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NY82.15—1988中华人民共和国农牧渔业部部标准果汁测定方法β‐胡萝卜素的测定NY82.15—1988本标准等同采用国际果汁联盟IFJU分析法。No.44（1972）—总类胡萝卜素和β‐胡萝卜素的测定。1原理利用甲醇‐石油醚将果汁中的总类胡萝卜素抽提出来，经氧化铝柱层析，使β‐胡萝卜素与其它色素分离，将洗脱液于450nm波长处进行比色测定。2试剂2．1甲醇（京Q/HG10—1506—1976）：分析纯。2．2石油醚：（HG3—1003—1976）：分析纯，沸程60～90℃。2．3硫酸钠（GB639—1977）：分析纯。2．4石英砂：过筛，用浓盐酸浸泡，除去铁质，再以稀氨水浸泡，昀后用蒸馏水冲洗至中性，烘干备用。2．5氧化铝（HGB3413—1962）：分析纯，用8%水使部分失活。2．6标准β‐胡萝卜素溶液：溶解20mgβ‐胡萝卜素于少量氯仿中，用石油醚（2.2）稀释至50mL，用时吸取2mL再以石油醚稀释至100mL,浓度为8μg/mL。注：用氧化镁代替氧化铝，效果也很好。3仪器3．1分析天平：感量0.0001g。3．2分光光度计。3．3层析柱：φ2㎝，L25㎝的层析柱。3．4分液漏斗：250mL。3．5过滤器。3．6真空浓缩器。3．7容量瓶：50mL、20mL。3．8移液管：5mL、10mL、25mL。4测定程序4．1提取准确称取10g果汁于烧杯中，加入30～40mL甲醇和石油醚溶液（1∶1），搅拌，过滤。转移滤液至分液漏斗中，加入甲醇和石油醚溶液（1∶1）重复提取，直至石油醚相呈无色。4．2洗涤加蒸馏水100mL于分液漏斗中，旋摇使提取液中的甲醇溶于水中，静置澄清，放掉下面含有甲醇的水层。经反复洗涤，直至提取液中的甲醇与石油醚完全分离。加入无水硫酸钠干燥石油醚层，然后过滤到200mL容量瓶中，用石油醚洗涤硫酸钠，洗涤液并入容量瓶中，再用石油醚稀释至刻度。4．3浓缩中华人民共和国农牧渔业部1988－01－27发布1988－08－01实施中华人民共和国农牧渔业部1988－01－27发布1988－08－01实施NY82.15—1988取175mL提取液真空浓缩至5mL左右。为清除痕量残留的甲醇，再取10mL石油醚，真空浓缩至2～3mL。重复两次。4．4柱层析及洗脱层析柱中，氧化铝的填充高度为8㎝。先用8%的水使部分失活。再加入纯石油醚，当石油醚流出至液面刚好填过氧化铝层为止。将浓缩提取液加入层析柱中，使各种色素在柱上逐渐分离，而石油醚淋洗液则由下端流出。当加入约25mL石油醚后，β‐胡萝卜素馏分便到达柱子的下限。此时，可再加入25mL石油醚淋洗，将馏出液收集在25mL量筒中，转移至50mL容量瓶中，并用石油醚洗涤量筒数次，合并洗涤液于容量瓶中，昀后用石油醚定容。4．5比色测定标准曲线的绘制：用浓度为8μg/mL的标准胡萝卜素溶液配制成一系列浓度为0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4μg/mL的石油醚溶液，用纯石油醚作空白，用1cm比色皿，于450nm波长处测读吸光值。以吸光值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。用同样方法测读提取液的吸光值。从标准曲线中查出其含量。5结果的表示和计算β‐胡萝卜素的含量表示为mg/100mL试液，取两位小数。对浓汁应表示为mg/100g试液，取两位小数。附加说明：本标准由北京农业工程大学负责起草。本标准主要起草人：张坤英。中华人民共和国农牧渔业部1988－01－27发布1988－08－01实施中华人民共和国农牧渔业部1988－01－27发布1988－08－01实施