GMP洁净室(区)浮游菌监测规程

标准操作规程（STANDARDOPERATINGPROCEDURE）题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00文件属性■新订；□确认；□修订，第次，替代：起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门品质管理部颁发日期2018.07.23生效日期2018.08.01分发部门品质管理部1份、生产部1份、检验检测部1份，行政人事部1份，共印4份1.目的：规范了洁净室（区）浮游菌测试条件、测试方法，保证洁净室（区）的浮游菌的测试和环境的验证。2.适用范围：适用于各车间洁净区、仓库取样间、QC洁净区域（包括洁净工作台）等的浮游菌监测。3.责任人：各车间：做好洁净室卫生清洁工作，并按要求填写《环境检测申请单》(SOR-QA-49)，交品质管理部QA处。QC：负责培养基的制备、培养皿的培养观察及测试数据的报告。QA：负责定期进行浮游菌监测。4.正文：4.1原理：浮游菌采样器一般采用撞击法机理，可分为狭缝式采样器、离心式或针孔式采样器，狭式采样器由内部风机将气流吸入，通过采样器的狭缝式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活性生物粒子经培养后形成菌落。离心式采样器由于内部风机的高速运转，气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下，空气中的活性微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上，附着的活性微生物粒子经培养后形成菌落。针孔式采样器是气流经过一个金属吸入盖子上是密集的经过机械加工的特小孔，通过风机将收集到的细小的空气流直接撞击到平板培养皿上，附着的活性微生物粒子经培养后形成菌落。第1页共10页4.2人员的职责及培训：4.2.1洁净室（区）的测试人员应进行本专业的培训并获得相应的资格后才能履行对洁净题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.01室（区）测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本微生物知识；4.2.2洁净室（区）的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000级以上的区域。4.3仪器4.3.1培养皿：4.3.1.1一般采用Φ90mm×15mm规格的培养皿；4.3.1.2将培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。4.3.1.3浮游菌检测器4.3.2培养基：4.3.2.1大豆酪蛋白琼脂营养基（TSA）或其他认可的配制方法；4.3.3恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行校验。4.3.4高压蒸汽灭菌器：使用时严格按照说明书操作。4.4测试步骤：4．4．1测试前仪器、培养皿必须严格清毒4．4．1．1采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器预先放在预测房间内。4．4．2用消毒剂擦试培养皿的外表面4．4．3采样前，先用消毒剂清洗采样器的顶、转盘以及罩子的内外面，采样结東，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。4．4．4取样口及采样管，使用的必需高温灭菌，如用清毒剂对采样管的外及内进行消毒时，应将管中的残留液倒掉及晾干。4．4．5采样者应穿与被测洁净区域相应的工作服，在放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒或者带无菌手套。4．4．6采样仪器经消毒后先不放入培养皿，开启浮游菌采样器，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并检查流量并根据采样量调整设定采样时间。4．4．7关闭浮游菌采样器，放入培养皿，盖上盖子。4．4．8置采样口于采样点后，开启浮游菌采样器进行采样。4.5注意事项：4.5.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性；第2页共10页4.5.2采取一切措施防止人为对样本的污染；4.5.3对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录；题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.014.5.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别；4.5.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。5.测试规则：5.1测试条件：5.1.1在测试之前，对洁净室（区）相关参数进行预先测试，这类测试将会提供测试悬浮粒子的环境条件，例如：这种预先测试可包括a）温度和相对湿度的测试、洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45％一65％为宜），届时应满足测试仪器的使用范围b）室内送风量或风速的测试，或压差的测试C）高效过滤器的泄露测试5.2测试状态：5.2.1静态和动态二种状态均可进行测试：5.2.1.1静态：静态a：洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，生产工艺设备已安装、洁净室（区）内没有生产人员的状态。室内测试人员不得多于2人。静态b：洁净室（区）在生产操作全部结束，生产操作人员撤离现场并经过20min自净后。5.2.1.3动态：洁净室（区）已处于正常生产状态，设备在指定的方式下进行，并且有指定的人员按照规范操作。5.2.2静态和动态两种状态均可进行测试；静态测试时，室内测试人员不得多于2人；浮游菌测试前，被测洁净室（区）由使用者预先进行消毒；测试报告中标明测试时所采用的状态和室内人数。5.3测试时间：5.3.1在动态和静态测试时，对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。对非单向流，如10,000级，100,000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。