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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１６２—２００８壳聚糖抗菌棉纺织品检验规程犚狌犾犲狊犳狅狉狋犺犲犻狀狊狆犲犮狋犻狅狀狅犳犮狅狋狋狅狀犳犪犫狉犻犮狋狉犲犪狋犲犱狑犻狋犺犮犺犻狋狅狊犪狀犪狀狋犻犿犻犮狉狅犫犻犪犾犪犵犲狀狋２００８０９０４发布２００９０３１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言本标准的附录Ａ、附录Ｂ均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、江南大学。本标准主要起草人：季晓丹、邓炳耀、邓瑾、姚静、高卫东、孙萍、王世花。本标准是首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２１６２—２００８壳聚糖抗菌棉纺织品检验规程１ 范围本标准规定了壳聚糖抗菌棉纺织品的取样、检验项目、试验方法及检验结果的判定。本标准适用于经过壳聚糖抗菌整理的棉纺织品的质量评价。２ 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ２９１２．１ 纺织品 甲醛的测定 第１部分：游离水解的甲醛（水萃取法）ＧＢ／Ｔ３９２３．１ 纺织品 织物拉伸性能 第１部分：断裂强力和断裂伸长率的测定 条样法ＧＢ／Ｔ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法（ＧＢ／Ｔ６６８２—２００８，ＩＳＯ３６９６：１９８７，ＭＯＤ）ＧＢ／Ｔ７５７３ 纺织品 水萃取液ｐＨ值的测定（ＧＢ／Ｔ７５７３—２００２，ＩＳＯ３０７１：１９８０，ＭＯＤ）ＧＢ／Ｔ８６２９—２００１ 纺织品 试验用家庭洗涤及干燥程序（ｅｑｖＩＳＯ６３３０：２０００）ＧＢ１８４０１ 国家纺织产品基本安全技术规范ＦＺ／Ｔ０１０２１—１９９２ 织物抗菌性能实验方法３ 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。３．１试样 狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲经过壳聚糖抗菌整理的棉纺织品。３．２壳聚糖抗菌整理 犪狀狋犻犫犪犮狋犲狉犻犪犾犳犻狀犻狊犺犻狀犵狑犻狋犺犮犺犻狋狅狊犪狀运用壳聚糖抗菌物质对纺织品进行处理，使其具有抗菌功能的染整加工过程。３．３壳聚糖抗菌棉纺织品 犪狀狋犻犫犪犮狋犲狉犻犪犾犮狅狋狋狅狀犳犪犫狉犻犮狋狉犲犪狋犲犱狑犻狋犺犮犺犻狋狅狊犪狀经过壳聚糖整理剂整理，能够抑制棉织物上的细菌生长或繁殖的棉纺织品。３．４标准对照试样 狊狋犪狀犱犪狉犱犮狅犿狆犪狉犻狊狅狀狊犪犿狆犾犲通过常规的煮炼而得到的棉织物（见附录Ａ）。３．５菌落 犮狅犾狅狀狔在一块培养基上，通过一个单一细胞的扩增生成的上百万个同种细菌所形成的菌落。该菌落肉眼可见，并根据细菌种属、所用琼脂及培养条件的不同而具有不同的形状。３．６十进制稀释 犱犲犮犻犿犪犾犱犻犾狌狋犻狅狀狊从原始滤液开始的一系列１０倍连续递增稀释。１犛犖／犜２１６２—２００８４ 取样用于检验的壳聚糖抗菌棉织物样品，需离下机卷装布边端２ｍ处裁剪。舍去最外面至少１ｍ的全幅布。５ 试验方法５．１ 试验项目试验项目包括壳聚糖抗菌棉织物的甲醛、ｐＨ值、异味、断裂强力、抗菌性能检测（见附录Ｂ）。５．２ 甲醛的测定甲醛的测定按ＧＢ／Ｔ２９１２．１执行。５．３ 狆犎值的测定ｐＨ值的测定按ＧＢ／Ｔ７５７３执行。５．４ 异味的测定异味的测定按ＧＢ１８４０１执行。５．５ 断裂强力的测定断裂强力按ＧＢ／Ｔ３９２３．１执行。５．６ 抗菌性能检测按附录Ｂ执行。６ 检验结果的判定６．１ 甲醛含量、ｐＨ值、异味、断裂强力、抑菌率指标均符合合格品技术要求的，判断该批产品为合格品。其中有一项不合格的，判断该批产品为不合格品。６．２ 合格品技术要求见表１。表１ 壳聚糖抗菌棉纺织品质量指标合格技术要求项 目技 术 要 求 甲醛含量／（ｍｇ／ｋｇ） ≤７５ｐＨ值４．０～７．