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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．２０—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２０部分：犅狉犪犱犳狅狉犱法测定蛋白质含量犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋２０：犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆狉狅狋犲犻狀犮狅狀狋犲狀狋狌狊犻狀犵犅狉犪犱犳狅狉犱犿犲狋犺狅犱２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第２０部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：于艳军、王利兵、李晶、韩伟、向雪洁、李学洋。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４９７．２０—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２０部分：犅狉犪犱犳狅狉犱法测定蛋白质含量１ 范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量试验的试验样品、溶液和试验步骤。本部分适用于进出口危险化学品安全试验Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量。２ 原理考马斯亮兰Ｇ２５０染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由４６５ｎｍ变为５９５ｎｍ，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。在５９５ｎｍ下测定的吸光度值Ａ５９５，与蛋白质浓度成正比。３ 试剂３．１ 水本部分所述试验方法中涉及到的水均为灭菌蒸馏水。３．２ 考马斯亮蓝溶液称１００ｍｇ考马斯亮兰Ｇ２５０，溶于５０ｍＬ９５％的乙醇后，再加入１２０ｍＬ８５％的磷酸，用水稀释至１Ｌ，滤纸过滤，４℃保存。３．３ 牛血清白蛋白（犅犛犃）溶液用ｇ球蛋白或牛血清白蛋白（ＢＳＡ）配制成１．０ｍｇ／ｍＬ的标准蛋白质溶液。４ 试验步骤４．１ 标准曲线用１．０ｍｇ／ｍＬ的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：０ｍＬ、０．０１ｍＬ、０．０２ｍＬ、０．０４ｍＬ、０．０６ｍＬ、０．０８ｍＬ、０．１ｍＬ，然后用无离子水补充到０．１ｍＬ，各浓度２个平行样。最后各试管中分别加入５．０ｍＬ考马斯亮兰Ｇ２５０试剂，振荡混匀，静置２ｍｉｎ。在分光光度计上测定各样品在５９５ｎｍ处的光吸收值Ａ５９５。用标准蛋白质量（ｍｇ）为横坐标，用吸光度值Ａ５９５为纵坐标，作图，即得到一条标准曲线。４．２ 样品检测取合适体积的样品溶液（蛋白质含量在标准曲线范围内）并加水补足至０．１ｍＬ，３个平行样。加入５ｍＬ考马斯亮蓝溶液，振荡混匀，室温放置２ｍｉｎ。在分光光度计上测定各样品在５９５ｎｍ处的光吸收值Ａ５９５。５ 试验结果根据测出的未知样品的Ａ５９５值，在标准曲线即可查出未知样品的蛋白质含量。１犛犖／犜２４９７．２０—２０１０书书书０１０２—０２．７９４２犜／犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准进出口危险化学品安全试验方法第２０部分：犅狉犪犱犳狅狉犱法测定蛋白质含量ＳＮ／Ｔ２４９７．２０—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６ ６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６ 印张０．５ 字数４千字２０１０年６月第一版 ２０１０年６月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２０９５３ 定价１４．００元