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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２８６９．１—２０１１植物种质资源鉴定方法第１部分：斑点野生稻的鉴定犇犲狋犲犮狋犻狅狀犪狀犱犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犵犲狉犿狆犾犪狊犿狉犲狊狅狌狉犮犲狊犻狀狆犾犪狀狋—犘犪狉狋１：犗狉狔狕犪狆狌狀犮狋犪狋犪２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 ＳＮ／Ｔ２８６９《植物种质资源鉴定方法》共分为两部分：———第１部分：斑点野生稻的鉴定；———第２部分：中草药青蒿的鉴定。本部分为ＳＮ／Ｔ２８６９的第１部分。本部分按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本部分起草人：徐涛、许瑾、张舒亚、梁成珠、岳志芹、郑小龙、吴志毅、朱水芳、陈洪俊。Ⅰ犛犖／犜２８６９．１—２０１１植物种质资源鉴定方法第１部分：斑点野生稻的鉴定１ 范围ＳＮ／Ｔ２８６９的本部分规定了斑点野生稻种质资源鉴定的方法。本部分适用于出口国家重点保护的斑点野生稻及其遗传材料，以及我国参加的国际公约所限制进出口的斑点野生稻资源的出入境检测。２ 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ／Ｔ１４０７２ 林木种质资源保存原则与方法ＳＮ／Ｔ１１９３ 基因检验实验室技术要求ＡＳＴＭＥ１３４２ 用冷冻、冷冻干燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素以及动物和植物组织的保存（Ｓｔａｎｄａｒｄｐｒａｃｔｉｃｅｆｏｒｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｂｙｆｒｅｅｚｉｎｇ，ｆｒｅｅｚｅｄｒｙｉｎｇ，ａｎｄｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆ犫犪犮狋犲狉犻犪，犳狌狀犵犻，ｐｒｏｔｉｓｔａ，ｖｉｒｕｓｅｓ，ｇｅｎｅｔｉｃｅｌｅｍｅｎｔｓ，ａｎｄａｎｉｍａｌａｎｄｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ）３ 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１种质 犵犲狉犿狆犾犪狊犿亲代通过有性生殖过程或体细胞直接传递给子代并决定固有特性的遗传物质。３．２种质资源 犵犲狉犿狆犾犪狊犿狉犲狊狅狌狉犮犲狊农作物、畜、禽、鱼、草、花卉等栽培植物和驯化动物的人工培育品种资源及其野生近缘种。３．３胚 犲犿犫狉狔狅由卵细胞和一个精子受精后发育而成，是种子内未发育的幼小植物体。在种子中胚是唯一有生命的部分，已有初步的器官分化，包括胚芽、胚轴、胚根和子叶四部分。３．４稃 犺狌狊犽谷壳麸糠小麦等植物的花外面包着的硬壳，又分为：内稃，外稃。１犛犖／犜２８６９．１—２０１１３．５颖 犵犾狌犿犲颖片禾本科植物小穗基部的二枚苞片。３．６颖果 犮犪狉狔狅狆狊犻狊单粒种子形成的果实，成熟时果皮、种皮不易分离，此为禾本科植物特有的果实。如水稻、小麦。３．７叶舌 犾犻犵狌犾犲叶片与叶鞘交界处内侧的膜状突起。如禾本科植物水稻等具有叶舌。它可使叶片向外倾斜伸出，有利于接受阳光，同时由于它的生长部位，能防止昆虫、病菌、雨水等进入叶鞘筒内。叶舌是叶鞘的延长，其大小、形状和毛茸的有无，可作分类依据之一。禾本科的叶舌，常见的有撕裂状叶舌、二深裂叶舌、短叶舌、具睫毛叶舌和长叶舌等。３．８叶耳 犳犪犾犮犪狋犲叶鞘与叶片接连处叶缘两侧的伸延物。常将茎杆卷抱着，末端分离，有时弯曲，多呈耳状或镰刀状。单子叶植物中，部分的禾本科植物具有叶耳，如大麦、小麦、水稻、竹等。