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中华人民共和国农业行业标准NY/T1155.11—2011农药室内生物测定试验准则除草剂第11部分：除草剂对水绵活性测定试验方法Pesticideguidelinesforlaboratorybioactivitytests—Part11:HerbicideactivityonSpirogyracrassa2011-09-01发布2011-12-01实施ICS65.100B17中华人民共和国农业部发布NY/T1155.11—2011Ⅰ前言NY／T1155《农药室内生物测定试验准则除草剂》分为11部分：——第1部分：活性试验平皿法；——第2部分：活性测定试验玉米根长法；——第3部分：活性测定试验土壤喷雾法；——第4部分：活性测定试验茎叶喷雾法；——第5部分：水田除草剂土壤活性测定试验浇灌法；——第6部分：对作物的安全性试验土壤喷雾法；——第7部分：混配的联合作用测定；——第8部分：作物的安全性试验茎叶喷雾法；——第9部分：水田除草剂活性测定试验茎叶喷雾法；——第10部分：光合抑制型除草剂活性测定试验小球藻法；——第11部分：除草剂对水绵活性测定试验方法。本部分为NY／T1155的第11部分。本部分按照GB／T1.1—2009给出的规则起草。本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本部分起草单位：农业部农药检定所、中国农业大学农学与生物技术学院。本部分主要起草人：张佳、张宏军、张文君、倪汉文、崔海兰、周欣欣、聂东兴。NY/T1155.11—20111农药室内生物测定试验准则除草剂第11部分：除草剂对水绵活性测定试验方法1范围本部分规定了除草剂对水绵活性测定试验的基本方法和要求。本部分适用于农药登记用除草剂对水绵活性测定的室内试验和评价。2试验条件2.1试验靶标水绵（Spirogyracrassa）。2.2仪器设备2.2.1人工气候箱；光照强度为0lx～30000lx，温度为10℃～50℃，湿度为50%～95%；或能达到以上光照强度、温度、湿度要求的可控日光温室。2.2.2分光光度计；离心机；天平、移液管或移液器、比色皿、带刻度带塞的离心管、研钵等常用实验设备。2.3试剂碳酸钙；90%(V／V)丙酮溶液。3试验设计3.1试材准备3.1.1培养液的配制从没有使用过可能对试验结果产生影响的化肥和农药的有机质含量≥2%的土壤取土样100g，按1:10的比例加水，混匀，高压灭菌后备用。配制培养液的土壤应分析有机质含量、pH、氮磷钾的含量、土壤质地。3.1.2水绵的培养从稻田采集供试的水绵，用灭菌水冲洗干净。500mL的三角瓶装上250mL的培养液，然后加入水绵，用牛皮纸封口后置于植物生长箱中培养。培养条件：16h光照／8h黑暗，15℃～18℃。3.2药剂3.2.1试验药剂原药（母药）或制剂，标明生产厂家以及生产日期或批次。3.2.2对照药剂采用已登记注册且生产上常用农药的原药（母药）或制剂作为对照药剂。尽量选用化学结构类型或作用方式应与试验药剂相同或相近药剂。3.3药剂的配制水溶性原药用蒸馏水溶解，其他原药选用合适的溶剂溶解，加上合适的表面活性剂，然后用蒸馏水稀释。制剂直接兑蒸馏水稀释。试验药剂和对照药剂各设5个～7个系列剂量。3.4药剂处理按设计的处理剂量，将药剂加入培养液，混匀后倒人50mL的三角瓶中。每个三角瓶装药液25mL，加入用吸水纸吸掉表面水分的0.5g水绵。然后按3.1.2方法培养。每处理至少重复4次，设NY/T1155.11—20112空白对照和溶剂对照。4调查4.1调查时间根据药剂的类型在不同处理的效果出现差异后进行调查。4.2叶绿素的提取把水绵转到研钵中，加入90%丙酮溶液5mL和少许碳酸钙，研磨成匀浆，再加90%丙酮溶液5mL，匀浆后转入带刻度离心管中，并用适量90%丙酮溶液洗涤研钵，一并转入离心管，向离心管中加入90%丙酮溶液至12mL。盖上管塞，置于4℃暗处提取24h。提取完毕后，置离心管于离心机中，以4000r／min转速离心10min。离心完毕，取出离心管，将上清液移入容量瓶中。向离心管中加入90%丙酮至5mL，悬浮沉淀物。盖上管塞，再次离心10min。合并上清液，并用90%丙酮溶液定容至20mL。4.3光密度值的测定取…提取液加入比色皿中，以90%的丙酮溶液作为空白，分别在750nm、663nrn、645nm和630nm波长下测提取液的光密度值。5数据统计与分析5.1计算方法5.1.1叶绿素a含量从各波长的光密度值中减去波长750nm的光密度值作为已校正过的光密度值(OD)，叶绿素a的浓度按式(1)计算：663645630(11.642.160.1)/()aCODDODVML=−+××………………………(1)式中：Ca——水绵的叶绿素a浓度，单位为每克微克(µg／g)；V——提取液的定容体积，单位为毫升(mL)；M——水绵的重量，单位为克(g)；L——比色皿的宽度，单位为厘米(cm)；OD——校正过的提取液光密度值。5.1.2水绵抑制率水绵抑制率按式(2)计算：121()/100aaaECCC=−×………………………………………(2)式中：E——抑制率，单位为百分率(%)；Ca1——对照的叶绿素a浓度；Ca2——处理的叶绿素a浓度。5.2统计分析应用标准统计软件（如：SAS、SPSS等）对药剂剂量的对数值与抑制率的机率值进行回归分析，计算水绵ED90或ED50值及95%置信限。6结果与报告编写根据结果进行分析、评价，写出正式试验报告，并列出原始数据。