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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４８３—２０１０进出口粮谷中柄曲菌素含量检测方法液相色谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狋犲狉犻犵犿犪狋狅犮狔狊狋犻狀犮狅狀狋犲狀狋狊犻狀犮犲狉犲犪犾狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犎犘犔犆犿犲狋犺狅犱２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖北出入境检验检疫局。本标准主要起草人：胡小钟、赵晓亚、林雁飞、王鹏、李晶、付晓芳。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４８３—２０１０进出口粮谷中柄曲菌素含量检测方法液相色谱法１ 范围本标准规定了进出口粮谷中柄曲菌素含量液相色谱检测方法。本标准适用于进出口大米、大麦、燕麦、小麦中柄曲菌素含量的检测。２ 方法提要样品中的柄曲菌素用乙腈提取，Ｃ１８固相萃取小柱净化，用液相色谱仪配紫外或二极管阵列检测器测定，外标法定量。３ 试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相当纯度的水。３．１ 甲醇：色谱纯。３．２ 乙腈：色谱纯。３．３ 乙酸：优级纯。３．４ 酸化乙腈溶液：色谱纯乙腈，用乙酸调ｐＨ值至５．０。３．５ Ｃ１８固相萃取柱：５００ｍｇ，３ｍＬ，或相当者。使用前分别用５ｍＬ甲醇和５ｍＬ水预淋洗并保持柱体湿润。３．６ 柄曲菌素标准物质（ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｔｉｎ，Ｃ１８Ｈ１２Ｏ６，ＣＡＳＮＯ：１００４８１３２）：纯度大于或等于９７％。３．７ 柄曲菌素标准储备液：精密称取适量标准品（精确至０．０００１ｇ），用乙腈溶解配制浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ的标准储备液，保存于－１８℃冰箱内。３．８ 柄曲菌素标准工作液：根据需要用流动相将标准储备液稀释成２５ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ的标准工作溶液。保存于４℃冰箱内。４ 仪器和设备４．１ 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。４．２ 振荡器。４．３ 离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ。４．４ 旋转蒸发器。４．５ 真空固相萃取装置。４．６ 氮吹仪。４．７ 分析天平。５ 试样制备和保存取有代表性样品５００ｇ，用粉碎机粉碎并通过８３０μｍ圆孔筛，混匀，分成２份，装入洁净容器内，密封并标识。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。１犛犖／犜２４８３—２０１０６ 测定步骤６．１ 提取准确称取样品５．０ｇ（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管内，向其中加入１５ｍＬ酸化乙腈溶液，振荡提取３０ｍｉｎ。在３５００ｒ／ｍｉｎ下离心３ｍｉｎ，转移上层有机相至２５０ｍＬ梨形瓶中，用１５ｍＬ酸化乙腈溶液重复提取两次，合并于２５０ｍＬ梨形瓶中。４５℃下，减压浓缩至干。加入５ｍＬ酸化乙腈溶液溶解，溶解液再加入２０ｍＬ水。６．２ 净化将上述溶液过预淋洗好的Ｃ１８固相萃取柱，用５ｍＬ水淋洗柱子。待淋洗液全部流出柱子后，减压抽干３ｍｉｎ。用５ｍＬ甲醇洗脱，接取全部洗脱液。在４０℃下，洗脱液用氮气吹干，再以１．０ｍＬ流动相溶解残渣，混匀，过０．４５μｍ滤膜，滤液供液相色谱测定。６．３ 测定６．３．１ 液相色谱条件ａ） 色谱柱：Ｃ１８柱，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），粒径５μｍ，或相当者；ｂ） 流动相：乙腈水（５５＋４５，犞／犞），乙酸调ｐＨ５．５；ｃ） 流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ） 进样量：２０μＬ；ｅ） 柱温：２８℃；ｆ） 检测波长：３２５ｎｍ。６．３．２ 色谱测定根据样液中被测柄曲菌素含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中柄曲菌素响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，柄曲菌素保留时间约为９．０ｍｉｎ，标准物质色谱图参见图Ａ．１。６．３．３ 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。