出皮捆，以便取菌片时使用。5.3.3菌片布放数量：按照皮捆在传输链上的顺序，每间隔4捆布放菌片一枚。菌片总数不得少于该批辐照皮捆总数的20％。5.4灭菌剂量的确定5.4.1指示菌的D10值：测定结果表明，本规程使用的指示菌短小芽胞杆菌E601菌株的D10值为1.7kGy。5.4.2灭菌保证水平(SAL)：山羊板皮辐射灭菌以彻底杀灭其可能携带的炭疽杆菌为灭菌指标，灭菌保证水平必须达到10-6。5.4.3灭菌剂量的确定：山羊板皮辐照前一般不做初始污染菌数测定，可根据炭疽杆菌芽胞菌片(1×107个芽胞／片)辐照后的阴性培养率来确定灭菌剂量。测定结果表明：辐照剂量为12kGy可使任何状态下的炭疽杆菌芽胞阴性培养率达100％。据此，安全灭菌剂量确定为12kGy。以指示菌株E60l的D10值计，此剂量的灭菌水平可达10-7。 6辐照方式6.1如采用静态辐照方式，当辐照剂量达一半时必须均衡翻动变换皮捆的方位，以保证皮捆均匀接受辐射剂量。6.2如采用动态辐照方式，必须设置控制剂量的辐照周期定时器，严格控制传输链的运行速度和皮捆变动位向的时间。7灭菌效果的评定 辐照后，先将皮捆上已变色的标签与制备好的变色阶对比，记录皮捆各方位所接受的辐射剂量。在不均匀度符合4.2.4规定的条件下，根据指示菌片阴性培养率进行评定：从皮捆中取出菌片，并接种至营养肉汤管中，置(36±1)℃培养72h。有菌生长为阳性；无菌生长为阴性，并据此计算菌片阴性培养率。短小杆菌E601菌株芽胞菌片阴性培养率达85％以上者评定为辐射灭菌合格。 8辐射灭菌过程的记录8.1产品入库时必须填写清单：品名、数量、灭菌水平要求、入库日期等。填写者签名。8.2值班人员必须记录剂量率、总辐照剂量、辐照起止时间、翻动情况、剂量监测和生物监测结果。记录者签名。8.3辐射灭菌完成后，产品包装上粘贴辐照标签，标明辐照灭菌日期，有效期。8.4辐照单位应依据各项评定结果出具辐射灭菌合格单，单位负责人签名并加盖公章。附 录 A(标准的附录)指示菌片的制备A1芽胞悬液的制备 a)打开短小杆菌E601干燥菌种管，取菌并接种于普通肉汤培养基管内，置(36±1)℃培养(24±2)h b)将肉汤培养物接种于普通琼脂平板上，置(36±1)℃培养(24±2)h。 c)从平板上选取典型菌落并接种于普通肉汤管内，置(36±1)℃培养(24±2)h。 d)用灭菌吸管取肉汤培养物接种于罗氏瓶内琼脂平板培养基上，使接种物布满琼脂平板表面，置(36土1)℃培养5至7天。 e)取出罗氏瓶置室温中3至5天。 f)镜检。当每个视野中芽胞形成数达95％以上时，用0.03mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)将芽胞洗入有若干玻璃珠的灭菌瓶内，充分振摇，打碎菌块，使成为均匀的芽胞悬液。 g)将芽胞液置80℃水浴中l0min(60℃，30min)，以杀灭残存的繁殖体，保存于4℃冰箱内备用。A2菌片的染制 用灭菌吸管取0.05～0.1mL芽胞悬液(事前已标定浓度)滴染于灭菌滤纸片或双层纱布片上，使含芽胞数为l07个芽胞／片，自然干燥后封于灭菌纸或小塑料袋内，置冰箱内备用。附 录 B(标准的附录)培养基和试剂B1普通肉汤培养基 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g 氯化钠 5.0g 蒸馏水 l000mL 将各成分加入蒸馏水中，煮沸使溶解，分装试管，每管3～5mL，高压灭菌121℃，15min。最终pH＝7.2。B2普通琼脂培养基 于普通肉汤培养基中增加15～20g琼脂制成普通琼脂培养基。B30.03磷酸盐缓冲液 称取磷酸二氢钾(KH2PO4)8.0g，使溶解于2000mL蒸馏水中。 称取磷酸氢二钾(K2HPO4)23.94g使溶解于3500mL蒸馏水中。 将两种溶液混合均匀。如混合液的pH值不在7.2，可用适当增加磷酸氢二钾溶液的方法，调至pH7.2。 将0.03mol/L磷酸盐缓冲液用蒸馏水稀释10倍，分装，121℃高压灭菌30min，备用。