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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜０１２５—２０１０代替ＳＮ０１２５—１９９２进出口食品中敌百虫残留量检测方法液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋狉犻犮犺犾狅狉犳狅狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犿犲犪狋犪狀犱犿犲犪狋狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２０１０１１０１发布２０１１０５０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ０１２５—１９９２《出口肉及肉制品中敌百虫残留量的检验方法》。本标准与ＳＮ０１２５—１９９２相比，主要技术变化如下：———使用范围、指标包括原标准的内容；———采用气相色谱质谱法；———增加阳性确证内容；———整合前处理条件。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李爱军、王明泰、马旭、牟峻、卢利军、马书民、周晓。本标准所代替标准历次版本发布情况为：———ＺＢＸ７１００２—１９８７、ＺＢＸ２２００９—１９８８、ＳＮ０１２５—１９９２。Ⅰ犛犖／犜０１２５—２０１０进出口食品中敌百虫残留量检测方法液相色谱质谱／质谱法１ 范围本标准规定了出口农产品中敌百虫残留量的液相色谱质谱／质谱检测和确证方法。本标准适用于出口清蒸猪肉罐头、猪肉、鸡肉、牛肉、鱼肉、香肠、糙米、玉米、洋葱、核桃中敌百虫残留量的测定。２ 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法３ 方法提要试样用环己烷＋乙酸乙酯（１＋１，体积比）提取，经凝胶色谱净化，用甲醇＋水（１＋１，体积比）定容，供液相色谱质谱／质谱仪测定，外标法定量。４ 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１ 环己烷：高效液相色谱级。４．２ 甲醇：高效液相色谱级。４．３ 乙酸乙酯：残留级。４．４ 无水硫酸钠：６５０℃灼烧４ｈ，储于密封容器中备用。４．５ 环己烷＋乙酸乙酯：（１＋１，体积比）：量取１００ｍＬ环己烷和１００ｍＬ正己烷，混匀。４．６ 乙酸铵：优级纯。４．７ ５０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液：称取０．３８５ｇ乙酸铵溶于１０００ｍＬ水中。４．８ 敌百虫标准品（ｔｒｉｃｈｌｏｒｆｏｎ，ＣＡＳ编号：５２６８６，分子式：Ｃ４Ｈ８Ｃｌ３Ｏ４Ｐ）：纯度大于等于９８．０％。４．９ 敌百虫标准储备溶液：准确称取适量的敌百虫标准品，用甲醇配制成浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准储备溶液。该溶液在０℃～４℃冰箱中保存。４．１０ 敌百虫标准工作溶液：根据需要将敌百虫标准储备溶液（３．１０）用甲醇稀释成适用浓度的标准工作溶液。该溶液在０℃～４℃冰箱中保存。４．１１ 有机微孔滤膜：０．２０μｍ，０．４５μｍ。５ 仪器与设备５．１ 液相色谱质谱／质谱仪：配有电喷雾离子源（ＥＳＩ）。１犛犖／犜０１２５—２０１０５．２ 电子天平：感量：０．０００１ｇ。５．３ 凝胶色谱仪：配有单元泵、馏分收集器。５．４ 均质器。５．５ 旋转蒸发器。５．６ 浓缩瓶：２５０ｍＬ。５．７ 离心机：３０００ｒ／ｍｉｎ以上。５．８ 离心管：四氟乙烯，５０ｍＬ。５．９ 涡旋混匀器。６ 试样制备与保存６．１ 试样制备６．１．１ 肉：将所取全部样品，缩分出有代表性样品不少于５００ｇ，经捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器，密封，标明标记。６．１．２ 罐头：将所取全部样品正罐倒出，缩分出有代表性样品不少于５００ｇ，经捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器，密封，标明标记。６．１．３ 糙米、玉米、洋葱、核桃：取代表性样品约５００ｇ，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器，密封，标明标记。６．