５异味无断裂强力／（Ｎ／５×２０ｃｍ）经（纬）向强力不低于１７６ 抑菌率／％ ≥５０２犛犖／犜２１６２—２００８附 录 犃（规范性附录）标准对照试样及标准洗涤方法犃．１ 标准对照试样（空白织物）是十分重要的测试基准物，应采用统一的标准对照试样。标准对照试样应由国家授权的机构或单位发放，以确保检测的可比性。犃．２ 标准对照试样常用的制备工艺标准对照试样的制备采用工厂常用的煮炼工艺，要求充分去除坯布上的杂质及油污，具有良好的外观质量和较好的吸水性、渗透性等内在品质。标准对照试样按下列工艺制备：→经烧毛和退浆的纯棉本白机织布浸轧（ＮａＯＨ１０ｇ／Ｌ～１５ｇ／Ｌ→）煮炼（ＮａＯＨ织物重量３％～４％，肥皂０．５％～０．７５％，在温度１２０℃～１３０℃下循环煮炼３ｈ→）→→→→→→水洗酸洗水洗中和水洗烘干检验。犃．３ 标准对照试样的使用一般情况下，用由国家授权的机构发放的标准对照试样，在进行抗菌试验时，要首先按Ａ．４所示洗涤方法，不加洗涤剂，对其进行５次～１０次洗涤后，才能作为合格的标准对照试样。犃．４ 标准洗涤方法犃．４．１ 提示为了合理评价壳聚糖抗菌棉织物耐久性和满足用户的实际需要，需要使用标准洗涤剂，采用标准的洗涤方法。犃．４．２ 标准洗涤剂标准洗涤剂应符合ＧＢ／Ｔ８６２９—２００１附录Ａ中所规定的ＡＡＴＣＣ１９９３标准合成洗涤剂ＷＯＢ（无磷配方，不含荧光增白剂），标准洗涤剂应由国家授权的机构或单位发放。犃．４．３ 标准洗涤方法标准洗涤方法应按照ＧＢ／Ｔ８６２９—２００１（２Ａ，烘箱干燥）进行。３犛犖／犜２１６２—２００８附 录 犅（规范性附录）抗菌性能检测方法犅．１ 安全要求及局限性由于本试验所使用的试验菌是容易使人感染致病的细菌，因此应采取一切必要的预防措施，以避免危害试验人员和周围环境及有关人员。试验应由在微生物检测方面训练有素的专业人员从事。犅．２ 原理将抗菌整理织物和标准对照试样（空白织物）分别放于空三角烧瓶中，用试验菌接种，并恒温培养，一定时间后，洗涤细菌并测定细菌数量，然后计算抗菌整理织物上的细菌比标准对照试样上的细菌的减少百分率。犅．３ 仪器设备与试剂犅．３．１ 仪器犅．３．１．１ 恒温培养箱，温度精度±１℃。犅．３．１．２ 高压蒸汽消毒器（简称灭菌锅）。犅．３．１．３ 天平，感量为±０．０１ｇ。犅．３．１．４ 生物安全柜或１００级层流超净工作台。犅．３．１．５ ５℃～１０℃玻璃门冷藏箱。犅．３．１．６ 保存菌种用冰箱。犅．３．１．７ ４０倍～１００倍体式显微镜。犅．３．２ 器皿犅．３．２．１ 三角烧瓶，容量为２５０ｍＬ。犅．３．２．２ 生化培养皿（简称平皿），皿底直径为９ｃｍ。犅．３．２．３ 定量刻度吸管，容量为０．５ｍＬ、１ｍＬ和１０ｍＬ，最小刻度分别为０．００５ｍＬ、０．０１ｍＬ和０．１ｍＬ。 犅．３．２．４ 试管，１８ｍｍ×２００ｍｍ。犅．３．２．５ 酒精灯。犅．３．２．６ 取菌环。犅．３．２．７ 酸度计。犅．３．３ 试剂犅．３．３．１ 蒸馏水符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的三级水。犅．３．３．２ 蛋白胨：生化试剂。犅．３．３．３ 牛肉膏：生化试剂。犅．３．３．４ 琼脂：试剂级。犅．３．３．５ 氯化钠：分析纯。犅．３．３．６ 氢氧化钠：分析纯。犅．３．３．７ 磷酸氢二钠：分析纯。犅．３．３．８ 磷酸二氢钠：分析纯。犅．３．３．９ 无水乙醇。４犛犖／犜２１６２—２００８犅．４ 试验菌犅．４．１ 金黄色葡萄球菌（ＡＴＣＣ６５３８）。犅．４．２ 大肠杆菌（８０９９）。犅．４．３ 根据产品用途需采取的其他测试菌种由供需双方另行商定。犅．５ 试验准备犅．５．１ 抗菌实验的测试样的准备距布边１０ｃｍ以上剪取直径为５ｃｍ的圆试样若干，所用试样块数要根据织物组织、厚薄而定，以能吸收０．５ｍＬ菌液且三角烧瓶中不留残液为宜（厚型棉织物一般为１块～２块，薄型的为３块～４块），另剪取标准对照试样的圆样若干（标准对照试样的块数要与试样的块数相同）。将试样和标准对照试样分别装于三角烧瓶中，将两个烧瓶封口，并在１０３ｋＰａ压力下灭菌１５ｍｉｎ，备用。犅．５．２ 菌液准备从３代～１０代的菌种试管斜面中取一接种环细菌，以划线法接种到营养琼脂斜面上，在３７℃培养箱中培养２４ｈ，用肉汤含量为１％的磷酸盐缓冲液将斜面上的菌洗下，并进行一系列的稀释，使１ｍＬ菌液含有１×１０５～２×１０５个细菌，备用。