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DB34安徽省地方标准DB34/T1033—2009动物组织中地克珠利和磺胺类药物的残留测定-高效液相色谱法2009-10-21发布2009-10-21实施安徽省质量技术监督局发布食品伙伴网—2009前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)、安徽农业大学动物科技学院。本标准起草人：许世富、汤春莲、阮祥春、陶小平、丁在亮、陈文帮、明文庆、刘发全。本标准首次发布。食品伙伴网—2009动物组织中地克珠利和磺胺类药物的残留测定-高效液相色谱法1范围本标准规定了猪、牛、鸡、鸭的肌肉、肝脏、肾脏中地克珠利和磺胺类药物检验的制样和高效液相色谱法（HPLC）测定方法。本标准适用于猪、牛、鸡、鸭的肌肉、肝脏、肾脏中地克珠利和磺胺类药物的定量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样制备动物肌肉、肝脏、肾脏等动物组织，去筋后切成小块，制成糜状后，于－18℃以下温度冷冻保存。4原理样品以乙腈提取，混合型分散固相萃取净化，分步溶剂洗脱，最后用HPLC法进行分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。5.2地克珠利对照品纯度≥98.0%。5.3磺胺嘧啶(SD)对照品纯度≥98.0%。5.4磺胺二甲嘧啶（SM2）对照品纯度≥98.0%。5.5磺胺间甲氧嘧啶（SMM）对照品纯度≥98.0%。5.6磺胺甲噁唑（SMZ）对照品纯度≥98.0%。5.7磺胺喹恶啉(SQ)对照品纯度≥98.0%。5.8乙腈：色谱纯。5.9氯仿。5.10硫酸钠。5.11磷酸。5.12C18粉。5.13中性氧化铝粉：用前于600℃马弗炉烘烤5h。5.14氯仿乙腈溶液：取乙腈10mL加氯仿90mL。5.15磷酸三乙胺溶液：取3.4mL磷酸加水至1000mL，用三乙胺调节pH为3.0。5.16流动相：磷酸三乙胺溶液-乙腈（25：75）。5.17标准贮备液（1mg/mL）：准确称取SD、SM2、SMM、SMZ、SQ、地克珠利对照品各100mg，用乙腈溶解并稀释至100mL量瓶中，必要时超声。贮存于0℃～8℃冰箱中，有效期90d。食品伙伴网—20095.18标准工作液：取上述标准贮备液，用流动相稀释，得到含地克珠利、磺胺类药物0.02(0.01)μg／mL、0.1(0.05)μg／mL、0.2(0.1)μg／mL、0.5(0.25)μg／mL、1.0(0.5)μg／mL的标准混合溶液。贮存于0℃～8℃冰箱中，有效期7d。6仪器设备6.1高效液相色谱仪，配置紫外检测器或二极管阵列检测器。6.2旋转蒸发仪。6.3超纯水器。6.4冷冻离心机。6.5振荡器。6.6涡旋混合器。6.7分析天平：感量0.0001g。6.8离心管：50mL，10mL。6.9氮吹仪。6.10马弗炉。6.11固相萃取装备。7测定步骤7.1试样提取净化称取(6±0.05g)均质动物组织样品于50mL离心管中，依次加入14mL氯仿乙腈（5.14）溶液、1.0mL10%硫酸钠溶液，振荡提取15min，以5000r/min离心5min。准确吸取10mL提取液，氮吹或浓缩至近干，用4mL氯仿乙腈溶液（5.14）溶解后，分别加入C18粉、中性氧化铝粉各100mg，涡混2min，8000r/min离心3min。准确移取1.0mL上清液于另一10mL离心管中，氮气吹干，加入1.0mL流动相（5.15），涡混溶解残渣，过0.45μm滤膜，待HPLC测定。7.2色谱条件色谱柱：C18(4.6×250mm，5μm)；流动相：磷酸三乙胺溶液-乙腈（25：75）；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；柱温：30℃；检测波长：270nm。7.3定量测定取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算按照下式计算试样中各种药物残留的含量：231VmAs1000VVCsAX××××××=……………………………………………………（1）式中：X——试样中各种药物的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V1——加入提取液的体积，单位为毫升（mL）；V2——取出提取液的体积，单位为毫升（mL）；食品伙伴网—2009V3——加入氯仿乙腈的体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；M——试样质量，单位为克（g）；平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法磺胺类药物的检出限为50.0μg/kg；地克珠利的检出限为100.0μg/kg。9.2准确度本方法回收率均为80％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤10％，批间变异系数CV≤15％。食品伙伴网—2009附录A（资料性附录）色谱图A.1磺胺类药物及地克珠利对照溶液色谱图图A.1磺胺类药物及地克珠利对照溶液色谱图A.2样品中添加磺胺类药物及地克珠利色谱图图A.2样品中添加磺胺类药物及地克珠利色谱图注：1——磺胺嘧啶(SD)2——磺胺二甲嘧啶（SM2）3——磺胺间甲氧嘧啶（SMM）4——磺胺甲噁唑（SMZ）5——地克珠利6——磺胺喹恶啉(SQ)食品伙伴网