２ 试样保存肉类试样于－１８℃以下冷冻保存；粮谷类、坚果类及其他类试样于０℃～４℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。７ 测定步骤７．１ 提取称取解冻试样１０ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管（５．８）中，加６ｇ无水硫酸钠（４．５）和２０ｍＬ环己烷＋乙酸乙酯（４．６），均质２ｍｉｎ，在３０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，吸出环己烷＋乙酸乙酯层通过装有无水硫酸钠的桶形漏斗，收集于２５０ｍＬ浓缩瓶中，残渣分别用１５ｍＬ环己烷＋乙酸乙酯提取两次，提取液合并于２５０ｍＬ浓缩瓶中，于４０℃下浓缩至约２ｍＬ，将２ｍＬ提取液转移至试管中，并用３ｍＬ环己烷乙酸乙酯（４．６）分三次洗涤浓缩瓶，合并洗涤液于试管中，在室温下，氮吹浓缩近干，用环己烷乙酸乙酯（４．６）定容１０ｍＬ，过０．４５μｍ滤膜，待凝胶色谱（ＧＰＣ）净化。７．２ 净化７．２．１ 凝胶色谱（犌犘犆）净化７．２．１．１ 凝胶色谱条件凝胶色谱条件如下：ａ） 凝胶净化柱：ＢｉｏＢｅａｄｓＳＸ３，７００ｍｍ×２５ｍｍ（内径），或相当者；ｂ）流动相：乙酸乙酯环己烷（１＋１，体积比）；ｃ）流速：４．７ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）样品定量环：１０ｍＬ；２犛犖／犜０１２５—２０１０ｅ）预淋洗时间：１０ｍｉｎ；ｆ）凝胶色谱平衡时间：５ｍｉｎ；ｇ）收集时间：２１ｍｉｎ～２８ｍｉｎ。７．２．１．２ 凝胶色谱净化步骤将１０ｍＬ待净化液（７．１）按７．２．１．１规定的条件进行净化，收集组分于室温下氮吹浓缩近干，用甲醇＋水（１＋１，体积比）溶解并定容至１．０ｍＬ，过０．２０μｍ滤膜，供液相色谱质谱／质谱仪测定。７．３ 测定７．３．１ 液相色谱质谱／质谱条件液相色谱质谱／质谱条件如下：ａ）色谱柱：ｋｒｏｍａｓｉｌ１００５Ｃ１８色谱柱，１５０ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），粒径５μｍ或相当者；ｂ）流动相：甲醇（４．４）５０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液（４．９），梯度洗脱程序见表１：表１ 流动相梯度洗脱程序时间ｍｉｎ甲醇％５０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺溶液％０１０．０９０．０５．００１０．０９０．０１０．００９５．０５．０１８．００９５．０５．０１８．０１１０．０９０．０２５．００１０．０９０．０ｃ）流速：０．２０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）柱温：４０℃；ｅ）进样量：１０μＬ；ｆ）离子源：电喷雾离子源；ｇ）扫描方式：正离子；ｈ）检测方式：多反应检测（ＭＲＭ）；ｉ）质谱条件参见附录Ａ。７．３．２ 色谱测定根据试样中被测样液的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱条件下敌百虫的参考保留时间约为：１５．７５ｍｉｎ，敌百虫标准品多反应检测（ＭＲＭ）色谱图参见附录Ｂ中Ｂ．１；外标法定量。７．３．３ 定性测定按照液相色谱质谱／质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定量测定时采用标准曲线法。定性时应当与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表２规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。３犛犖／犜０１２５—２０１０表２ 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０７．３．４ 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。８ 结果计算和表述用色谱数据处理机或用标准曲线按式（１）计算试样中敌百虫的残留量，计算结果需扣除空白值：犡＝犮×犞×狀犿×１０００…………………………（１）式中：犡———试样中敌百虫残留量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮———从标准曲线上得到的待测液中敌百虫的浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；狀———稀释倍数；犿———最终样液所代表的试样质量，单位为克（ｇ）。