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实验二鱼类采血技术与血细胞生理血液：是一种由血浆和血细胞组成的流体组织，由心脏搏动推动在心血管系统中不断循环流动，具有运输、防御和免疫、维持内环境的相对稳定和参与体液调节等多种功能。血液组成红细胞脆性与溶血：红细胞具有选择透过性，高渗失水，低渗吸水，低渗条件下或其他原因致使红细胞易破裂导致血红蛋白逸出称溶血。1．学习鱼类采血的主要方法，掌握鱼类尾柄动脉采血技术；2．了解血液的组成，进一步深刻认识血浆与血清的主要区别。3．观察红细胞在不同浓度生理盐水中的细胞形态，进一步认识红细胞的渗透脆性。鲫鱼肝素钠溶液、MS-222溶液，生理盐水（1%，0.65%，0.3%）、蒸馏水。解剖盘1个、毛巾1块，1mL注射器5个、烧杯（200mL）、1.5mL离心管（10个）、显微镜、载破片5片、滴管2支、拭镜纸。1、血液采集（1）实验鱼的麻醉将鲫鱼先放入MS-222溶液的桶中，进行实验鱼的麻醉，当鲫鱼在麻醉剂溶液中缓慢运动或在桶中侧翻时，这时表明麻醉的程度比较适中。鱼类麻醉前后对比示意图（2）取血的准备将准备好的1mL注射器，一只不作任何处理，一只抽动活塞用肝素钠溶液将注射器内湿润，为血液的采集做好准备工作。（3）血液的采集注射器的针头从臀鳍基部下针，将针头沿着垂直于尾柄的方向推进，使针头刚好尾部脊柱的下侧，此时保证针头的位置不随意挪动，右手大拇指和食指带动活塞向外运动，经大气压力将血液压入注射器中。2、血清、血浆的制备①血清的制备用未经肝素钠溶液处理的注射器所采集的血样，注入离心管后让其静止放置20分钟，待血液凝结后所析出的上清液即为血清。②血浆的制备经肝素钠溶液处理的注射器所采集的血样，注入离心管后放置1小时，或者3000转/分钟转速下离心5分钟，获得的上层淡黄色液体即为血浆。③比较血浆和血清两者存在的区别。3、红细胞的渗透脆性①等渗观察用滴管吸0.65%的生理盐水，吸1mL左右滴入1只新的离心管中，再将刚采取的新鲜血液（或去纤维蛋白血）用注射器轻轻推1-2滴到该生理盐水中，待轻轻颠倒混匀后，用吸管滴1滴到载玻片上，放于显微镜下观察细胞的形态。②渗透失水用滴管吸1%的生理盐水，吸1mL左右滴入1只新的离心管中，再将刚采取的新鲜血液（或去纤维蛋白血）用注射器轻轻推1-2滴到该生理盐水中，待轻轻颠倒混匀后，用吸管滴1滴到载玻片上，放于显微镜下观察细胞的形态。③渗透吸水用滴管吸0.3%的生理盐水，将1mL左右生理盐水滴入1只新的离心管中，再将刚采取的新鲜血液（或去纤维蛋白血）用注射器轻轻推1-2滴到该生理盐水中，待轻轻颠倒混匀后，用吸管滴1滴到载玻片上，放于显微镜下观察细胞的形态。④脆性鉴定再将新鲜血液滴入蒸馏水中，观察细胞的形态。1．麻醉实验鱼时不要过度麻醉，会对血液的流动产生一定的影响，最终导致采血困难。同时，麻醉的时间也不能过短，否则影响采血操作。2．肝素钠溶液处理注射器时，一定要将注射器内部全部湿润，否则仍可能会产生凝血。3．下针的位置有要准，一定要刺到脊柱腹侧，且针头不能轻易变动位置，不然血液很难抽出，若出现位置失误，应该重新再试一次。4．未经肝素钠处理的注射器，抽出的血液要尽快注入到离心管中，避免血液在注射器中凝固。5．血液颠倒混匀的过程要轻，不能太剧烈，否则容易导致溶血。6．离心的速度不能太快，否则易导致溶血。1.描述血浆与血清的主要特点，并说出他们的主要区别。2.描述不同浓度下红细胞的形态结构，以及形成这种结果的原因。3.描述尾柄动脉采血的过程。1．采出的血液很快凝固，这是由什么原因导致的?2．采血的过程中，为什么针头不能随意扭动?3．红细胞在高渗溶液中，形态变得褶皱，这是什么原因导致的？4．简述血液脆性与生理盐水浓度的关系。