各种动物红细胞分离液说明书

北京索莱宝科技有限公司第1页共2页各种动物红细胞分离液说明书规格：200mL/kit保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。无菌开封后，保存于室温。试剂盒组成：红细胞分离液200mL细胞洗涤液200mL全血及组织稀释液200mL操作步骤：1.取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝血液均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者是PBS稀释全血。2.在离心管中加入适量分离液（当稀释后血液体积小于5mL时，加入5mL分离液；大于等于5mL，加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。）3.室温，水平转子400~600g，离心20~30min（血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超过1000g）。4.用吸管小心吸取第一、二、三层，弃去，剩余最底部的红细胞层，加入10mL细胞洗涤液或者是PBS。5.混匀细胞250g，离心10min。6.弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。7.重复步骤68.弃上清，细胞重悬备用。注意事项：A.开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物北京索莱宝科技有限公司第2页共2页污染。。B.分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。C.血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2h以内），应避免冷冻和冷藏。D.稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。E.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。F.血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离条件。G.如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。H.不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。参考文献：1.BoyumA.Separationofleucocytesfrombloodandbonemarrow.ScandJClinLabInvestSuppl.1968;97:7.2.TingA,MorrisPJ.Atechniqueforlymphocytepreparationfromstoredheparinizedblood.VoxSang.1971Jun;20(6):561-3.3.BoyumA.SeparationofBloodLeucocytes,GranulocytesandLymphocytesTissueAntigens.1974;4(4):269-74.4.WeisbartRH,WebbWF,BluestoneR,GoldbergLS.Asimplifiedmethodforlymphocyteseparation.VoxSang.1972;23(5):478-80.