DB34T 2743-2016 槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法

ICS67.040X00DB34安徽省地方标准DB34/T2743—2016槐米及其制品中总黄酮含量的测定分光光度法DeterminationofFlavonesinSophorajaponicaanditsproductsSpectrophotometricmethod文稿版次选择2016-12-30发布2017-01-30实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2743—2016I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司。本标准起草人：陆玮、刘国英、胡帮超、查枢屏、王玉良、汤有宏、李安军、何宏魁、胡心行、周庆伍、杨恩贺。DB34/T2743—20161槐米及其制品中总黄酮含量的测定分光光度法1范围本标准规定了槐米及其制品中总黄酮含量的测定分光光度法。本标准适用于槐米、槐米提取液以及槐米发酵液等样品中总黄酮含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1槐米提取液Sophorajaponica’sextraction以槐米为主要原料进行提取而得到的产物。3.2槐米发酵液Sophorajaponica’sfermentationbroth以槐米作为主要原料发酵得到的产物。4方法原理本标准采用亚硝酸钠-氯化铝络合分光光度法测定槐米及其制品中的总黄酮含量。在中性或弱碱性且亚硝酸钠存在时，黄酮类化合物与铝盐生成螯合物，加入NaOH后溶液呈红橙色，在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比，符合朗伯-比尔定律。5试剂与材料5.1试剂5.1.1除另有说明外，本标准所用水应符合GB/T6682的要求。5.1.2无水乙醇：分析纯。5.1.3亚硝酸钠：分析纯。DB34/T2743—201625.1.4氯化铝：分析纯。5.1.5氢氧化钠：分析纯。5.2试剂配制5.2.1亚硝酸钠溶液（5％）：称取5g亚硝酸钠，用水溶解定容至100mL；该溶液现配现用。5.2.2氯化铝溶液（10％）：称取10g氯化铝，用水溶解定容至100mL。5.2.3氢氧化钠溶液（4％）：称取4g氢氧化钠，用水溶解定容至100mL。5.2.4乙醇溶液（60％）：量取600mL无水乙醇，用水溶解定容至1000mL。5.3标准品芦丁（C27H30O16，CAS号：153-18-4），纯度≥99.0％。5.4芦丁标准储备液配制准确称取20mg（精确至0.1mg）芦丁标准品，用60％乙醇溶液溶解定容至100mL，此溶液中芦丁含量为200mg/L。于4℃冰箱中避光保存。6仪器与设备6.1本标准中的“仪器”，为分析中所必需的仪器，一般实验室仪器不再列入。6.2紫外可见分光光度计：配1cm比色皿。6.3分析天平：感量0.1mg。6.4超声波清洗仪。6.5离心机。6.6滤膜：孔径为0.45µm。7分析步骤7.1试样制备7.1.1槐米称取粉碎均匀的槐米试样5g（精确至0.1g）于100mL烧杯中，加入30mL60％乙醇溶液，超声30min，用60％乙醇溶液定容至50mL容量瓶。离心至澄清，过滤待用。7.1.2槐米提取液试样吸取5mL提取液于100mL烧杯中，加入30mL60％乙醇溶液，超声10min，以60％乙醇溶液定容至50mL容量瓶，摇匀，过滤，待测。7.1.3槐米发酵液试样准确量取40mL发酵液于50mL具塞离心管中，离心，取上清液，用0.45µm的微孔滤膜过滤，吸取2mL滤液，以60％乙醇溶液定容至25mL容量瓶，摇匀，待测。7.2仪器条件DB34/T2743—201637.2.1测定波长：510nm。7.2.2比色皿：1cm。7.3标准曲线的制作准确吸取芦丁标准溶液（5.4）0.0，0.5，0.8，1.0，1.3，1.5，1.8，2.0mL分别置于10mL比色管中，加乙醇溶液（5.2.4）至总体积为5mL，加亚硝酸钠溶液（5.2.1）0.3mL，混匀，静置8min；再加入氯化铝溶液（5.2.2）0.3mL，摇匀，静置10min；加氢氧化钠溶液（5.2.3）4.0mL，用乙醇溶液（5.2.4）定容至刻度，摇匀，静置10min。配制成浓度为0mg/L、10mg/L、16mg/L、20mg/L、26mg/L、30mg/L、36mg/L、40mg/L的标准系列，测定其吸光度值。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。7.4试样溶液的测定吸取1.0mL待测液于10mL比色管中，加乙醇溶液（5.2.4）至5.0mL，加亚硝酸钠溶液（5.2.1）0.3mL，混匀，静置8min；再加入氯化铝溶液（5.2.2）0.3mL，摇匀，静置10min；加氢氧化钠溶液（5.2.3）4.0mL，用乙醇溶液（5.2.4）定容至刻度，摇匀，静置10min。以未加氢氧化钠试剂的溶液为空白，测定其吸光度值，根据标准曲线计算样品中总黄酮的浓度。7.5水分含量的测定按照GB5009.3规定执行。8分析结果表述8.1槐米中总黄酮的含量（以干基计）按式（1）计算：)1(100005.010)(0HmccX.............................(1)式中：X——槐米中总黄酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——由标准曲线计算得出的待测样品溶液的总黄酮浓度（mg/L）；c0——由标准曲线计算得出的空白溶液的总黄酮浓度（mg/L）；10——待测液稀释倍数；m——槐米样品的质量，单位为克（g）；0.05——槐米样品的提取液总体积，单位为升（L）；H——槐米中水分的质量分数（％）；8.2槐米制品中总黄酮的含量按式（2）计算：nccX10)(0...............................(2)式中：X——槐米制品中总黄酮的含量，单位为毫克每升（mg/L）；n——试样溶液稀释倍数。注：所得结果应表示至小数点后一位。DB34/T2743—201649精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。_________________________________