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第二节分离特定的微生物并测定其数量[随堂检测][学生用书P19]知识点一微生物分离和纯化方法1．下列关于微生物分离的叙述中，错误的是()A．平板分离法能将单个微生物经过培养形成便于移植的菌落B．只有细菌才可以形成菌落，所以只有分离细菌时才可能获得菌落C．平板分离法有涂布平板法和混合平板法等D．涂布平板法得到的菌落仅在平板的表面生长解析：选B。大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类均能在固体培养基上形成菌落。2．分离纯化大肠杆菌最常用的方法是平板划线法和涂布平板法。下列有关这两种方法的叙述错误的是()A．均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面B．获得的每个菌落均是由一个细菌繁殖而来的子细胞群C．都应在酒精灯火焰附近进行操作，以防止杂菌污染D．稀释分散菌种的原理不同，均能达到分离纯化大肠杆菌的目的解析：选B。用涂布平板法时，如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能是由一个细菌细胞繁殖形成的。3．漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，下列相关叙述错误的是()A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化D．在适宜温度下，接种后的斜面培养基上菌落长成后，可在低温下临时保存菌株解析：选A。生活污水中含有大量微生物，但不一定含有产漆酶的菌株，A错误；筛选培养基中需要加入漆酶的底物，只有产漆酶的微生物才能在该培养基上生长，进而通过菌落特征挑出产漆酶的菌落，B正确；由图可知，在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化，C正确；在适宜温度下，接种后的斜面培养基上菌落长成后，可在低温下临时保存菌株，D正确。知识点二土壤微生物的分离和计数4．下列关于纤维素分解菌分离实验的说法，不正确的是()A．通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌B．从土壤中分离含量较多的微生物时，选择培养可以省略C．该实验用到选择和鉴别培养基D．在用刚果红染色法中，若将微生物培养在事先加入刚果红的培养基上，出现透明圈的菌落肯定为所需菌种解析：选D。刚果红能鉴别纤维素，可采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌，A正确；从土壤中分离含量较多的微生物时，选择培养可以省略，但需要进行鉴别培养，B、C正确；有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，故出现透明圈的菌落不一定为所需菌种，D错误。5．如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是()A．3号试管的稀释倍数为103倍B．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰好为5号试管的10倍C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高答案：C6．某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________________________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________________________________________________________________________(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________________________________________________________(答出两点即可)。解析：(1)土壤中的某些细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能产生脲酶。尿素分解菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物，必须利用现成的有机物(如葡萄糖)作为碳源；葡萄糖通过呼吸作用被分解时，能为细胞生命活动提供能量，同时，葡萄糖还可以转化成脂肪、某些氨基酸等物质，所以进入细菌体内的葡萄糖能为其他有机物的合成提供原料。(2)选择培养基是只允许特定种类的微生物(目的微生物)生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本实验的目的菌是可分解尿素的细菌，因此，配制的培养基应只允许尿素分解菌生长，NH4NO3可以作为所有细菌的氮源，培养基中如含有NH4NO3，将不能起到筛选作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4能为细菌生长提供钾盐、钠盐和磷酸盐，而H2PO－4/HPO2－4可以使培养基中pH保持相对稳定。答案：(1)脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定[课时作业][学生用书P65(单独成册)]一、选择题1．下图所示的四种菌落分布图中，用平板划线分离法得到的是()解析：选D。平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到纯化分离微生物的一种方法，如图D所示。2．产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()A．一个细菌、液体培养基B．许多细菌、液体培养基C．一个细菌、固体培养基D．许多细菌、固体培养基解析：选C。菌落是单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。3．欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是()A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C．可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D．用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌解析：选D。A选项：为防止土壤浸出液浓度过高，不能获得单菌落，要将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确。B选项：同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，B正确。C选项：可以将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以判断培养基灭菌是否彻底，C正确。D选项：用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解纤维素的细菌，D错误。4．将0.1mL101、102、103倍稀释的土壤悬液分别接种在固体平板上，得到的平均菌落数为2760、585和46，则细菌总数(个/mL)为()A．2.76×105B．5.86×105C．4.6×105D．4.4×105解析：选C。注意菌落计数法计算的是不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30～300之间的，只有一个稀释倍数的平均菌落数符合此范围，所以细菌总数为：46÷(0.1)×103(个/mL)，即4.6×105个/mL。5．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水解析：选A。能选择出分解尿素的细菌的培养基，应是只以尿素作为唯一氮源的培养基，B选项没有氮源；C选项没有碳源；D选项没有尿素，有蛋白胨和牛肉膏。6．下列有关涂布平板操作的叙述，不正确的是()A．将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红B．取少量菌液滴加在培养基表面C．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s再使用D．涂布时可转动培养皿，使涂布均匀答案：A7．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A．图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B．如果要测定②中活细菌数量，常采用涂布平板法C．若图中④为对照组，则其中应以苯酚作为唯一碳源D．使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落答案：C8．分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是()A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒解析：选C。制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，A错误；涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，B错误；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大，C正确；接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒，可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，D错误。9．利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇，从而减少了对石油资源的依赖，下图为生产燃料乙醇的简要流程，据图分析错误的是()A．要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样B．图中②过程常用的微生物B是酵母菌C．微生物A和微生物B可利用的碳源相同D．可用纤维素酶制剂代替微生物A起作用解析：选C。微生物A所用碳源为纤维素，微生物B所用碳源为纤维素降解物。10．在做分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从对应106倍稀释的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学的结果产生原因可能有()①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④解析：选A。甲同学比其他同学的实验数据大许多，可能由于选取的土样不同，培养基灭菌不彻底或操作过程中杂菌污染，也可能操作失误，如配制的培养基中混入其他含氮物质、稀释度不够准确等。11．原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确的是()A．应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基C．将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上D．在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种解析：选C。为了筛选、获取能利用多环芳烃为碳源的菌种，首先取材，配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用，A项正确；其次配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基，B项正确；然后进行接种，在无菌环境下，将土壤稀释液接种到选择培养基上，在适宜的条件下进行培养，若将土壤稀释液灭菌，就不能筛选出能高效降解原油的菌株，C项错误；在选择培养基上形成的菌落，若该菌落周围有分解圈，即为所需菌种，D项正确。12．下面是鉴别纤维素分解菌的培养基，判断鉴别纤维素分解菌的现象应是()羧甲基纤维素钠5～10g酵母膏1gKH2PO40.25g琼脂15g土豆汁100mL用蒸馏水定容到1000mLA.在液体培养基中有微生物存活B．在固体培养基的表面有菌落的形成C