在分类上，常根据是否有叶耳，作为区分物种的依据之一。如水稻与稗，形态较相似，但前者有叶耳，后者无，故可相区别。３．９苞片 犫狉犪犮狋在花或花序基部着生的变态叶，有保护花芽或果实的作用，是有花植物身上的一种特殊的过渡器官。按其在茎轴上的位置、排列和形态的不同，另有小苞片和总苞之别。通常把包被花或花簇的一轮苞片称为总苞，着生于花序梗上的小的苞片称为小苞片。总苞的形状和轮数为种属鉴别的特征之一。４ 原理斑点野生稻（犗狉狔狕犪狆狌狀犮狋犪狋犪ＫｏｔｓｃｈｙｅｘＳｔｅｕｄｅｌ）与具有红色颖果的栽培稻很难区分，进出境时，可能存在的形态有：种子、植株、稻穗、叶片、花、花粉、胚、组培苗、原生质体、组织、细胞、核酸（基因组ＤＮＡ、ＲＮＡ）等，以形态学方法为主，并借助分子生物学手段作为其分类鉴定的依据。５ 仪器和试剂５．１ 仪器生物显微镜（具测量功能），体视显微镜，ＰＣＲ扩增仪，可调移液器（１０００μＬ，２００μＬ，２０μＬ，１０μＬ，２．５μＬ），液氮罐等。５．２ 试剂ＰＣＲ反应常用试剂、电泳试剂和核酸分子量标准等，除另有规定外，均为分析纯或生化纯，水为按照ＧＢ／Ｔ６６８２规定的执行。６ 鉴定方法６．１ 现场检验口岸检验检疫机构接受报检后，按照生物物种资源查验程序对旅客携带物、邮寄物和运输物品等进２犛犖／犜２８６９．１—２０１１行查验。核查斑点野生稻的状态、种类、生长地、数量及唛头标记是否与申报相符；检查包装是否完整。对于斑点野生稻种子，植株的部分组织，整个植株及其标本，根据形态学分类特征进行直观查验，确定其是否为斑点野生稻。６．２ 形态学鉴定以种子和植株的形态鉴定为主要依据，用肉眼或借助放大镜观察种子的形状、大小、色泽、花纹和种皮表面结构特征（光滑与粗糙，有无突起，脊及多少，有无刺毛及多少等）（种类检索参见附录Ａ）。鉴定时应有标准品种的样品或标准品种种子彩色图谱及描述作依据（种子和植株的形态特征参见附录Ａ、附录Ｂ和附录Ｃ。细胞、组织、核酸等遗传物质的鉴别可参考附录ＤＰＣＲ法鉴定。６．３ 分子生物学鉴定６．３．１ 犇犖犃提取按ＣＴＡＢ方法提取ＤＮＡ，见附录Ｄ。６．３．２ 犘犆犚法检测斑点野生稻的ＰＣＲ检测方法见附录Ｄ，防污染措施应符合ＳＮ／Ｔ１１９３的规定。７ 结果判定对备检样品的形态鉴定与Ｂ．４．１种子特征和Ｂ．４．２植株特征符合，分子生物学鉴定与附录Ｄ．２．４描述符合，以上两者符合其一的可判定为斑点野生稻。８ 样品保存与复核８．１ 样品保存物种资源的样品保存方法见ＧＢ／Ｔ１４０７２和ＡＳＴＭＥ１３４２的规定。８．２ 结果记录与资料保存完整的实验记录包括：样品的名称与编号、来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。生物学测定需有分类鉴别的特征照片，分子生物学检测需有最终的实验数据、电泳结果照片等。原始数据应归档，妥善保管，以备复验、谈判和仲裁。８．３ 复核由国家质量监督检验检疫总局指定的单位或人员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核实验。３犛犖／犜２８６９．１—２０１１附 录 犃（资料性附录）稻属植物分种和亚种检索表１ａ．小穗长通常不超过２ｍｍ短粒野稻犗．狊犮犺犾犲犮犺狋犲狉犻…………………………………………………１ｂ．小穗长超过３ｍｍ。 ２ａ．不育外稃线形或线状披针形。 ３ａ．下部叶的叶舌长１４ｍｍ～４５ｍｍ，顶端急尖。 ４ａ．通常一年生；圆锥花序较密；花药长不及２．５ｍｍ。 ５ａ．谷粒在成熟时不易脱落。栽培种。原产亚洲亚洲栽培稻犗．狊犪狋犻狏犪…………………… ５ｂ．谷粒在成熟是易脱落。野生种。 ６ａ．圆锥花序的第一次分枝较开展而斜生；秆半直立至倾斜生长。 原产亚洲尼瓦拉野稻犗．狀犻狏犪狉犪…………………………………………………………………… ６ｂ．圆锥花序的第一次分枝紧缩而直立上伸；秆直立或半直立生长。 原产澳洲（偶有多年生）南方野稻犗．犿犲狉犻犱犻狅狀犪犾犻狊…………………………………………… ４ｂ．多年生；圆锥花序通常疏散；花药长超过２．