DB34T 2777-2016 大米中肟菌酯残留量的测定 液相色谱串联质谱法

ICS67.040C53DB34安徽省地方标准DB34/T2777—2016大米中肟菌酯残留量的测定液相色谱串联质谱法DeterminationoftrifloxystrobinresidueinricebyUPLC-MS\MS文稿版次选择2016-12-30发布2017-01-30实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2777—2016I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业部农产品质量安全风险评估实验室（合肥）、安徽省畜牧技术推广总站、池州市农产品质量安全监测中心、安徽科立特农药环境科技评价有限公司、繁昌县植保站。本标准起草人：段劲生、孙明娜、高同春、李瑞、王梅、董旭、肖青青、褚玥、许四五、吴爱美、彭卫兵、朱玉杰、杨通。DB34/T2777—20161大米中肟菌酯残留量的测定液相色谱串联质谱法1范围本标准规定了大米中肟菌酯残留量的液相色谱串联质谱法。本标准适用于大米中肟菌酯及其代谢物肟菌酸残留量的测定。本标准的方法检出限为0.05mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样用水和含甲酸的乙腈混合溶液提取后，经基质固相分散萃取技术净化，用超高效液相色谱反相分离，三重四杆质谱仪测定，外标法定量。4试剂与材料4.1水为GB/T6682规定的二级水。以下凡是无特殊注明的试剂均为分析纯。4.2甲醇：色谱纯。4.3乙腈。4.4乙腈：色谱纯。4.5甲酸。4.6甲酸：色谱纯。4.7氯化钠。4.8无水硫酸镁。4.9C18吸附剂。4.10无水醋酸铵：色谱纯，纯度≥99％。4.11肟菌酯标准品：纯度≥99％。4.12代谢物肟菌酸标准品：纯度≥99％。4.130.22μm微孔过滤膜DB34/T2777—201624.14标准溶液——肟菌酯标准储备液：准确称肟菌酯0.0100g，置于10.0mL容量瓶中，色谱甲醇溶解并定容至刻度，配置成浓度为1000μg/mL储备液，于0～5℃下避光保存。——代谢物肟菌酸标准储备液：准确称肟菌酸0.0100g，置于10.0mL容量瓶中，色谱甲醇溶解并定容至刻度，配置成浓度为1000μg/mL储备液，于0～5℃下避光保存。——肟菌酯及其代谢物肟菌酸混合标准工作液：分别取1000μg/mL肟菌酯储备液和1000μg/mL代谢物肟菌酸储备液，用色谱乙腈稀释，配成质量浓度分别为2.0μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL和0.005μg/mL的标准工作溶液，待用。——标准工作液需现配现用。5主要仪器和设备5.1超高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。5.2汽浴恒温振荡器。5.3旋转蒸发仪。5.4涡旋装置。5.5离心机：水平转子，转速不低于5000r/min。5.6电子天平：感量0.1g和0.1mg。6分析步骤6.1试样的制备与贮藏按照GB5491的规定将不少于1000g大米（已脱壳）混匀，四分法取样，放入食品加工机粉碎，过20目筛，制成试样，放入试样瓶中密封，做上标记，并置于-20℃条件下保存，待测。6.2试样处理6.2.1提取及净化准确称取l0g（精确至0.1g）已粉碎大米试样，放入50mL离心管中，加入10mL水和30mL含0.01％（v:v）的甲酸的乙腈溶液，气浴25±2℃恒温振荡30分钟，取出向离心管中加入5g氯化钠，再次振荡5分钟后5000r/min离心5分钟，取上清液1.5mL，放入称有50mgC18、150mg无水硫酸镁的离心管中，涡旋2min，5000r/min离心5min，取上清液过0.22μm微孔过滤膜，移取600μL于进样瓶中，加入400μL乙腈，混匀后待测。6.3测定6.3.1液相色谱条件6.3.1.1色谱柱：C18柱，100mm×2.0mm（内径）或相当，粒度2.2μm或相当；6.3.1.2柱箱温度：40℃；6.3.1.3流动相：A-5mM醋酸铵的水溶液+0.02％甲酸（V:V），B-乙腈；6.3.1.4流速：0.3mL/min；6.3.1.5进样体积：2μL；6.3.1.6流动相梯度洗脱程序见表1。DB34/T2777—20163表1梯度洗脱程序梯度时间/min流动相比例/（％）流动相A流动相B2.015854.015854.185155.085156.3.2质谱条件6.3.2.1离子源：电喷雾离子源（ESI），450℃，6.3.2.2离子源接口电压：4.5KV；6.3.2.3扫描方式：正离子模式；6.3.2.4检测方式：多反应监测MRM；6.3.2.5雾化气20L/min、干燥气3L/min均为高纯氮，碰撞气氩气230KPa；6.3.2.6脱溶剂管温度：200℃；6.3.2.7参考条件和定性离子对、定量离子对见表2。表2MRM检测参数名称ESI模式定量离子m/z定性离子m/z碰撞电压1(V)CE碰撞电压2(V)肟菌酯[M+H]+409.30/186.10409.3/186.10-12.0-15.0-16.0409.3/145.15-12.0-50.0-12.0代谢物肟菌酸[M+H]+395.25/186.15395.25/186.15-12.0-20.0-16.0395.25/145.15-12.0-45.0-13.0注：*表示定量离子6.3.3测定取肟菌酯、代谢物肟菌酸的混合标准工作溶液系列（4.13.3）及试样溶液各2μL，注入超高效液相色谱串联质谱仪进行分析，用外标法定量。6.4平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行测定。6.5空白实验除不称取试样外，均按上述步骤测定。7结果计算7.1试样中的肟菌酯含量按公式(1)计算：DB34/T2777—20164mSVCSR'....................................(1)式中：R——样品中残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；S——样液中肟菌酯或代谢物肟菌酸的峰面积；C——基质标准溶液的浓度，单位为毫克每升（mg/L)；V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；'S——基质标准溶液的峰面积；m——称取的试样量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。肟菌酯的最终残留量由肟菌酯及其代谢物肟菌酸组成，以肟菌酯计，代谢物肟菌酸的残留量乘以质量系数1.036后计入。8方法的准确度和精密度8.1准确度本方法在0.05mg/kg～5.0mg/kg之间添加浓度的回收率在80％～110％之间。8.2精密度本标准精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95％的可信度来计算，本标准方法的精密度数据参照附录A。9色谱参考图见附录B。DB34/T2777—20165AA附录A（资料性附录）肟菌酯、代谢物肟菌酸精密度数据表表A.1肟菌酯、代谢物肟菌酸精密度数据表名称含量（mg/kg）重复性限r再现性限R含量（mg/kg）重复性限r再现性限R肟菌酯0.050.00120.00360.50.02020.0573代谢物肟菌酸0.050.00210.00760.50.01980.0266DB34/T2777—20166BB附录B（资料性附录）标准溶液色谱图图B.1肟菌酯标准溶液色谱图（1.0mg/L）图B.2代谢物肟菌酸标准溶液色谱图（1.0mg/L）图B.3肟菌酯、代谢物肟菌酸混合基质标准溶液色谱图（1.0mg/L）_________________________________