书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖/犜2030—2007按实蝇属鉴定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犃狀犪狊狋狉犲狆犺犪犛犮犺犻狀犲狉20071224发布20080701实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国广东出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:王章根、陈定虎、管维、杨国海、莫我杰、曹小茂、黄昕恒。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖/犜2030—2007按实蝇属鉴定方法1 范围本标准规定了按实蝇属(犃狀犪狊狋狉犲狆犺犪Schiner)鉴定方法。本标准适用于进口按实蝇寄主植物(参见附录A)及其果实时对按实蝇属的鉴定。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准,其他分类学术语参见附录B。2.1颊 犵犲狀犪犲头部侧面,复眼以下伸展至外咽缝的区域。2.2后头 狅犮犮犻狆狌狋头部的整个后面。2.3颜面 犳犪犮犲头部的前面,复眼间介于触角和口上片之间的区域。2.4肩板鬃 狊犮犪狆狌犾犪狉犫狉犻狊狋犾犲狊位于中胸背板前缘的鬃的统称。2.5前背侧鬃 犪狀狋犲狉犻狅狉狀狅狋狅狆犾犲狌狉犪犾犫狉犻狊狋犾犲狊位于肩胛与背侧板胛之间近中部的一对鬃。2.6后背侧鬃 狆狅狊狋犲狉犻狅狉狀狅狋狅狆犾犲狌狉犪犾犫狉犻狊狋犾犲狊位于背侧板胛端部的一对鬃。2.7前翅上鬃 犪狀狋犲狉犻狅狉狊狌狆狆犪犪犾犪狉犫狉犻狊狋犾犲狊位于中胸背板侧缘,前翅翅基正上方的一对鬃。2.8后翅上鬃 狆狅狊狋犲狉犻狅狉狊狌狆狆犪犪犾犪狉犫狉犻狊狋犾犲狊位于中胸背板后侧缘,翅基之上的一对鬃。2.9翅内鬃 犻狀狋狉犪犪犾犪狉犫狉犻狊狋犾犲狊位于中胸背后侧角,缝后侧黄色线条上的一对鬃。2.10小盾前鬃 狆狉犲狊犮狌狋犲犾犾犪狉犫狉犻狊狋犾犲狊小盾片前方,近盾片后缘的一对鬃。1犛犖/犜2030—20072.11小盾鬃 狊犮狌狋犲犾犾犪狉犫狉犻狊狋犾犲狊小盾片上的一对或两对鬃;又称小盾端鬃。3 原理按实蝇属(犃狀犪狊狋狉犲狆犺犪)隶属双翅目(Diptera)、实蝇科(Tephritidae)、实蝇亚科(Trypetinae),长尾实蝇族(Toxotrypanini)。主要以幼虫随被害果实作远距离传播,有时蛹也可随果实的包装物和运输工具或寄主植物所附土壤传播。按实蝇属的形态特征、寄主植物、传播途径及生物学特性为制定鉴定方法提供了依据。4 仪器、用具和试剂4.1 仪器与用具体视显微镜、生物显微镜、干燥箱、冰箱、温湿度计、量筒、烧杯、培养皿、小型干燥器、指形管、剪刀、解剖刀、解剖针、昆虫针、载玻片、标签纸、三级台、三角纸、酒精灯、玻璃棉、养虫杯、养虫箱、防虫网罩、白瓷盘。4.2 试剂10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液、封片胶、苯酚、二甲苯、75%乙醇、丙三醇、水合三氯乙醛、阿拉伯树胶粉、蒸馏水、保存液。4.3 试剂的配制4.3.1 10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液的配制称取氢氧化钠(或氢氧化钾)10g置于200mL烧杯中,加入约80mL的蒸馏水,搅拌溶解后再加蒸馏水定容至100mL。4.3.2 封片胶的配制称取阿拉伯树胶粉30g,加入50mL蒸馏水(最好是温水以加速溶解)。溶解后,加入200g水合三氯乙醛及20mL丙三醇,置于55℃~60℃的干燥箱内。1d后,用玻璃棉过滤(过滤时仍置于55℃~60℃的干燥箱内进行)。4.3.3 保存液的配制量取75%乙醇100mL,加入1mL丙三醇。5 实验室鉴定5.1 鉴定前的培养方法5.1.1 卵或幼虫的培养将现场采集的卵和幼虫部分个体制成鉴定标本,其余个体继续用原寄主果实培养。