７ 结果计算和表述用色谱数据处理软件或按式（１）计算试样中柄曲菌素质量分数，计算结果需将空白值扣除：犡＝犃×犮×犞犃ｓ×犿…………………………（１） 式中：犡———试样中柄曲菌素质量分数，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犃———样液中柄曲菌素的峰面积；犃ｓ———标准工作溶液中柄曲菌素的峰面积；犮———标准工作溶液中柄曲菌素的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———最终样液所代表的试样量，单位为克（ｇ）。８ 测定低限、回收率８．１ 测定低限本方法的测定低限为０．０１ｍｇ／ｋｇ。８．２ 回收率粮谷中柄曲菌素检测的添加回收率数据见表１。２犛犖／犜２４８３—２０１０表１ 回收率数据基体添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％大米０．０１８８．４～９１．７０．０２５８８．０～９１．４０．０５７９．３～９４．３大麦０．０１７８．４～９３．７０．０２５７７．１～９６．２０．０５７６．８～９２．６燕麦０．０１７８．６～９５．６０．０２５７６．４～９３．５０．０５７８．９～９４．２小麦０．０１７６．９～９４．３０．０２５７８．５～９１．８０．０５８１．４～９６．５３犛犖／犜２４８３—２０１０附 录 犃（资料性附录）标准物质色谱图图犃．１ 柄曲菌素标准物质（１００狀犵／犿犔）的液相色谱图４犛犖／犜２４８３—２０１０犉狅狉犲狑狅狉犱犃狀狀犲狓犃狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狀犻狀犳狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犼狌狉犻狊犱犻犮狋犻狅狀狅犳犆犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犃犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犃犱犿犻狀犻狊狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犎狌犫犲犻犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犲犿犪犻狀犱狉犪犳狋犲狉狊狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犪狉犲犎狌犡犻犪狅狕犺狅狀犵，犣犺犪狅犡犻犪狅狔犪，犔犻狀犢犪狀犳犲犻，犠犪狀犵犘犲狀犵，犔犻犑犻狀犵，犉狌犡犻犪狅犳犪狀犵．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狉狅犳犲狊狊犻狅狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱犳狅狉犈狀狋狉狔犈狓犻狋犻狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪狆狉狅犿狌犾犵犪狋犲犱犳狅狉狋犺犲犳犻狉狊狋狋犻犿犲．犖狅狋犲：犜犺犻狊犈狀犵犾犻狊犺狏犲狉狊犻狅狀，犪狋狉犪狀狊犾犪狋犻狅狀犳狉狅犿狋犺犲犆犺犻狀犲狊犲狋犲狓狋，犻狊狅狀犾狔犳狅狉狉犲犳犲狉犲狀犮犲．５犛犖／犜２４８３—２０１０犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狋犲狉犻犵犿犪狋狅犮狔狊狋犻狀犮狅狀狋犲狀狋狊犻狀犮犲狉犲犪犾狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犎犘犔犆犿犲狋犺狅犱１ 犛犮狅狆犲犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犿犲狋犺狅犱狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狋犲狉犻犵犿犪狋狅犮狔狊狋犻狀犻狀犮犲狉犲犪犾狊犫狔犺犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔（犎犘犔犆）．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狆犾犻犮犪犫犾犲狋狅狋犺犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狋犲狉犻犵犿犪狋狅犮狔狊狋犻狀犮狅狀狋犲狀狋狊犻狀狉犻犮犲，犫犪狉犾犲狔，狅犪狋狊犪狀犱狑犺犲犪狋犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋．２ 犘狉犻狀犮犻狆犾犲犜犺犲犮狅狀狋犲狀狋狊狅犳狊狋犲狉犻犵犿犪狋狅犮狔狊狋犻狀犻狀犮犲狉犲犪犾犪狉犲犲狓狋狉犪犮狋犲犱狑犻狋犺犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲．犜犺犲狉犲犪犳狋犲狉犫犲犻狀犵犮犾犲犪狀犲犱狌狆犫狔狋犺犲犆１８犛犘犈犮狅犾狌犿狀，狋犺犲犮狅狀狋犲狀狋狊犪狉犲犱犲狋犲狉犿犻狀犲犱犫狔犎犘犔犆狑犻狋犺犝犞狅狉犇犃犇犱犲狋犲犮狋狅狉，狇狌犪狀狋犻犳犻犲犱犫狔犲狓狋犲狉狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱犿犲狋犺狅犱．