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ICS65.020.30B45DB34安徽省地方标准DB34/T1376—2011鸡蛋中氟苯尼考的残留测定—高效液相色谱法DeterminationofflorfenicolresiduesineggsbyHPLCmethod2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1376—2011I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：李珲、许世富、汤春莲、陶小平、丁作坤、陈文帮。DB34/T1376—20111鸡蛋中氟苯尼考的残留测定—高效液相色谱法1范围本标准规定了鸡蛋中氟苯尼考检验的高效液相色谱法（HPLC）测定方法。本标准适用于鸡蛋中氟苯尼考残留的定量检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的不少于500g的鸡蛋样品，经匀浆后装入磨口瓶中在-18℃冰箱保存备用。4原理试样中残留的氟苯尼考经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂，高效液相色谱仪测定，外标法定量。5试剂和材料除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。5.1氟苯尼考标准品：纯度≥98％。5.2甲醇：色谱纯。5.3乙酸乙酯。5.4正己烷。5.5氢氧化铵：25％～28％。5.6无水硫酸钠：经300℃灼烧4h，置于干燥器中备用。5.7流动相：甲醇：水（40：60）。5.8聚丙烯离心管：50mL，1.5mL。5.9比色管：50mL，具塞。5.10梨形瓶：25mL。5.11滤膜：0.45μm，无机相。DB34/T1376—201125.12氟苯尼考标准储备液（1mg/mL）：准确称取氟苯尼考标准品100mg，用甲醇稀释至100mL，摇匀，-18℃保存，有效期90d。5.13氟苯尼考工作液（10μg/mL）：准确移取（5.12）中氟苯尼考标准储备液1.0mL，用甲醇稀释配制成100mL，摇匀，-4℃保存，有效期30d。5.14氟苯尼考标准溶液：取氟苯尼考工作液（5.13）适量，分别用流动相（5.7）稀释为0、20、50、100、200、400ng/mL的标准溶液，摇匀，4℃保存，有效期7d。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪，配置二极管阵列检测器或紫外检测器。6.2离心机，转速不低于4000r/min。6.3振荡器。6.4涡旋混合器。6.5分析天平：感量0.0001g，0.01g。6.6超声波清洗器。6.7组织匀浆机。6.8旋转蒸发仪。7测定步骤7.1试样提取称取均质后的试样5g（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，依次加入30mL乙酸乙酯（5.3），0.9mL氢氧化铵（5.5），5g无水硫酸钠，振荡提取30s，以4000r/min离心5min，上清液转移至50mL比色管中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀后取10mL乙酸乙酯提取液到25mL梨形瓶中，45℃水浴中旋转浓缩至干。7.2试样净化梨形瓶中的残渣用3mL水溶解，超声5min，加入3mL正己烷（5.4）涡旋混合30s，静置分层，弃掉上层的正己烷，再加3mL正己烷（5.4）涡旋混合30s，静置分层，移取1mL水相于1.5mL的聚丙烯离心管中，以8000r/min离心5min，经0.45μm滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析。7.3色谱测定色谱柱：C18(4.6×250mm，5μm)，或相当者。柱温：40℃。进样体积：20μL。流速：1.0mL/min。检测波长：365nm。流动相：甲醇-水（40：60）。7.4上机测定DB34/T1376—20113取适量试样溶液和相应浓度的标准溶液，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。标准溶液及试样液中氟苯尼考的相应值均在仪器检测的线性范围内，标准溶液高效液相色谱图见附录A中图A.2。8结果计算按照下式计算试样中各种药物的含量：1000mAs1000VCsAX×××××=.................................(1)式中：X——试样中各种药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——定容体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法在鸡蛋中的检出限为20μg/kg。9.2准确度本方法在添加浓度为80μg/kg添加水平的回收率均为70％～110％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV％≤10％，批间变异系数CV％≤15％。DB34/T1376—20114AA附录A（资料性附录）色谱图A.1空白鸡蛋样品溶液色谱图图A.1空白鸡蛋样品溶液色谱图A.2标准物质溶液色谱图图A.2标准物质溶液色谱图DB34/T1376—20115A.3空白鸡蛋中添加标准物质溶液色谱图图A.3空白鸡蛋中添加标准物质溶液色谱图_________________________________