培养基管理规程

XXXXXX有限公司文件编号版本号A/0培养基管理规程页码第1页页数共4页生效日期1.目的建立培养基的管理规程，确保产品的无菌及微生物限度检查结果真实可靠。2.范围适用于实验室使用的培养基的管理。3.职责3.1.实验员及实验室管理员负责对本制度实施。3.2.QA负责监测本规程的执行。4.规程4.1.种类和要求：本实验室无菌检查和微生物限度检查所使用的培养基均为脱水、干燥的商品培养基，商品培养基应有处方、使用说明和质量报告书。培养基包括硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基等培养基，要求来源于正规的生产厂家。4.2.培养基的购买:岗位实验员要根据培养基使用情况及剩余量及时向部门领导提出申购，经部门领导审批后方可购买。应当从可靠的供应商处采购，生产厂家应尽量稳定，必要时应当对供应商进行评估；一次购入量不宜过多。4.3.培养基的接收：培养基购进后，由岗位实验员负责接收，并及时填写《培养基接收登记表》（附件1），如培养基标签未标注效期，则应当在培养基的容器上标注接收日期。4.4.培养基的保管4.4.1.培养基性状均为粉末，有特殊气味，容易受潮。岗位实验员负责核对品名、数量后，按标签的要求于阴凉干燥处贮存，防止光照，潮湿。4.4.2.储存期限:新购进未开瓶的干粉培养基按厂家说明书上的储存期限储存。开口后的干粉培养基的储存条件和效期均按说明书上的规定执行。4.4.3.开封后的干粉培养基使用后用3M封口膜缠绕密封。4.5.培养基的使用4.5.1.在制备培养基时，应按使用说明上的要求操作配制，每次配制前应检查脱水培养基是否变质，如结块、变色、变味等，不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基。每次使用需在需登记《培养基领用记录》（附件2）。XXXXXX有限公司文件编号版本号A/0培养基管理规程页码第2页页数共4页生效日期4.5.2.培养基配制时应准确称量脱水培养基，并做好记录，配制培养基所用容器和配套器具应洁净，配制培养基的溶剂为去离子水或纯化水。脱水培养基应完全溶解于水中，再进行分装与灭菌。配制时若需要加热助溶，应注意不要过度加热，以避免培养基炭化颜色变深。4.5.3.培养基配制时，应在溶解后灭菌前将pH值调节至适当范围，调节pH值用1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液。如灭菌后培养基的pH值不符合规定，则该配制批号的培养基不能使用，应废弃。pH值测定应在25±2℃下测定。4.5.4.培养基配制编号的编写按配制日期（年＋月＋日）编写。如2018年3月1日配制的胰酪大豆胨琼脂培养基的编号为20180301，如同一天配制同种培养基，则第二次配制的胰酪大豆胨琼脂培养基的编号为20180301A，则第三次配制的胰酪大豆胨琼脂培养基的编号为20180301B，其它依次类推。4.5.5.每次配制数量、灭菌起始时间、pH值及使用情况(记录使用量，使用产品名称、批号等信息)均应详细记录，记录于《培养基配制、使用记录》（附件3）。4.6.培养基的贮藏4.6.1.培养基灭菌后不得贮藏在高压灭菌器中，琼脂培养基不得在0℃或0℃以下存放，因为冷冻可能破坏凝胶特性。培养基保存应防止水份流失，避光保存。琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，，一般不超过1周，且应密封包装，若延长保存效期，保存期需经过验证确定。培养基取用人员在取用时应核对培养基的有效期并检查培养基的外观，如培养基变质或颜色发生变化，应废弃不用。4.6.2.固体培养基灭菌后的再融化只允许一次，以避免因过度受热造成培养基质量下降或微生物污染。培养基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽。若使用微波炉，应避免培养基过度受热及水分的蒸发，更要注意安全。融化的培养基置于45-50℃的水浴中，不得超过8小时。倾注培养基时，应擦干培养基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴进入培养基中造成污染。4.7.质量控制试验4.7.1.每一批脱水培养基均需做适用性检查。4.7.2.培养基的适用性检查试验若不符合规定，应对各环节进行调查，寻找不合格的原因，以防止问题重复出现，任何不符合要求的培养基均不能使用。4.7.3.涉及菌种及菌悬液制备4.7.3.1涉及菌种A.大肠埃希菌EscherichiacoliB.金黄色葡萄球菌StaphylococcusaureusC.铜绿假单胞菌PseudomonasaeruginosaXXXXXX有限公司文件编号版本号A/0培养基管理规程页码第3页页数共4页生效日期D.枯草芽孢杆菌BacillussubtilisE.白色念珠菌CandidaalbicansF.黑曲霉Aspergillusniger注：培养基的适用性检查所用的菌种传代次数不得超过5代，使用CMCC的菌种。4.7.3.2菌悬液制备取规格为102cfu/瓶，菌含量为10~99cfu/0.1ml的定量质控菌株，使用前注入相应的复溶液使其充分溶解，一般在涡旋仪上震荡混匀30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌悬液，备用。注意每次取样前再次将菌悬液混合均匀。4.7.4.微生物计数用培养基接种A.取试验菌各0.1ml（含菌数＜100CFU）用涂布棒均匀的涂布到待检培养基和对照培养基上，每株试验菌平行制备两个皿。同时制备两个空白平皿作为阴性对照。B.将接种后的培养基按药典要求在规定条件下培养。C.计算：将培养皿内每种微生物的测试平板平均值与参照平板平均值相比，计算回收率，并记录于《微生物计数用培养基适用性检查记录》（附件4）。D.