具体的培养方法是:将带有卵或幼虫的寄主果实放在小号白瓷盘里,然后将小号白瓷盘放在装有自来水的大号白瓷盘内,再用防虫网罩住小号白瓷盘,罩的下方边缘浸没于大号白瓷盘内的水中,置于温度为22℃~28℃,湿度为50%~90%的环境中培养5d~10d至幼虫老熟。5.1.2 蛹的培养取一盛有半干湿(含水量约5%)洁净细砂的养虫杯,将现场检疫收集的或室内培养得到的蛹埋入距细砂表面3cm~5cm处(若是老熟幼虫则可直接将其置于细砂表面,幼虫自己会钻入砂中化蛹),然后置于养虫箱中培养,培养环境温度为22℃~28℃,湿度为50%~90%。5.1.3 初羽化成虫的饲养成虫羽化后,悬挂相应寄主果实切片在养虫箱内供其取食,待成虫斑纹的色泽和大小稳定后(约需5d),收集成虫置于冰箱冷冻层0.5h~1h,即可杀死成虫。2犛犖/犜2030—20075.2 标本的预处理5.2.1 成虫回软处理如果成虫虫体已干硬,在制作标本前应回软处理:取一小型干燥器,加入干净细砂约2cm,加水至漫过细砂表面约1cm,并滴加数滴苯酚以防标本腐烂,上层放待回软的成虫标本,密闭1d即可。5.2.2 成虫标本制备取00号昆虫针,借助三级台插入三角纸尖角近处,然后将针尖端从成虫中胸的腹面插入,再用4号昆虫针插入三角纸另一端两个角中央近边缘处,插上相应的标签。5.2.3 成虫外生殖器封片标本的制作用解剖刀切取成虫标本的腹部,置于盛有10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)适量溶液的小烧杯中,浸泡12h(或煮沸3min)后取出,用蒸馏水洗净,在体视显微镜下,用解剖针挑取所需的部位(阳茎或产卵器),制成玻片标本。5.2.4 幼虫封片标本制备用昆虫针在幼虫体壁上刺戳数个小孔,置于盛有10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)适量溶液的小烧杯中,浸泡12h(或煮沸3min)后取出,用解剖针将幼虫体中的残留物挤出,用蒸馏水洗净,在体视显微镜下挑取口钩、前气门和后气门等部位,制成玻片标本。5.3 鉴定特征5.3.1 实蝇科(犜犲狆犺狉犻狋犻犱犪犲)鉴定特征翅Sc脉突然朝前弯曲成近90°,外弯段变弱,终于前缘脉的断裂处,R1脉的背侧有小鬃;cup室具一尖角延伸。5.3.2 实蝇亚科(犜狉狔狆犲狋犻狀犪犲)鉴定特征cup室与bm室近等宽。后头鬃列均细长且通常为黑色。上前侧片为一缝所分离。中胸背板具肩板鬃。具3个受精囊。5.3.3 长尾实蝇族(犜狅狓狅狋狉狔狆犪狀犻狀犻)鉴定特征触角芒短毛型。鬃序基本完全,但单眼鬃退化或缺如,背中鬃若存在则位置极后,接近翅上鬃之水平;上侧背片无长毛;翅R4+5脉背面被小鬃至r-m横脉之后;M脉端部明显呈弧形向前弯曲,末端与R4+5脉接近;cup室的后端角长度中等;雄性阳茎端具T形端骨片;雌性产卵器基节发达,其基部具翼状侧缘,翻转膜基部背面具大的鳞状齿。5.3.4 按实蝇属的鉴定特征5.3.4.1 成虫特征(参见附录犅、犆)5.3.4.1.1 头部通常为橙色,但头顶、颊和后头有时褐色,颜面隆线常甚发达;单眼鬃细小呈毛状,上侧额鬃2对,下侧额鬃3对~4对;触角显短于颜,第3节末端圆钝,角芒短毛型。5.3.4.1.2 胸部橙黄色到暗褐色,胸部色条和小盾片黄色;具肩鬃1,前背侧鬃1,后背侧鬃1,前翅上鬃1,后翅上鬃1,翅内鬃1,背中鬃1,小盾鬃2。5.3.4.1.3 翅大多数种类有3条翅带:短的前缘带(C),此带终止于R1脉;“S”形带,位于翅中部;“V”形带,位于翅的外缘,由端前横带和后端横带组成;3条带之间常分离或相连接。M脉的端段强烈向前弯曲,cup室与bm室近等宽,cup室的后端角的长度中等,短于A1+CuA2脉段。5.3.4.1.4 腹部不具柄。雄虫背针突短、扁;雌虫产卵器管状,通常长形;翻转膜基部膨大,其背面有鳞状小齿;具3个受精囊。3犛犖/犜2030—20075.3.4.2 幼虫特征(3龄)触角感觉器基节阔而坚硬,端节小、成圆锥形;下颚感觉器大而扁平,有两组界线明显,由小褶皮围绕的感器;口前叶愈合,在口钩上方形成一硬脊;口脊6条~17条,脊列短,后缘锯齿状或非锯齿状;副板细小,壳形,通常为非锯齿状。