５ｍｍ。 ７ａ．秆直立，具分枝的、伸展的根茎长雄蕊野稻犗．犾狅狀犵犻狊狋犪犿犻狀犪狋犪……………………………… ７ｂ．秆匍匐或半直立，通常不具或稍具根茎。 ８ａ．有浮水生茎，不具或稍具根茎。原产亚洲普通野稻犗．狉狌犳犻狆狅犵狅狀……………………… ８ｂ．无浮水生茎，不具根茎。原产美洲展颖野稻犗．犵犾狌犿犪犲狆犪狋狌犾犪…………………………３ｂ．下部叶的叶舌短于１３ｍｍ，顶端圆或平截。 ９ａ．圆锥花序主轴向顶端渐增粗糙毛；具根茎澳洲野稻犗．犪狌狊狋狉犪犾犻犲狀狊犻狊………………………… ９ｂ．圆锥花序主轴无毛或分枝腋间有毛；无根茎（药用野稻偶有根茎）。 １０ａ．小穗长超过７ｍｍ，有芒或无芒，若有芒则近刚直。 １１ａ．成熟时谷粒不脱落或部分脱落；内、外稃通常无粗糙硬毛；小穗常无芒或具短芒。栽培种，原产非洲非洲栽培稻犗．犵犾犪犫犲狉狉犻犿犪…………………………………………… １１ｂ．成熟时谷粒脱落；内、外稃被粗糙硬毛；小穗有芒（１０ｃｍ或更长）。野生种短舌野稻犗．犫犪狉狋犺犻犻………………………………………………………………… １０ｂ．小穗长通常不及７ｍｍ（高野稻除外），通常有芒，芒不刚直。 １２ａ．叶舌顶缘无流苏状毛，叶宽不及２ｃｍ。 １３ａ．小穗宽超过２ｍｍ。 １４ａ．小穗长超过６ｍｍ；芒长超过２ｃｍ；无根茎；叶舌长３ｍｍ～４ｍｍ；四倍体。原产非洲斑点野稻犗．狆狌狀犮狋犪狋犪……………………………………………………… １４ｂ．小穗长不及５．５ｍｍ；芒长不及２ｃｍ或无芒；偶有根茎；叶舌长２ｍｍ～３ｍｍ；二倍体。原产非洲药用野稻犗．狅犳犳犻犮犻狀犪犾犻狊………………………………………… １３ｂ．小穗宽不及２ｍｍ。 １５ａ．圆锥花序分枝较紧缩；小穗长为４．５ｍｍ～６．０ｍｍ；芒长可达３ｃｍ；有叶耳；叶舌长可达３．５ｍｍ；二倍体。原产非洲紧穗野稻犗．犲犻犮犺犻狀犵犲狉犻………………… １５ｂ．圆锥花序分枝开展；小穗长为３．７ｍｍ～４．７ｍｍ；有芒（长２ｃｍ或不及２ｃｍ）或无芒；无叶耳；叶舌长达１．５ｍｍ；四倍体。原产非洲小粒野稻犗．犿犻狀狌狋犪………………………………… １２ｂ．叶舌顶缘具流苏状毛；叶宽超过２ｃｍ。 １６ａ．不育外稃与孕花外稃的长度和质地均相似大护颖野稻犗．犵狉犪狀犱犻犵犾狌犿犻狊…………４犛犖／犜２８６９．１—２０１１ １６ｂ．不育外稃短于孕花外稃，且质地不同。 １７ａ．叶宽不及５ｃｍ；小穗长不及７ｍｍ宽叶野稻犗．犾犪狋犻犳狅犾犻犪……………………… １７ｂ．叶宽超过５ｃｍ；小穗长超过７ｍｍ高野稻犗．犪犾狋犪………………………………２ｂ．不育外稃锥状或刚毛状。 １８ａ．内、外稃表面有疣粒小穗无芒。 １９ａ．稃表面电镜扫描的钩毛为弯锥形；钩毛周围的硅质突起为乳头状，顶端圆而光滑。原产中国瘤粒野稻犗．犿犲狔犲狉犻犪狀犪狊狌犫狊狆．狋狌犫犲狉犮狌犾犪狋犪……………………………………… １９ｂ．稃表面电镜扫描的钩毛为雀嘴形；钩毛周围的硅质突起为火山顶状，顶端具星状冠。原产东南亚。 ２０ａ．小穗长圆形至椭圆状长圆形，短于７ｍｍ颗粒野稻犗．犿犲狔犲狉犻犪狀犪狊狌犫狊狆．犵狉犪狀狌犾犪狋犪……… ２０ｂ．小穗狭长圆形至披针形，长于７ｍｍ疣粒野稻犗．犿犲狔犲狉犻犪狀犪狊狌犫狊狆．犿犲狔犲狉犻犪狀犪……… １８ｂ．内、外稃表面无疣粒；小穗有芒。 ２１ａ．多年生；外稃沿脊有纤毛；四倍体。 ２２ａ．不育外稃短于孕花外稃；芒长６ｍｍ～１５ｍｍ马来野稻犗．狉犻犱犾犲狔犻……………………５犛犖／犜２８６９．１—２０１１附 录 犅（资料性附录）斑点野生稻的相关资料犅．１ 分类地位斑点野生稻（犗狉狔狕犪狆狌狀犮狋犪狋犪ＫｏｔｓｃｈｙｅｘＳｔｅｕｄｅｌ），隶属于禾本科（犘狅犪犮犲犪犲）稻亚科（犗狉狔狕狅犻犱犲犪犲）稻族（犗狉狔狕犲犪犲Ｄｕｍｏｒｔ．）稻属（犗狉狔狕犪Ｌ．），俗称“红稻”。属于单子叶植物，四倍体。犅．２ 分布范围原产于非洲，广泛分布于南非、肯尼亚等非洲各国，以及热带、西印度洋、亚热带和马达加斯加岛，后引入印度、泰国。生境适应性强，生长在水流、河床