AQUITY-UPLC-Q-TOF-micro液质联用操作步骤+图文版

0WatersUPLC/Q-TOF操作手册1目录一、开关机标准程序………………………………………………………………2二、主要操作界面…………………………………………………………………3-4三、质谱方法和液相方法的编写…………………………………………………5-11四、正负离子模式切换方法……………………………………………………12-13五、质谱校正方法………………………………………………………………14-31六、单质谱以及液质联用方法…………………………………………………32-38七、图谱处理及电子版拷贝方法………………………………………………39-46八、注意事项……………………………………………………………………47九、清洗离子源和样品瓶方法…………………………………………………472一、开关机标准程序（一）开机标准程序1、开启电脑电源2、开启Q-TOFmicro总电源开关、电子电路的电源、内建式电脑电源（EmbeddedPC,EPC)，此时仪器内建式电脑会自动开启并与电脑主机（HostPC)连线。3、开启Masslynx软件，此时Masslynx将自动侦测是否有仪器，即Q-TOFmicro连线上，又得话才可以控制仪器，不然，在侦测不到仪器的状态下将维持只有软件单独使用的状态。4、检查冷却水系统是否连接妥当。5、在质谱调谐页面（MSTune)的选项（Options)选择抽真空（Pump)，当真空够好的时候才能开始做实验。真空的好坏可以从三个地方来看，一是从真空计的读值判断，点击真空（Vacuum)的图示：即显示真空计，如欲恢复原扫描分析峰设定，则点击其左侧分析峰（Peaks)图示。6、从仪器面板上查看，LED灯如为固定绿灯，则真空度为正常，如为橘橙则表示真空度较差。7、在开始操作质谱仪前，务必先平衡MCP。平衡MCP是逐渐缓慢增加电压以赶走吸附于MCP的水气。平衡MCP的步骤：（1）确定飞行管的压力小于3×10-6mbar至少一小时。（2）确定Capillary、FlightTube、MCP电压皆为0。（3）切换至Operate。（4）接着增加FightTube电压（一次增加500，当反馈值达到输入的值再做一次增加，直至数值为3000）。（5）由OPtions中选择MCPconditioning，可见到（6）设定start为100，stop为2700，Duration为600，step为5。按下面Start即开始平衡MCP。（二）关机标准程序（当长时间停电或是移机等特殊情况必须关机时）1、泄真空：在质谱调谐页面（MSTune)的选项（Options)选择泄真空（Vent)。2、关闭Masslynx软件。3、关闭内建式电脑电源（EmbeddedPC,EPC）、电子电路的电源及Q-TOFmicro总电源开关。4、关闭电脑电源。3二、Masslynx软件主要操作的四个界面主界面质谱调谐界面MSTune4液相方法编辑界面InletMethod液相系统界面5三、质谱方法和液相方法的编写在主界面的项目列表中右击选择Add增加列表项数。然后依次编写FilleName、FileText、MsFile、InletFile、Bottle、InjectVolume对应的项：1、FileName直接写成样品名称，注意不能和其它重复。2、FileText标记，若是单做质谱，标记为MS+或MS-，若是液质联用，标记为UPLC-MS+或UPLC-MS-。3、MsFile项中右击选择Edit6出现点击MSScan图标，根据需要填写各参数，包括：（1）Mass中填写质量扫描范围（注意标样校正值应包含在内）：LowMass，HighMass。（2）Method中选择离子模式和信号存档方式：IonizationMode选择相应的离子模式，Data中选择数据存档方式（Centroid的档案在一个质量只选择一个代表性的点储存，得到棒状质谱图，资料量较小，占用空间少；Continuum的档案每个质量都会储存多的资料点，可以描绘出分析峰的图像；MCA的资料类似Continuum，但会将所获取的每张图谱自动作平均。一般情况下选择Continuum；组学研究选择Centroid）。7（3）Time中填写采集时间：StartTime，EndTime（单做质谱时一般为2min，液质联用视液相方法时间而定。（4）ScanDuration中ScanTime为每个扫描所花的时间，一般设为0.5s；InterScanDelay为扫描间隔，一般为0.1s。（5）ConeVoltage中设定锥孔电压，可以与调谐窗口一致，也可自己设定。（6）ReferenceScan中ConeVoltage设定适合标准品（LE）的锥孔电压（做完单点校正后即将其改正）；Frequency设定挡板切换分析路和校正路的频率，一般为10s；ScanTime设定标准品扫描时间，一般为1s。若要做子离子扫描（即二级质谱），点击MSMS图标，填写二级扫描信息，包括：（1）Masses中填写SetMass母离子分子量，子离子扫描质量范围LowMass，HighMass。（2）Time中填写该母离子二级扫描的时间范围StartTime，EndTime。（3）ReferenceScan中要填写校正用标准品（LE）在相应离子模式下的分子量：LE+556.2771，LE-554.2615。（4）CollisionEnergy中填写二级扫描碰撞能量。（5）其他同一级设定。8质谱方法编完成后在File/saveas另存一个文件名，然后在主界面的MsFile项中右击选择Browse提取该方法。4、InletFile项中右击选择Edit9出现点击Inlet，出现：在Solvents项标注流动相：A是水相，A1管路通常用来装超纯水或一定浓度甲酸水或一定浓度氨水等，A2管路通常用来装异丙醇；B是有机相，B1通常用来装乙腈，B2通常用来装甲醇。