安捷伦1100培训手册

Agilent1100化学工作站操作培训No.2Agilent1100化学工作站培训日程安排第一天上午：1欢迎，相互介绍2液相色谱基础3HPLC仪器工作原理下午：1Agilent1100硬件的结构及特点（真空脱气机、泵、自动进样器、检测器）2Windows操作系统简介3化学工作站的重新安装、配置及启动4练习（实验一）第二天上午：1化学工作站View菜单介绍2方法的编辑、修改、存贮及运行3Agilent各部件采集参数设置4填写样品信息表、进样分析（实验二）下午：1数据处理参数设置（谱图优化、积分优化）2练习3谱图处理、手动积分No.3第三天上午：1各种定量方法原理及其优缺点2建立多级外标校正曲线，用外标法定量3练习（实验三）下午：1建立多级内标校正曲线，用内标法定量2再校正、设定报告类型3练习（实验四）4高级功能简介（序列、DAD光谱功能……）第四天上午：1系统日常维护和保养2工作站故障诊断功能的应用3Agilent1100泵的维护（拆泵头，更换泵头消耗品）4Agilent1100检测器的维护（VWD、DAD易耗品的更换，清洗流通池）5练习结业午餐下午：1考试2发结业证3自由练习、讨论No.4第一章色谱基础本章内容：•液相色谱发展史•液相色谱的基本概念•影响峰形扩展的因素No.5历史回顾0NNNNMgCHCH23CH3CH3HC30CH3CH3CH30CH300M.S.Tswett.Ber.Dtsch.Bot.Ges.24:384-393(1906)1906-MikhailSemenovichTswett(1872-1919)碳酸钙吸附剂石油醚1940‘s-分配色谱和纸色谱1950‘s-气相,薄层，凝胶过滤色谱梯度洗脱色谱1960‘s-商业高效液相色谱.No.6柱色谱装载样品装载溶剂重力洗脱玻璃柱硅胶氧化铝纤维素糖类粉末滤网1050100150Volume(mL)Time(hr)1.02.03.04.0No.7高效液相色谱进样口检测器色谱图色谱柱溶剂泵混合器(HPLC)No.8液相色谱类型TypesofCompoundsSeparatedNeutralsWeakAcidsWeakBasesIonics,Bases,AcidsCompoundsInsolubleinWater,OrganicIsomersIonicsInorganicIonsHighMWCompoundsPolymersModeReversed-PhaseIon-PairNormal-PhaseIonExchangeSizeExclusionStationaryPhaseC-18,C-8,C-18,C-8Silica,Amino,CyanoDiolAnionorCationExchangePolystyreneMobilePhaseWater/OrganicModifiersWater/OrganicIon-PairReagentOrganicsAqueous/BufferCounterIonGelFiltration-AqueousGelPermeation-OrganicSilicaResinC-4,C-2No.9色谱参数DetectorResponseTimeABWWABInjectt0tR(A)tR(B)t=保留时间t=死时间RW=峰底宽度0－定性和定量tR(B)-tR(A)WA+WBR=2tR(B)-tR(A)W1/2A+W1/2B=1.176K’=tR-t0t0No.10不同R值的峰重叠R=1.5可以得到基线分离0.40.50.60.70.81.001.25No.11影响R值的因素ΔtW=R=1/4Nxα-1xk'1+k'容量因子选择性柱效αNo.12容量因子各组份的容量因子（K’）随溶剂洗脱强度的变化增大或缩小增加流动相的洗脱强度，降低了洗脱物的容量因子对于反相色谱，增加10％的有机组成等于降低每个色谱峰的K’值的1/2到2/3。溶剂洗脱强度弱溶剂洗脱强度强246810110070030010060%AcetonitrileTime(min.)mAU20001600600080%AcetonitrileTime(min.)mAU100040%Water20%Water246810No.13分离选择性改用不同的流动相改变流动相的组成改变流动相pH值改变柱温应用特殊的化学效应改变固定相(α)改变分离选择性α的方法t0=1=k'k'BAAB23AB12AB12==1.641.58=1.04=1.150.85=1.35=0.950.63=1.50k'k'BAααααNo.14温度对分离选择性α的影响40℃60℃1005TimeinMinutesNo.15柱效DetectorResponseInjectTime高柱效低柱效No.16InjecttRWWTimeN=16=5.54HETP=tRW2tR2LN1/2W1/2BB计算柱效No.17扩散HETPBuA线速度A=涡流扩散B=自由分子扩散C=传质阻力范德姆特方程TheVanDeemterEquationNo.18初始带宽最终带宽AA=涡流扩散——多径扩散仔细填充柱子使用均一的载体线速度HETP扩散No.19扩散BB=自由分子扩散——纵向扩散在液相中影响小在低流速中影响大线速度HETPNo.20扩散滞流的流动相流动相固定相C=传质阻力在低流速下可以降低传质阻力使用小颗粒载体可以降低传质阻力HETP线速度No.21扩散HETPBuA线速度A=涡流扩散B=自由分子扩散C=传质阻力范德姆特方程TheVanDeemterEquationNo.22柱外效应样品体积I.连接管路的体积色谱柱进口设计色谱柱出口设计检测池体积(10µL)II.III.IV.V.