３ 犚犲犪犵犲狀狋狊犪狀犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊犝狀犾犲狊狊狊狆犲犮犻犳犻犲犱，犪犾犾狉犲犪犵犲狀狋狊狌狊犲犱狊犺狅狌犾犱犫犲狅犳犪狀犪犾狔狋犻犮犪犾犵狉犪犱犲；“狑犪狋犲狉”犻狊狋犺犲犱狅狌犫犾犲犱犻狊狋犻犾犾犲犱狑犪狋犲狉．３．１ 犕犲狋犺犪狀狅犾：犆犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺犻犮狆狌狉犲．３．２ 犃犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲：犆犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺犻犮狆狌狉犲．３．３ 犃犮犲狋犻犮犪犮犻犱：犌狌犪狉犪狀狋犲犲犱狉犲犪犵犲狀狋．３．４ 犃犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀：犆犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺犻犮狆狌狉犲犃犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲，犃犱犼狌狊狋犲犱狆犎狏犪犾狌犲狋狅５．０犫狔犪犮犲狋犻犮犪犮犻犱．３．５ 犆１８犛犘犈犆犪狉狋狉犻犱犵犲：５００犿犵，３犿犔．狅狉犲狇狌犻狏犪犾犲狀狋．犆狅狀犱犻狋犻狅狀犆１８犛犘犈犮犪狉狋狉犻犱犵犲狑犻狋犺５犿犔犿犲狋犺犪狀狅犾犪狀犱５犿犔狑犪狋犲狉犫犲犳狅狉犲狌狊犻狀犵．３．６ 犛狋犲狉犻犵犿犪狋狅犮狔狊狋犻狀狊狋犪狀犱犪狉犱犮犺犲犿犻犮犪犾狊（犆１８犎１２犗６，犆犃犛犖犗：１００４８１３２），犘狌狉犻狋狔狑犪狊９７％犪犫狅狏犲．３．７ 犛狋犪狀犱犪狉犱狊狋狅犮犽狊狅犾狌狋犻狅狀：犃犮犮狌狉犪狋犲犾狔狑犲犻犵犺犪狆狆狉狅狆狉犻犪狋犲狊狋犲狉犻犵犿犪狋狅犮狔狊狋犻狀（３．６），犱犻狊狊狅犾狏犲犪狀犱６犛犖／犜２４８３—２０１０狇狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲犾狔狑犻狋犺犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲．犜犺犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狊狅犾狌狋犻狅狀犻狊１．０犿犵／犿犔．犜犺犲狊狋狅犮犽狊狅犾狌狋犻狅狀狊犺狅狌犾犱犫犲狊狋狅狉犲犱犪狋－１８℃．３．８ 犛狋犪狀犱犪狉犱狑狅狉犽犻狀犵狊狅犾狌狋犻狅狀：犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅狋犺犲狉犲狇狌犻狉犲犿犲狀狋，犪犮犮狌狉犪狋犲犾狔犪犱犱犱犻犳犳犲狉犲狀狋狏狅犾狌犿犲狊狅犳狊狋犪狀犱犪狉犱狊狋狅犮犽狊狅犾狌狋犻狅狀狋狅犪１０犿犔狏狅犾狌犿犲狋狉犻犮犳犾犪狊犽，犱犻犾狌狋犲狑犻狋犺犿狅犫犻犾犲狆犺犪狊犲狋狅犿犪犽犲犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狊狅犾狌狋犻狅狀狊狌犮犺犪狊２５狀犵／犿犔，５０狀犵／犿犔，１００狀犵／犿犔，５００狀犵／犿犔，１０００狀犵／犿犔．犜犺犲狊狅犾狌狋犻狅狀狊犺狅狌犾犱犫犲狊狋狅狉犲犱犪狋４℃狉犲犳狉犻犵犲狉犪狋狅狉狔．４ 犃狆狆犪狉犪狋狌狊犪狀犱犲狇狌犻狆犿犲狀狋４．１ 犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔：犲狇狌犻狆狆犲犱狑犻狋犺犱犻狅犱犲犪狉狉犪狔犱犲狋犲犮狋狅狉犱犲狋犲犮狋犻狅狀．４．２ 犗狊犮犻犾犾犪狋狅狉．４．３ 犆犲狀狋狉犻犳狌犵犲．４．４ 犚狅狋犪狉狔犲狏犪狆狅狉犪狋狅狉．４．５ 犛狅犾犻犱狆犺犪狊犲犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狑犻狋犺狏犪犮犮狌犿狆狌犿狆．４．６ 犖犻狋狉狅犵犲狀犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋狅狉．５ 犛犪犿狆犾犲狆狉犲狆犪狉犪狋犻狅狀犪狀犱狊狋狅狉犪犵犲犜犺犲狊犪犿狆犾犲犻狊犪犫狅狌狋５００犵，犵狉犻狀犱狋犺狅狉狅狌犵犺犾狔犪狀犱犾犲狋狆犪狊狊狋犺狉狅狌犵犺犪８３０μ犿狊犻犲狏犲．犓犲犲狆狋犺犲狆狉犲狆犪狉犲犱狊犪犿狆犾犲犻狀狋狅犪犮犾犲犪狀犮狅狀狋犪犻狀犲狉，狊犲犪犾犪狀犱犾犪犫犲犾．犐狀狋犺犲犮狅狌狉狊犲狅犳狊犪犿狆犾犲狆狉犲狆犪狉犪狋犻狅狀，狆狉犲犮犪狌狋犻狅狀狊狊犺狅狌犾犱犫犲狋犪犽犲狀狋狅犪狏狅犻犱狋犺犲犮狅狀狋犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅狉犪狀狔犳犪犮狋狅狉狊狑犺犻犮犺犿犪狔犮犪狌狊犲狋犺犲犮犺犪狀犵犲狅犳狉犲狊犻犱狌犲犮狅狀狋犲狀狋．６ 犘狉狅犮犲犱狌狉犲６．１ 犈狓狋狉犪犮狋犻狅狀狆狉狅犮犲犱狌狉犲犃犮犮狌狉犪狋犲犾狔狑犲犻犵犺狋５．０犵狅犳狋犺犲狊犪犿狆犾犲（犪犮犮狌狉犪狋犲狋狅０．０１犵）犻狀狋狅犪５０犿犔犮犲狀狋狉犻犳狌犵犲狋狌犫犲，犪犱犱１５犿犔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀（３．４），犿犻狓犻狀狋犲狀狊犲犾狔犪狀犱犲狓狋狉犪犮狋狑犻狋犺狌犾狋狉犪狊狅狀犻犮犲狓狋狉犪犮狋狅狉３０犿犻狀．