口钩均无端齿。前气门淡琥珀色,中央凹陷,在突起的基部有9个~37个长而硬的指突。肛叶大而突起,不具沟陷、具沟陷或呈双叶状;有时表面具清晰的刻纹。5.3.4.3 重要种类形态特征参见附录D、附录E。6 鉴定结果判定以成虫形态特征为主要鉴定依据,符合5.3.4.1特征描述的可鉴定为按实蝇属。成虫以外虫态的形态特征描述仅供参考。7 标本保存7.1 成虫标本及玻片标本的保存将制好的成虫标本或相应的玻片标本置于干燥箱中干燥数日,然后移入标本柜中保存,保存过程注意防潮和防虫。7.2 幼虫、蛹标本的保存将采集到的幼虫和蛹用蒸馏水清洗后,投入60℃±5℃热水中浸泡杀死,置于室温下冷却,再将冷却的幼虫(或蛹)置于保存液中保存。4犛犖/犜2030—2007附 录 犃(资料性附录)按实蝇属部分寄主植物表犃.1 按实蝇属部分寄主植物Anacardiceae 漆树科Annonaceae 番荔枝科Combretaceae 使君子科Ebenaceae 柿科Flacourtiaceae 大风子科Juglandaceae 胡桃科Lauraceae 樟科Moraceae 桑科Myrtaceae 桃金娘科Oxalidaceae 酢浆草科Punicaceae 石榴科Rosaceae 蔷薇科Rubiaceae 茜草科Rutaceae 芸香科Polygoaceae 蓼科Sapindaceae 无患子科Sapotaceae 山榄科犃狀犪犮犪狉犱犻狌犿L. 腰果属犕犪狉犵犻犳犲狉犪L. 芒果属犛狆狅狀犱犻犪狊L. 槟榔青属犃狀狀狅狀犪L. 番荔枝属犜犲狉犿犻狀犪犾犻犪L. 榄仁树属犇犻狅狊狆狔狉狅狊L. 柿树属犇狅狏狔犪犾犻狊E.Mey. 锡兰莓属犑狌犵犾犪狀狊L. 胡桃属犘犲狉狊犲犪Miller 鳄梨属犉犻犮狌狊L. 无花果属犈狌犵犲狀犻犪L. 番樱桃属犘狊犻犱犻狌犿L. 番石榴属犛狔狕狔犵犻狌犿Gaertn 薄桃属犃狏犲狉狉犺狅犪L. 阳桃属犘狌狀犻犮犪L. 石榴属犆狔犱狅狀犻犪L. 榀檗属犈狉犻狅犫狅狋狉狔犪Lindl. 枇杷属犉狉犪犵犪狉犻犪L. 草莓属犘狉狌狀狌狊L. 李属犕犪犾狌狊Miller 苹果属犘狔狉狌狊L. 梨属犚狌犫狌狊L. 悬钩子属犆狅犳犳犲犪L. 咖啡属犆犪狊犻犿犻狉狅犪L.&Lex. 香肉果属犆犻狋狉狌狊L. 柑橘属犉狅狉狋狌狀犲犾犾犪Swingle 金橘属犆狅犮犮狅犾狅犫犪P.Browne 海葡萄属犔犻狋犮犺犻Sonn. 荔枝属犆犺狉狔狊狅狆犺狔犾犾狌犿L. 金叶树属犕犪狀犻犾犽犪狉犪Ad. 铁线子属犘狅狌狋犲狉犻犪Aublet 桃榄属5犛犖/犜2030—2007表犃.1(续)Sterculiaceae 梧桐科Vitaceae 葡萄科Caricaceae 番木瓜科Cucurbitaceae 葫芦科Passifloraceae 西番莲科Solanaceae 茄科犜犺犲狅犫狉狅犿犪L. 可可树属犞犻狋犻狊L. 葡萄属犆犪狉犻犮犪L. 番木瓜属犆犻狋狉狌犾犾狌狊Neck 西瓜属犆狅犮犮犻狀犻犪W.&A. 红瓜属犆狌犮狌犿犻狊L. 香瓜属(甜瓜)犆狌犮狌狉犫狌犪L. 南瓜属犔犪犵犲狀犪狉犻犪Ser 葫芦属犕狅犿狅狉犱犻犮犪L. 苦瓜属犘犪狊狊犻犳犾狅狉犪L. 西番莲属犆犪狆狊犻犮狌犿L. 辣椒属犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狌犿M. 番茄属犛狅犾犪狀狌犿L. 茄属6犛犖/犜2030—2007附 录 犅(资料性附录)按实蝇属成虫特征图犅.1 头部(前面观)(仿犠犺犻狋犲等)图犅.2 胸部(背面观)(仿犠犺犻狋犲等)7犛犖/犜2030—2007图犅.3 翅(仿犠犺犻狋犲等)图犅.4 雌成虫产卵管构造(腹面观)(仿犠犺犻狋犲等)8犛犖/犜2030—2007附 录 犆(资料性附录)实蝇科重要实蝇属检索表1 触角显长于颜,第3节至少3倍于宽,角芒裸。鬃序退化不全。缺少单眼鬃、单眼后鬃、肩鬃、沟前鬃、背中鬃和腹侧鬃。翅上3条径脉(R1、R2+3和R4+5)极为接近,翅斑较简,代表型仅包括前缘带和臀斑各1条,cup室的后端角狭长,至少为A1+CuA2脉段长度的1.5倍。腹部第5背板具腺斑1