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课时分层作业(四)微生物的实验室培养(建议用时：35分钟)[基础达标练]1．不同培养基的具体配方不同，但一般都含()A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素C[培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。]2．如何判断制作的培养基是否灭菌彻底()A．看培养基是否透明B．有没有消灭细菌菌体C．未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后有无菌落生长D．是否消灭了微生物的芽孢、孢子C[配制好的培养基，是否灭菌彻底，通常在使用前在恒温箱中保温1～2天后检验有无菌落生长，若无则说明灭菌彻底。]3．获得纯净培养物的关键是()A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌B．接种纯种细菌C．适宜环境条件下培养D．防止外来杂菌的入侵D[获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。]4．在微生物的实验室培养中，下列各项操作不需要在无菌条件下进行的是()A．配制培养基B．倒平板C．接种D．培养A[配制培养基时不需要无菌操作，因为配制后的培养基需要进行高压蒸汽灭菌。]5．能够测定样品活菌数的方法是()A．稀释涂布平板法B．重量法C．直接计数法D．比浊法A[利用稀释涂布平板法能够在不影响生活的情况下，将细菌个体从固体培养基上分离出来，并可以繁殖形成菌落，可根据菌落数测定样品活菌数。]6．煮沸消毒法与巴氏消毒法的主要区别是()A．温度不同B．时间不同C．前者适用于固体消毒，后者适用于液体消毒D．没有区别A[煮沸消毒法是指在100℃条件下煮沸5～6min，而巴氏消毒法则是在70～75℃条件下煮30min或在80℃条件下煮15min，二者的关键区别是温度不同。]7．关于牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备，叙述错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板D．等平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置A[制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时，其操作顺序为计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板；由于牛肉膏比较黏稠，称量时可连同称量纸一同放入烧杯；待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板；平板冷凝后，应将平板倒过来放置，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。]8．下列有关稀释涂布平板法的叙述中，错误的是()A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．适宜条件下培养D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落D[稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。故选D。]9．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察、计数。请回答与此实验相关的问题：(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌的培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是________。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般来说，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。[解析]用于培养微生物的培养基中，一般含有微生物所需要的碳源、氮源、水和无机盐等成分，碳源、氮源一般分别由糖类和蛋白质类物质所提供。对培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。在检测湖水中细菌的污染情况时，应设置对照实验，才能得出可靠的结果。[答案](1)氮源碳源无机盐水(2)高压蒸汽灭菌法(3)恒温培养箱无菌水(4)多高10．在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：配制培养基―→灭菌、倒平板―→培养―→观察请回答下列有关问题：(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是________________________。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是______________。(2)倒平板的适宜温度是50℃左右，原因是______________。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止____________________。(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的________；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的________。ABCD(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_______________________。(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。[解析]培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要调节pH。由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头滴管，D为接种针，故稀释平板法应选择的涂布工具应是B，平板划线法应选择的接种工具是A。由题意分析可知，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。[答案](1)所培养微生物对各营养成分的需要量调整pH(2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固皿盖上的水珠落入培养基，造成污染(3)BA(4)①接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域末端开始(5)灭菌[能力提升练]11．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A．培养基分装到培养皿后进行灭菌B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D．培养过程中每隔一周观察一次B[培养基灭菌后再分装到培养皿中；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线；接种后的培养皿必须放在恒温箱中进行培养，一般每隔12h或24h观察一次。]12．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下列叙述实验结束后的做法错误的是()A．对接种环进行灼烧处理B．带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉C．带菌培养基必须经加热后才能倒掉D．接种后双手必须用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭C[金黄色葡萄球菌有很强的致病力，所以在操作时一定要做到安全防范，接种后双手用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到杀菌的作用；对接种环进行灼烧也可以杀灭细菌，防止污染环境；高压蒸汽灭菌也可杀死培养基中的金黄色葡萄球菌；如果只对带菌培养基进行加热，杀不尽其中的致病菌，因为此菌的耐高温能力很强，会污染环境。]13.如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是()A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B．划线操作须在火焰上进行C．在5区域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌D[本题考查平板划线的操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。]14．下列关于四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，其中正确的一组是()项目硝化细菌乳酸菌酵母菌衣藻能源氧化NH3分解乳酸固定N2利用光能碳源CO2糖类糖类CO2氮源NH3N2N2NO－3代谢类型自养需氧型异养需氧型异养需氧型自养需氧型A．硝化细菌、乳酸菌B．乳酸菌、酵母菌C．酵母菌、衣藻D．硝化细菌、衣藻D[本题考查的知识有：①各种微生物的代谢类型，②微生物所需的能源、碳源和氮源的不同。解答此题时应明确：硝化细菌、乳酸菌属于细菌，酵母菌属于真菌，衣藻属于真核生物。微生物所需的能源、碳源、氮源因其同化作用类型的不同而不同。]15．下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：试剂牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂加水定容至用量5g10g5g20g1000mL(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是____________________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行________处理。(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需进行清洗和________；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质________，还能损伤DNA的结构。(4)分离纯化微生物最常使用的接种方法是______________和____________。(5)在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是__________________________________________________________________________________________________________。[解析](1)培养基中都应含有水、无机盐、碳源、氮源。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。(2)配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(3)灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以要对培养基和培养皿进行灭菌。消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物，故操作者的双手需要进行清洗和消毒。紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。(4)分离纯化微生物常采用平板划线法和稀释涂布平板法。(5)培养微生物时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。[答案](1)氮源牛肉膏和蛋白胨灭菌(2)温度酸碱度(3)灭菌消毒变性(4)平板划线法稀释涂布平板法(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生