在静态b测试时，对单向流洁净室（区），如100级净化房间，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始；对非单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后第3页共10页开始；5.3.2在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.015.4浮游菌菌落数计算：5.4.1采样点数量：5.4.1.1最少采样点数目：面积（m2）洁净度级别100级10000级100000及300000级＜102～322≥10～＜20422≥20～＜40822≥40～＜1001642≥100～＜20040103≥200～＜40080206≥400～＜10001604013≥1000～＜200040010032≥200080020063注：对于100级的单向流洁净室（区），包括100级洁净工作台，面积指的是送风口表面积；对于10000级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是房间面积。5.4.2采样点的布置：5.4.2.1采样点的位置：工作区采样点位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作台面）；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测试点。5.4.2.2洁净室（区）采样点布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏，下列多点采样的采样点布置图示A-1可作参考。第4页共10页题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.01图A-1平面采样点布置图5.4.2.3100级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在对气流方向的工作面上，气流形式可参考下图A-2、图A-3。图A-2水平单向流气流形式图A-3垂直单向流气流形式5.4.3最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数，详见下表。最少培养皿数洁净度级别最少培养皿数（Φ90mm）100级1410000级2100000及300000级2第5页共10页题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.015.4.4采样次数：每个采样点一般采样一次。5.4.5采样注意事项：5.4.5.1对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），采样口向上；5.4.5.2布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口；5.4.5.3采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少活动；5.4.5.4应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染；5.4.5.5培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿（TSA或SDA）一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。5.5记录：测试报告应包含以下内容5.5.1测试者的名称和地址，测试日期；5.5.2测试依据；5.5.3被测洁净室（区）的平面位置（必要时标注相邻区域的平面位置）；5.5.4有关测试仪器及其测试方法的描述；包括测试环境的条件，采样点数目以及布置图，测试次数，或可能存在的测试方法的变更，测试仪器的检定证书等；若为动态测试，则还应记录现场操作人员数量及位置，现场设备运转数量及位置等；5.5.5测试结果，包括所有统计计算资料。5.6结果计算：5.6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数；5.6.2每个测点的浮游菌平均菌落数的计算：平均菌落数=（M1+M2+…Mn）/n式中：M1—1号培养皿菌落数M2—2号培养皿菌落数Mn—n号培养皿菌落数n—培养皿总数。5.7结果评定：5.7.1每个测点的浮游菌平均菌落数必须低于所选定评定标准中的界限；5.7.2在静态测试时，若某测点的浮游菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为合格；5.7.3洁净室(区)浮游菌评定标准：第6页共10页题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.015.8日常监控及监测周期：5.8.1对于浮游菌的取样频次，如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下的情况后，也应确定其他项目的检测频次。5.8.1.1停工时间比预计延长；5.8.1.2关键区域内发现有污染存在；5.8.1.3在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修；5.8.1.4日常操作记录反映出倾向性的数据；5.8.1.5消毒规程的改变；5.8.1.6引起生物污染的事故等；5.8.1.7当生产设备有重大维修或增加设备时；5.8.1.8当洁净室(区)结构或区域分布有重大变动时。5.8.2关键区域百级生产时（动态）每班监测1次；万级及其它局部百级每周监测1次；十万级每半月监测1次；三十万级每月监测1次。以上未标明均指静态监测。5.9记录归档：管理员根据监测结论发放监测报告并存档，并在监测结论合格后给受检部门发放环境检测合格证。静态监测记录和动态监测记录的原件由品质管理部管理员存档保存，动态监测记录的复印件附批生产记录。6.浮游菌检测点编号说明：ANNB-CA:表示车间名称。（1-压片车间、2-粉包车间、3-QC微生物检验室）NN:表示取样点顺序号。(用阿拉伯数字表示)B:表示洁净度级别。（A-百级、B-无菌万级、C-普通万级、D-十万级、E-三十万级）C:表示该房间取样点的个数。第7页共10页洁净度级别浮游菌（Φ90mm）(CFU/碟)接触碟（Φ90mm）(CFU/碟)5指手套(CFU/手套)100级（动态）＜1/4小时≤1≤1100级≤110000级≤3≤5≤5100000级≤10//300000级≤15//题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.01例如：101D-1表示压片车间女二更十万级的第1个取样点7.附件：《浮游菌监测原始记录》（SOR-QC-062-00）《浮游菌监测报告》（SOR-QC-063-00）8.相关GMP文件：无9.变更历史：第8页共10页版本号00生效日期2018.08.01变更内容新文件题目洁净室（区）浮游菌监测规程编码SOP-QA-007-00生效日期2018.08.01编码：SOR-QC-062-00浮游菌监测原始记录测试依据GB/T16293-2010测试状态□空态□动态□静态环境温度℃测试车间相对湿度%静压差Pa培养基批号检测日期培养温度℃测试时间培养时