检定判定：若被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5〜2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，且阴性对照无菌生长，判该培养基的适用性检查符合规定。4.7.5.液体培养基接种A.取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，规定温度下培养3天；B.取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，规定温度下培养5天。定期观察结果并记录于《液体培养基灵敏度检查记录》（附件5）。C.结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。5.记录培养基接收登记表培养基领用记录培养基配制、使用记录XXXXXX有限公司文件编号版本号A/0培养基管理规程页码第4页页数共4页生效日期微生物计数用培养基适用性检查记录液体培养基灵敏度检查记录培养基启用标签、培养基配制标签6.相关文件实验室管理规程HYT/SMP-QA-ZB-004偏差调查与处理管理规程HYT/SMP-QA-ZB-008检验异常管理规程HYT/SMP-QA-ZB-0107.参考文献无菌医疗器具生产管理规范YY0033-2000中国药典2020版8.修订历史序号生效日期文件编号及版本号修订性质及原因修订内容及具体条款附件1：实验室培养基接收记录编号：HYT/SMP-QA-ZB-026培养基名称接收日期批号规格生产厂家生产日期有效期接收数量接收人附件2：培养基领用记录编号：HYT/SMP-QA-ZB-026培养基名称批号规格生产厂家生产日期有效期开封日期开封人储存条件领用记录领用日期干粉确认领用人领用数量（克）剩余数量（克）备注注：每次使用时领用人需检查脱水培养基是否变质，如结块、变色、变味等，若无，就在干粉确认一栏中打“√”，若有变质，写明变质现象附件3：培养基配制、使用记录编号：HYT/SMP-QA-ZB-026培养基名称配制依据厂家批号规格有效期配制日期编号制备配制过程：称量设备名称及编号：培养基状态：□固体□液体称取本品g，加纯化水ml，加热搅拌，使溶液均匀。液体培养基是否分装：□分装（ml/□支或□瓶）,□不分装加盖方式：□牛皮纸□橡胶塞□胶塞灭菌时间：□121℃15分钟□121℃20分钟共配置□支或□瓶。固体培养基分装的空皿的型号及批次：共分装皿。灭菌后pH值规定要求：pH计编号：是否校准：□已校准□未校准灭菌前pH值：添加□1mol/LNaOH（编号：）的量或□1mol/LHcl（编号：）的量灭菌后pH值：结论：□符合规定□不符合规定操作人：复核人：灭菌灭菌压力：灭菌器编号：起始时间：从时分到时分操作人：复核人：日期数量使用情况使用人备注附件4：微生物计数用培养基适用性检查记录编号：HYT/SMP-QA-ZB-0261培养基信息试验培养基名称及批号试验培养基配制编号对照培养基名称及批号对照培养基配制编号检查依据检查日期2检查步骤及结果2.1菌株的准备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，规格为102cfu/瓶，菌含量为10~99cfu/0.1ml的定量质控菌株，使用前注入相应的复溶液使其充分溶解，一般在涡旋仪上震荡混匀30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌悬液，备用。注意每次取样前再次将菌悬液混合均匀。2.2试验方法：用平皿倾注法或表面涂布法在对照培养基和试验培养基的每个平皿接种小于100cfu试验菌，每种试验菌平行制备两个平皿，培养，点计菌落数。同时制备两个空白平皿作阴性对照。2.3结果判断：若被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5〜2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，且阴性对照无菌生长，则结果符合规定。菌种名称菌种编号培养条件菌落数(cfu)比值菌落生长情况试验培养基对照培养基阴性对照试验培养基对照培养基平皿1平皿2平皿1平皿23结论□符合规定□不符合规定检验人：日期：复核人：日期：批准人：日期：附件5：液体培养基灵敏度检查记录编号：HYT/SMP-QA-ZB-026检查依据2015版中国药典检查日期1)菌株的准备：取生孢梭菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，规格为102cfu/瓶，菌含量为10~99cfu/0.1ml的定量质控菌株，使用前注入相应的复溶液使其充分溶解，一般在涡旋仪上震荡混匀30S，得到10~99cfu/0.1mL的菌悬液，备用。注意每次取样前再次将菌悬液混合均匀。2)取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；3)取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。定期观察结果。菌种定量菌株批号FTM培养基/培养温度30~35℃（天）（培养基批号：配制编号：）（培养箱编号：）123金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌生孢梭菌空白对照菌种定量菌株批号TSB培养基/培养温度20~25℃（天）（培养基批号：配制编号：）（培养箱编号：）12345枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉空白对照备注“＋”表示长菌且生长良好、“－”表示无菌生长判定标准空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。结论□符合规定□不符合规定附件6：培养基启用标签培养基配制标签HYT/SMP-QA-ZB-026品名批号开封日期开封人储存条件失效期HYT/SMP-QA-ZB-026品名批号配制编号配制日期配制人储存条件失效期