降低输出回路响应时间VI.No.23不同分离度比较PoorefficiencyModerateselectivityPoorefficiencyGoodselectivityExcellentefficiencyPoorselectivityExcellentefficiencyModerateselectivityR=1R=1.5R=0.5R=4No.24如何提高分离度通过下述方法增加保留时间:选择合适的分离参数增加色谱柱长度增加固定相浓度通过下述方法降低谱带宽度:使用均一的载体仔细填充柱子选择粒度小的载体优化流速减小进样量降低系统死体积降低输出回路响应时间No.25第二章HPLC仪器工作原理本章内容：•往复活塞泵的结构及工作原理•手动进样器（六通阀）结构及工作原理•常见检测器检测原理No.26溶剂传输系统往复活塞泵(单向阀)GoldSealSapphireInsertRubyBallSpringInsertNo.27溶剂传输系统减小流量脉冲－并联柱塞泵单向阀PABABSinglePistonDelivery柱塞A前进柱塞B后退CombinedDelivery相消干扰通常也需要阻尼器增加了单向阀的使用数量PNo.28溶剂传输系统消除流量脉冲－串联柱塞泵单向阀P需要阻尼器减少了单向阀用量压缩因子补偿脉冲阻尼器Forinternaluseonly11Agilent1100SeriesPumps:SolventCompressibilityCompensationTIME0100OnePistonCycleSystemPressure=0SystemPressure0PistonDisplacement(祃)w/ocompensationwithcompensationNo.29ToWasteSampleLoop(FixedVolume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToColumnPumpFromPumpToWaste手动进样器－六通阀No.30检测器使用统计43.0%22.0%10.0%8.0%7.0%5.0%1.0%4.0%UV-VISDADFluorescenceRefractiveIndexElectrochemicalConductivityMassspecOthersNo.31NecessityforMorethanPAH'sextractedfromsoil;Col.:Sup.LC-PAH150x4.6mm;Solv.:H2O/CH3OH=10:90FluorescenceUV-signalWL241/394WL270/388WL248/411WL302/420WL247/504SensitivityOneDetectorNo.32NecessityforMorethanOneDetectorFlecainideinSerumTherapeuticconcentration:1.8mg/l,20ulinjectedUVandfluorescencesignalFLsignalUVsignalSelectivityNo.33需要多个检测器QualitativeInformationTakepeakspectrum(UV)Chlortoluron?44685896132138158172215200Takepeakspectrum(MS)104Mass/ChargeAtrazine?Wavelength(nm)6080100120140160180200220200250No.34紫外－可见检测器根据Beer定律，通过检测池透射光的强度与溶质浓度成正比。I0=入射光强度I=透射光强度A=吸光度a=摩尔吸光系数b=检测池长度c=溶质浓度IICboDetectorCellLog=A=abcI0INo.35发色团吸收波长ChromophoreAmineEthyleneKetoneEsterAldehydeCarboxylNitroPhenylNaphthyl-NH-C=C-C=O-COOR-CHO-COOH-NO195190195205210200-210310202,255220,275max(nm)22--max=wavelengthofabsorptionmaximumStructureNo.36Instrumentation-AbsorbanceVariableWavelength(UV/Visible)LightMonochromatorflowSourceCellDetectorElementSlitsMechanicalGratingDetectorsNo.37Instrumentation-AbsorbancePhotodiodeArray(UV/Visible)LightFlowSourceCellPhotodiodeLensesSlitsArrayHolographicGratingDetectorsNo.38DAD-PeakPurityGraphicalandNumericalResults200200400400PurityMatch764PurityMatch999impurepureSignalSpectraWavelength(nm)Wavelength(nm)Time(min.)7.67.88.08.28.6No.39InstrumentationFluorescenceDetectorsGrating-GratingFlowCellPhotomultiplierTubeLightSourceExcitationEmissionVariableExcitationandEmissionWavelengthsNo.40InstrumentationRefractiveIndexDetectorsSampleReferenceSampleCellReferenceCellPhotodiodesBeamDeflectionFresnelPrismLaserInterferometerReferenceSampleNo.41第三章固定相结构本章内容：•固定相载体结构•正相色谱固定相•键合相色谱固定相No.42ParticlesofColumnPackings50µmLargePor