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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．７—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第７部分：小鼠耳肿胀试验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋７：犕犻犮犲犲犪狉狊狑犲犾犾犻狀犵２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７的第７部分。本部分修改采用《毒理学实验方法与技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按ＧＢ／Ｔ１．１—２０００做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：李宁涛、王利兵、于艳军、陈庆俊、徐斌、李学洋。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４９７．７—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第７部分：小鼠耳肿胀试验１ 范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中小鼠耳肿胀试验的术语和定义、试验原理、试验方法和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品安全试验中的小鼠耳肿胀试验。２ 规范性引用文件 下列文件中的条款通过ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。 ＧＢ１４９２４．１ 实验动物 配合饲料通用质量标准３ 试验原理二硝基氟苯是一种半抗原，将其稀释液涂抹小鼠腹部皮肤后，与皮肤蛋白结合成完全抗原，刺激Ｔ细胞增殖成致敏淋巴细胞。（４～７）ｄ后再将其涂抹于小鼠耳部皮肤，使局部产生迟发型超敏反应，于抗原攻击后（２４～２８）ｈ，测定耳部肿胀度，以反应迟发型皮肤超敏反应的强度。４ 试验方法４．１ 试验动物选取（６～８）周龄小鼠，试验前，实验动物富含维生素Ａ的饲料喂养４周。实验动物和动物试验的环境设施符合ＧＢ１４９２４．１的相关规定。４．２ 试剂和耗材４．２．１ 阳性对照：二硝基氟苯溶液。４．２．２ 注射器、天平、胶布、打孔器。４．３ 剂量和分组取体重（１８～２２）ｇ小鼠５０只，随机分为５组，每组１０只，雌雄各半。分别设阴性对照组、阳性对照组及染毒组（低、中、高剂量组）。阳性对照组用二硝基氟苯（ＤＮＦＢ）。４．４ 试验步骤４．４．１ 二硝基氟苯溶液配制１％的ＤＮＦＢ溶液应新鲜配制，称取ＤＮＦＢ５０ｍｇ，置于清洁干燥的青霉素小瓶中，将预先配制好的５ｍＬ丙酮麻油溶液倒入小瓶，盖好并用胶布密封，混匀后，用２５０μＬ注射器通过瓶盖取用。４．４．２ 致敏试验前２４ｈ于小鼠背部，用剃须刀进行脱毛。试验第１天和第２天在小鼠背部脱毛区涂抹待检化学物１００μＬ。第６天将４０μＬ受试物敷在小鼠左耳，右耳敷溶剂。激发后２４ｈ和４８ｈ，颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径８ｍｍ的耳片，称重。以左右耳重量之差为肿胀度。１犛犖／犜２４９７．７—２０１０５ 试验结果试验结果可以用双侧耳朵厚度的差值（ｍｍ）来表示或用耳肿胀程度（％）来表示。耳肿胀（％）＝（实验耳厚度／对照耳厚度）×１００％。２犛犖／犜２４９７．７—２０１０书书书０１０２—７．７９４２犜／犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准进出口危险化学品安全试验方法第７部分：小鼠耳肿胀试验ＳＮ／Ｔ２４９７．７—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６ ６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６ 印张０．５ 字数５千字２０１０年５月第一版 ２０１０年５月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２０９２７ 定价１４．００元