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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２８０７—２０１１进出口食品中三氟羧草醚残留量的检测液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犮犻犳犾狌狅狉犳犲狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２０１１０２２５发布２０１１０７０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不涉及识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：安娟、郭淳、于静、邓伟、李刚、李淑娟、刘柳。Ⅰ犛犖／犜２８０７—２０１１进出口食品中三氟羧草醚残留量的检测液相色谱质谱／质谱法１ 范围本标准规定了食品中三氟羧草醚残留量的液相色谱串联质谱的检测和确证方法。本标准规定了大豆、大米、糙米、毛豆、苹果和猪肉中三氟羧草醚残留量的测定。２ 方法提要大豆、大米和糙米试样加水浸泡后用乙腈振荡提取，毛豆、苹果和猪肉样品直接用乙腈振荡提取，然后依次通过液液分配和固相萃取对提取液进行净化，用液相色谱质谱／质谱仪检测，外标法定量。３ 试剂和材料除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。３．１ 乙腈：高效液相色谱级。３．２ 甲醇：高效液相色谱级。３．３ 甲酸。３．４ 氯化钠。３．５ 无水硫酸钠：使用前在６５０℃灼烧４ｈ，贮于干燥器中，冷却后备用。３．６ 乙腈饱和正己烷：加入适量乙腈并充分摇匀后备用。３．７ 甲酸乙腈溶液：移取０．５ｍＬ甲酸加入５００ｍＬ乙腈中，摇匀备用。３．８ 甲酸水溶液：移取１．０ｍＬ甲酸加入１０００ｍＬ水中，摇匀备用。３．９ 流动相：甲酸水溶液乙腈（１＋９，体积比）。３．１０ 标准物质：三氟羧草醚（ａｃｉｆｌｕｏｒｆｅｎ，ＣＡＳ编号：５０５９４６６６），纯度大于等于９９％。３．１１ 标准储备溶液：准确称取适量标准品（精确至０．１ｍｇ），用甲醇溶解，配制成浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准储备溶液，－１８℃以下冷冻避光保存，有效期３个月。３．１２ 标准工作溶液：准确移取１ｍＬ标准储备液于１０ｍＬ容量瓶中，用流动相定容至刻度，配制成浓度为１０μｇ／ｍＬ的标准工作溶液，０℃～４℃冷藏避光保存，有效期１个月。３．１３ 固相萃取柱：Ｃ１８柱，５００ｍｇ／３ｍＬ，或相当者，使用前用１０ｍＬ甲酸乙腈溶液预淋洗。３．１４ 微孔滤膜：０．２０μｍ，有机相型。３．１５ 氮气：纯度大于等于９９．９９９％。４ 仪器和设备４．１ 液相色谱质谱／质谱仪：配有电喷雾离子源（ＥＳＩ）。４．２ 样品粉碎机：配２０目样品筛。４．３ 天平：感量为０．１ｍｇ和０．０１ｇ。４．４ 塑料离心管：５０ｍＬ，具塞。１犛犖／犜２８０７—２０１１４．５ 振荡器。４．６ 离心机。４．７ 旋转浓缩仪。４．８ 氮吹仪。４．９ 涡旋混合器。５ 试样制备与保存５．１ 大豆、大米和糙米样品取代表性试样５００ｇ，用粉碎机粉碎并使其全部通过２０目的样品筛。混和均匀，装入洁净的容器内，密封并标识，于０℃～４℃避光保存。５．２ 毛豆、苹果和猪肉取代表性试样５００ｇ，用粉碎机粉碎并混和均匀，装入洁净的容器内，密封并标识，于－１８℃以下冷冻避光保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。６ 分析步骤６．１ 提取称取试样５ｇ（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ具塞塑料离心管中。对于大豆、大米和糙米样品，加入１０ｍＬ水，涡旋混合后放置３０ｍｉｎ后加入２０ｍＬ乙腈；对于毛豆、苹果和猪肉样品，直接加入２０ｍＬ乙腈。振荡提取３０ｍｉｎ后，以４０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，将上清液转移至另一５０ｍＬ具塞塑料离心管中，用１５ｍＬ乙腈重复提取残渣一次，合并上清液于离心管中。向移液管中加入３ｇ氯化钠，涡旋混合后，以４０００ｒ／ｍｉｎ离心１ｍｉｎ，将上层溶液转移至分液漏斗中。再加入１５ｍＬ乙腈重复提取一次，合并上层溶液，待净化。６．２ 净化６．２．１ 液液分配净化将２０ｍＬ正己烷加入待净化溶液（６．１），振荡５ｍｉｎ后静置分层。将下层溶液过无水硫酸钠漏斗后收集于浓缩瓶中。于４０℃以下水浴旋转浓缩至近干，再用氮气吹干。用１ｍＬ甲酸乙腈溶液溶解残渣。６．２．２ 固相萃取净化将甲酸乙腈溶液（６．２．