在Gradient项下：Time流动相梯度或等度变化时间、Flow流速、%A和%B两种流动相的比例变化、Curve变化曲线。在Runtime项填写液相方法运行时间，质谱方法的时间一般与此一致。（若是单做质谱，选择100%有机相（甲醇或乙腈），流速为0.1ml/min，液相方法为100%相应有机相，时间5分钟左右，可根据实际情况调节时间长短。10点击Autosampler，出现：编写Runtime，Temperature（Column柱温，若是生物样品，还应设置Sample样品室温度为4℃）并标注上下限，若进样瓶加了内衬管还要进行提针操作，方法是点击Advanced图标，出现：选择NeedlePlacement，填写提针高度（一般2mm）注：a、Inlet项中的Runtime、下面方框流动相的流动时间、Autosampler界面的Runtime三者应一致，否则容易出错，质谱方法中的采集时间一般也与之相同。b、如进样瓶中加了内衬管，一定要记得提针的操作，以免针头受损。液相方法编完成后，File/saveas另存一个文件名，然后在主界面的InletFile项中右击选择Browse提取该方法。5、Bottle项中填写对应的样品盘号数。6、InjectVolume项填写进样体积（≤10µL）。11上述几项都改写完成后，点击save保存即可。12四、正负离子模式切换方法先将MSTune界面的Capillary、Flighttube、reflectron和mcpdetector电压慢慢降为013点击右下角方框的Standby，图标变成红色切换（ionmode项下选择需要的离子模式，calibration项下选择校正模式）点击右下角方框的Operate，图标变成绿色等待一会左下角方框的Acquire由灰变黑后，再慢慢将上面四个的值调到3000、5630、1780、2300(ESI+)/2500(ESI-)。14五、质谱校正方法每次切换正负离子模式和清洗离子源后都必须进行质谱校正（重要）。1、单点校正（即Lockmass的校正：LE正离子556.2771负离子554.2615）电压Capillary:3000V左右SampleCone:视响应情况调节，并将其保存到质谱方法的ConeVoltage中ExtractionCone:一般0～2温度SourceTemp:80～120℃DesolvationTemp:350℃气体Cone:50L/hrDesolvation:350～600L/hrLockSpray为Reference状态打开Lockmass，调节各参数使相应信号保持200左右（Scantime1.00时，若Scantime0.50时，则相应强度保持100），点击左下角Acquire图标采集信号。采集1分钟左右即可停止（点击手样图标）15提取色谱图，选取该段信号提取质谱图Center处理16观察LE特定离子峰的分子量信息，跟标准分子量对比。如果误差在1md以内（即小数点后1位相同），则可进行下一步的多点校正；如果误差超过1md，则按照修改Iteff值的方法修改Iteff值之后再采集，直到符合误差允许范围。Iteff值的修改公式为：值旧理论分子量实测分子量值新teffteffILELEIIteff值的修改位置在质谱调谐界面Options项下TDCSettings...中，如图：172、多点校正（即甲酸钠的校正）以正离子模式为例：IonMode选择ES+Calibration下打开Uncal文件校正文件在下拉框选择ESI-NaFormate-Pos文件LockSpray改为Analyte状态进样针吸满配好的甲酸钠样品放到自动进样泵，质谱操作界面点击进样针，调节流速及相关参数，使响应强度大部分保持200左右（Scantime1.00时）最高不超过800，点击质谱界面左下角Aquire图标，采集信号，当累加质谱图中分子量最大的离子峰强达到1500以上停止采集，center处理，保存图谱。1819Calibration界面Calibrate项下FromFile…打开刚才保存的文件名，点击History选择之前保存的文件OK，即出现实测值和真实值之间的对比图以及相应的标准曲线。2021如果ppm在5以内，则在Finished项下选择AcceptCalibration，然后在Calibration界面File项下选择SaveAs…保存刚才的校正文件（一般按时间命名，如2012-6-15+）；2223如果ppm超过5，则重新校正，重复上面操作直到ppm小于5。3、验证取消液相方法运行，步骤如下：在液相方法界面Tools项下点击InstrumentConfiguration...24出现点击Configure，出现25点击Nest，出现如下对话框，SelectPump选择None点击Nest，出现如下对话框，SelectAutoSampler选择None26点击Nest，出现如下对话框，SelectDetector选择None（因现在紫外检测器故障）点击Nest，出现如下对话框，点击Finish27出现如下对话框，选择No即可主界面中建一个验证的进样序列（以甲酸钠溶液为验证的测试样品），编辑方法：离子扫描范围一般100～1000（根据需要测定的分子量范围设定，如果要测大于1000分子量的物质，则相应扩大范围）。离子模式ES+采集方式Continuum扫描频率Scantime1.00ReferenceConeVoltage和Lockmass校正中的SourceCone一致质谱界面IonMode选择ES+，Calibration打开刚才保存的校正文件（如）进样针吸满配好的甲酸钠样品放到自动进样泵，质谱操作界面点击进样针，调节流速及相关参数，使响应强度大部分保持200左右（Scantime1.00时）最高不超过800，主界面运行序列28采集信号，当累加质谱图中分子量最大的离子峰强达到1500以上停止采集，MassMeasure处理29复制全图谱30打开桌面Massdiff软件，打开甲酸钠正离子质荷比对照列表31点击粘贴如