犅．５．３ 培养基及溶液的准备犅．５．３．１ 营养琼脂培养基蛋白胨 ５ｇ牛肉膏３ｇ琼脂粉１５ｇ蒸馏水１０００ｍＬ将各成分放到一个烧瓶中混合，将烧瓶放于沸水浴中加热，充分地溶解，再用０．１ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠调节ｐＨ值至６．８±０．２，在１０３ｋＰａ的灭菌锅内灭菌１５ｍｉｎ。若不马上使用，把它放在５℃～１０℃的条件下保存，保存期不能超过１个月。犅．５．３．２ 磷酸盐缓冲液（犘犅犛）溶液Ａ：０．２ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４溶液Ｂ：０．２ｍｏｌ／ＬＮａＨ２ＰＯ４（７２ｍＬＡ＋２８ｍＬＢ）混合＋５ｇＮａＣｌ＋１０００ｍＬ蒸馏水。用０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ调节ｐＨ值至７．０，在三个三角烧瓶中分别装１００ｍＬ缓冲液，封口，在１０３ｋＰａ的灭菌锅内灭菌１５ｍｉｎ。犅．５．３．３ 营养肉汤牛肉膏 ３ｇ蛋白胨５ｇ蒸馏水１０００ｍＬ将各成分放于一个烧瓶中混合，彻底地溶解，再用０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液将ｐＨ调节至６．８±０．２，盖上塞子，在１０３ｋＰａ的灭菌锅内灭菌１５ｍｉｎ。若不立刻使用，把它放在５℃～１０℃的条件下保存，保存期不能超过１个月。犅．６ 试验步骤（无菌操作）犅．６．１ 织物的接种将准备好的菌液静置１５ｍｉｎ，分别用０．５ｍＬ的灭菌定量刻度吸管，小心移取０．５ｍＬ菌液，分别加在两个准备好的三角烧瓶内的织物上，确保其均匀分布，封好瓶口，以防蒸发。５犛犖／犜２１６２—２００８犅．６．２ 定期培养将装有试样和标准对照试样的三角烧瓶放入３７℃±１℃的恒温箱内培养２０ｈ±２ｈ。犅．６．３ 定期培养后制取菌样犅．６．３．１ 将装有试样和标准对照试样的三角烧瓶取出，向两个烧瓶中分别加入１００ｍＬ缓冲液，剧烈摇晃瓶子１ｍｉｎ，洗涤细菌，用１ｍＬ灭菌定量刻度吸管吸取１ｍＬ洗涤液，沿管壁徐徐注入含有９ｍＬＰＢＳ的试管内（注意定量刻度吸管尖端不要触及管内稀释液），摇晃试管混合均匀，做成１∶１０的稀释液。犅．６．３．２ 另取１ｍＬ灭菌定量刻度吸管，按上述稀释顺序，作１０倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用１支灭菌定量刻度吸管。犅．６．３．３ 通常选择２个～３个稀释度是适宜的，分别在作１０倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的定量刻度吸管移１ｍＬ稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。犅．６．３．４ 稀释液移入平皿后，应及时将凉至４６℃的营养琼脂培养基（可放置于４６℃±１℃水浴保温）约１５ｍＬ注入平皿内，并转动平皿使其混合均匀。犅．６．３．５ 待琼脂凝固后，翻转平皿，置３７℃±１℃恒温箱内培养４８ｈ±２ｈ取出，计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每个样品所含细菌总数。犅．６．４ 菌落计数方法按照ＦＺ／Ｔ０１０２１—１９９２中９．４菌落计数方法进行。犅．６．５ 菌落计数的报告按照ＦＺ／Ｔ０１０２１—１９９２中９．５菌落计数的报告进行。犅．６．６ 试验有效性判断为保证试验的有效性（无菌性、细菌典型性）应当在试验同时另做三个试验：ａ） 试样不接种，在“０”接触时间制取菌样，其菌落数为“０”个；ｂ） 标准对照试样接种并培养２０ｈ，制取菌样，其菌落数比对照织物“０”接触时间的菌落数明显增加；ｃ） 培养皿中不滴加稀释液，直接倾注营养琼脂培养基，培养２０ｈ±２ｈ后，培养基上没有菌落产生。犅．６．７ 试验结果计算按式（１）计算抑菌率。抑菌率（％）＝２０ｈ后标准对照样上的活菌数－２０ｈ后试样上的活菌数２０ｈ后标准对照样上的活菌数×１００……（１）犅．６．８ 试验报告ａ） 试验用细菌；ｂ） 所用试样块数：ｃ） 试样洗涤方法及所用洗剂；ｄ） 试样洗涤次数；ｅ） 试验菌种；ｆ） 抑菌率；ｇ） 人员及环境认可单位：ｈ