１）转入ＥＮＶＩ１８固相萃取柱的同时就开始收集流出液。再用５ｍＬ甲酸乙腈溶液进行洗脱，收集全部流出液。整个固相萃取净化过程控制流速不超过２ｍＬ／ｍｉｎ。流出液在４０℃以下用氮气吹干。残留物用１．０ｍＬ流动相溶解，旋涡混匀后，过０．２μｍ微孔滤膜，供液相色谱串联质谱仪检测。６．２．３ 基质标准工作溶液的配制称取５份空白试样，按照６．１步骤进行操作。在６．２步骤中，准确移取一定体积的标准溶液并添加２犛犖／犜２８０７—２０１１至经固相萃取净化的流出液，其余步骤同６．２。基质标准工作溶液应现用现配。６．３ 测定６．３．１ 液相色谱条件６．３．１．１ 色谱柱：Ｃ１８，１５０ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），５μｍ，或相当者。６．３．１．２ 柱温：４０℃。６．３．１．３ 流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ。６．３．１．４ 进样量：１０μＬ。６．３．１．５ 流动相：乙腈：甲酸水（％）（９０＋１０，体积比）。６．３．２ 质谱条件参见表Ａ．１和表Ａ．２。６．３．３ 定性测定按照上述条件测定样品和基质标准溶液，如果样品的质量色谱峰保留时间与混合基质标准溶液一致；定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表１的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表１ 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０６．３．４ 定量测定按照外标法进行定量计算。按浓度由小到大的顺序，依次分析基质标准工作溶液，得到浓度与峰面积的工作曲线。样品溶液中分析物的响应值应在工作曲线范围内。在上述液相色谱质谱／质谱条件下，三氟羧草醚的保留时间约为２．３ｍｉｎ。基质标准溶液的液相色谱质谱／质谱多反应监测（ＭＲＭ）色谱图参见附录Ｂ。７ 结果计算试样中分析物的残留含量，按式（１）或用检测仪器的数据处理机计算：犡＝犮×犞犿×１０００…………………………（１） 式中：犡———试样中分析物的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮———从基质标准曲线上得到的样液中分析物的含量，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———最终样液所代表的试样质量，单位为克（ｇ）。３犛犖／犜２８０７—２０１１８ 测定低限本方法中三氟羧草醚的测定低限为０．００２ｍｇ／ｋｇ。９ 回收率本方法添加浓度范围及回收率数据参见附录Ｃ。４犛犖／犜２８０７—２０１１附 录 犃（资料性附录）质谱条件１）表犃．１ 质谱条件电离源ＥＳＩ毛细管电压４．０ｋＶ干燥气体温度３５０℃雾化器压力２７５．８ｋＰａ（４０ｐｓｉ）干燥气体流速氮气，流速８Ｌ／ｍｉｎ碰撞气氮气扫描方式负离子扫描监测方式多反应监测（ＭＲＭ）表犃．２ 多反应监测条件化合物母离子子离子驻留时间锥孔电压碰撞能量三氟羧草醚３６０．１３１６．１０．２０ｓ８０Ｖ３ｅＶ２８６．１０．２０ｓ８０Ｖ１０ｅＶ 注：加“”的离子用于定量。１） 非商业性声明：附录Ａ所列参数是在Ａｇｉｌｅｎｔ６４１０ＱＱＱ质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。５犛犖／犜２８０７—２０１１附 录 犅（资料性附录）多反应监测质量色谱图犪）犫）图犅．１ 标准品多反应监测质量色谱图６犛犖／犜２８０７—２０１１附 录 犆（资料性附录）添加浓度及回收率范围表犆．１ 添加浓度及回收率范围样品名称添加浓度ｍｇ／ｋｇ回收率范围％大豆０．００２８１．１～９１．８０．００４８０．４～９７．３０．０２８１．４～９７．１０．１８４．４～９８．０大米０．００２８０．１～９４．２０．００４８１．０～９７．５０．０２８１．０～９５．３０．１８４．１～９７．３糙米０．００２８２．８～９４．２０．００４８０．１～９７．３０．０２８０．１～９６．７０．１８５．３～９７．１毛豆０．００２８４．３～９２．７０．００４８０．５～９４．７０．０２８１．８～９４．９０．１８６．２～９６．６苹果０．００２８０．７～９５．００．００４８０．７～９６．５０．０２８１．８～９６．２０．１８６．１～９６．１猪肉０．００２８０．７～９４．６０．００４８４．６～９７．００．０２８４．６～９６．００．１８５．９～９７．５７犛犖／犜２８０７—２０１１犉狅狉犲狑狅狉犱犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犻狀犪犮犮狅狉犱犪狀犮犲狑犻狋犺狋犺犲犌犅／犜１．１—２００９．