注：计算结果应扣除空白值。９ 测定低限（犔犗犙）和回收率９．１ 测定低限（犔犗犙）本方法对出口清蒸猪肉罐头、猪肉、鸡肉、牛肉、鱼肉、香肠中敌百虫残留量的测定低限均为０．００２ｍｇ／ｋｇ（ＬＯＱ）：糙米、玉米、洋葱、核桃中敌百虫残留量的测定低限均为０．００４ｍｇ／ｋｇ（ＬＯＱ）。９．２ 回收率回收率的实验数据（在不同添加浓度范围内）见表３。表３ 本方法添加浓度及回收率范围样品名称添加浓度ｍｇ／ｋｇ回收率范围％测定低限ｍｇ／ｋｇ清蒸猪肉罐头０．００２７０．０～８６．５０．０１０７１．０～１０７．００．２００８１．８～９９．２０．００２猪肉０．００２６９．５～９５．５０．０１０７０．０～１０１．００．２００７６．４～１０２．７０．００２４犛犖／犜０１２５—２０１０表３（续）样品名称添加浓度ｍｇ／ｋｇ回收率范围％测定低限ｍｇ／ｋｇ鸡肉０．００２７１．０～９１．５０．０１０６８．０～１０９．００．２００８５．１～９５．８０．００２牛肉０．００２７０．５～９６．５０．０１０６７．０～８６．００．２００８５．７～１００．００．００２鱼肉０．００２６９．０～１０１．５０．０１０７１．０～１０５．００．２００８９．６～１１０．１０．００２香肠０．００２６５．０～８６．５０．０１０７１．０～１０７．００．２００７４．９～９９．２０．００２糙米０．００４７０．０～８７．５０．０１０７０．０～８２．００．２００７１．１～９８．９０．００４玉米０．００４７０．０～９６．００．０１０７１．０～９５．００．２００７２．３～８７．９０．００４洋葱０．００４７１．０～９２．５０．０１０７０．０～９６．００．５００９３．４～１００．９０．００４核桃０．００４７０．０～９５．００．０１０７０．０～９４．００．５００７１．６～９２．６０．００４５犛犖／犜０１２５—２０１０附 录 犃（资料性附录）犃犘犐４０００犔犆／犕犛／犕犛检测敌百虫色谱条件电喷雾离子源参考条件检测离子对及电压参数：ａ） 气帘气（ＣＵＲ）：１５．００ｐｓｉ；ｂ）雾化气（ＧＳ１）：４０．００ｐｓｉ；ｃ）辅助加热气（ＧＳ２）：４５．００Ｌ／ｍｉｎ；ｄ）碰撞气（ＣＡＤ）：７．００ｐｓｉ；ｅ）离子源喷雾电压（ＩＳ）：５０００．００Ｖ；ｆ）离子源温度（ＴＥＭ）：５５０℃；ｇ）定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量、碰撞室出口电压见表Ａ．１。表犃．１ 犙１、犙３、去簇电压、碰撞能量、碰撞室出口电压表名称Ｑ１ｍ／ｚＱ３ｍ／ｚ去簇电压Ｖ碰撞能量ｅＶ碰撞室出口电压Ｖ敌百虫ｔｒｉｃｈｌｏｒｆｏｎ２５９．０１０９．２６３．０２６．５１９．０２５６．９２２１．２６３．０１６．０１３．０１） 非商业声明：附录Ａ所列参考质谱条件是在ＡＰＩ４０００液相色谱质谱／质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。６犛犖／犜０１２５—２０１０附 录 犅（资料性附录）敌百虫标准品多反应检测（犕犚犕）色谱图犪）犫）犮）图犅．１ 敌百虫标准品多反应检测（犕犚犕）色谱图（０．０１μ犵／犿犔）７犛犖／犜０１２５—２０１０犉狅狉犲狑狅狉犱犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅犌犅／犜１．１—２００９．犜犺犻狊狊犲犮狋犻狅狀狅犳狋犺犲狅狉犻犵犻狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱狊（犛犖／犜０１２５—１９９２）狑犪狊狉犲狏犻狊犲犱犪狀犱犮狅狀狊狅犾犻犱犪狋犲犱犻狀犱犲狓，狌狊犲狋犺犲狉犪狀犵犲，犻狀犮犾狌犱犻狀犵狋犺犲狅狉犻犵犻狀犪犾２狉犲犾犪狋犲犱狊狋犪狀犱犪狉犱狊，狌狊犻狀犵犵犪狊犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿犪狊狊狊狆犲犮狋狉狅犿犲狋狉狔，犻狀犮狉犲犪狊犲狆狅狊犻狋犻狏犲犮狅狀犳犻狉犿犪狋犻狅狀狅犳犮狅狀狋犲狀狋，犻狀狋犲犵狉犪狋犻狅狀狅犳狆狉犲狋狉犲犪狋犿犲狀狋犮狅狀犱犻狋犻狅狀狊．犘犾犲犪狊犲狀狅狋犲狋犺犪狋狊狅犿犲狅犳狋犺犲犮狅狀狋犲狀狋狅犳狋犺犻狊犱狅犮狌犿犲狀狋犿犪狔犻狀狏狅犾狏犲狆犪狋犲狀狋．犜犺犻狊犳犻犾犲犻狊狀狅狋狉犲狊狆狅狀狊犻犫犾犲犳狅狉狋犺犲狆狌犫犾犻狊犺犻