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犼狌狉犻狊犱犻犮狋犻狅狀狅犳狋犺犲犆犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犃犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犃犱犿犻狀犻狊狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲．犕犪犻狀犱狉犪犳狋犲狉狊狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犪狉犲：犃狀犑狌犪狀，犌狌狅犆犺狌狀，犢狌犑犻狀犵，犇犲狀犵犠犲犻，犔犻犌犪狀犵，犔犻犛犺狌犼狌犪狀，犔犻狌犔犻狌．８犛犖／犜２８０７—２０１１犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犮犻犳犾狌狅狉犳犲狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱１ 犛犮狅狆犲犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犮犻犳犾狌狅狉犳犲狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊犫狔犔犆犕犛／犕犛．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狆犾犻犮犪犫犾犲狋狅狋犺犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犮犻犳犾狌狅狉犳犲狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狊狅狔犪，狉犻犮犲，犫狉狅狑狀狉犻犮犲，犵狉犲犲狀狊狅狔犫犲犪狀，犪狆狆犾犲犪狀犱狆狅狉犽．２ 犘狉犻狀犮犻狆犾犲犛犪犿狆犾犲犻狊狊狅犪犽犲犱犻狀狑犪狋犲狉，犪狀犱狋犺犲狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狋犺犲狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲犪狉犲犲狓狋狉犪犮狋犲犱狑犻狋犺犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲．犃犳狋犲狉犮犾犲犪狀犲犱狌狆犫狔犾犻狇狌犻犱犾犻狇狌犻犱狆犪狉狋犻狋犻狅狀犪狀犱狊狅犾犻犱狆犺犪狊犲犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀犮犪狉狋狉犻犱犵犲，狋犺犲狉犲狊犻犱狌犲狊犪狉犲狋犺犲狀犱犲狋犲狉犿犻狀犲犱犫狔犔犆犕犛／犕犛犪狀犱狇狌犪狀狋犻犳犻犲犱犫狔犲狓狋犲狉狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱犿犲狋犺狅犱．３ 犚犲犪犵犲狀狋狊犪狀犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊犝狀犾犲狊狊狊狆犲犮犻犳犻犮犪犾犾狔犿犲狀狋犻狅狀犲犱，犪犾犾狉犲犪犵犲狀狋狊狌狊犲犱狊犺狅狌犾犱犫犲犪狀犪犾狔狋犻犮犪犾犵狉犪犱犲，“狑犪狋犲狉”犻狊犱犲犻狅狀犻狕犲犱狑犪狋犲狉．３．１ 犃犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲：犎犘犔犆犵狉犪犱犲．３．２ 犕犲狋犺犪狀狅犾：犎犘犔犆犵狉犪犱犲．３．３ 犉狅狉犿犻犮犪犮犻犱．３．４ 犖犪犆犾．３．５ 犃狀犺狔犱狉狅狌狊狊狅犱犻狌犿狊狌犾犳犪狋犲：犅狌狉狀犪狋６５０℃犳狅狉４犺犪狀犱狋犺犲狀狊狋狅狉犲犻狀犪犱犲狊犻犮犮犪狋狅狉．３．６ 狀犺犲狓犪狀犲：犃犱犱狊狅犿犲犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲犪狀犱狊犺犪犽犲犳狅狉犪狑犺犻犾犲．３．７ 犉狅狉犿犻犮犪犮犻犱犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀：犃犱犱０．５犿犔犳狅狉犿犻犮犪犮犻犱狋狅５００犿犔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲．３．８ 犉狅狉犿犻犮犪犮犻犱狑犪狋犲狉狊狅犾狌狋犻狅狀：犪犱犱１．０犿犔犳狅狉犿犻犮犪犮犻犱狋狅１０００犿犔狑犪狋犲狉．９犛犖／犜２８０７—２０１１３．９ 犉犻狓狊狅犾狌狋犻狅狀：犉狅狉犿犻犮犪犮犻犱狑犪狋犲狉犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