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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２２３１—２００８进出口食品中呋虫胺残留量检测方法液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱犻狀狅狋犲犳狌狉犪狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛２００８１１１８发布２００９０６０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前 言本标准的附录Ａ和附录Ｂ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、龙大食品集团有限公司。本标准主要起草人：李立、付建、初玉圣、娄喜山、王杰。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２２３１—２００８食品伙伴网进出口食品中呋虫胺残留量检测方法液相色谱质谱／质谱法１ 范围本标准规定了进出口食品中呋虫胺残留量的制样和液相色谱质谱／质谱检测方法。本标准适用于小麦、花生、玉米、菠菜、苹果、胡萝卜、紫苏叶、猪肉及马哈鱼中呋虫胺残留量的检测和确认。２ 方法提要样品用乙腈提取，提取液加入无水硫酸钠脱水后，用石墨化非多孔碳柱（ＥｎｖｉＣａｒｂ）／酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱（ＬＣＮＨ２）净化，液相色谱质谱／质谱法测定，外标法定量。３ 试剂和材料除另有规定外，试剂均为色谱纯，水为超纯水。３．１ 乙腈。３．２ 正己烷。３．３ 丙酮。３．４ 乙醚。３．５ 氯化钠：优级纯。３．６ 无水硫酸钠：分析纯，６５０℃灼烧４ｈ，自然冷却后贮于密封瓶中备用。３．７ 磷酸氢二钾（Ｋ２ＨＰＯ４）：分析纯。３．８ 磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）：分析纯。３．９ 氢氧化钠：分析纯。３．１０ 盐酸：优级纯。３．１１ １ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠：称取４０ｇ氢氧化钠（３．９），溶于１Ｌ水中。３．１２ １ｍｏｌ／Ｌ盐酸：称取３６．５ｇ纯盐酸（３．１０），溶于１Ｌ水中。３．１３ 正己烷饱和的乙腈：在２５０ｍＬ的分液漏斗中分别加入１００ｍＬ乙腈（３．１）和１００ｍＬ正己烷（３．２），充分振摇，静置分层，下层为正己烷饱和乙腈。３．１４ 丙酮正己烷（１＋１，体积比）：将等体积丙酮（３．３）和正己烷（３．２）混合，充分振摇。３．１５ 磷酸缓冲液：０．５ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ＝７．０），称取５２．７ｇ磷酸氢二钾和３０．２ｇ磷酸二氢钾，加入约５００ｍＬ水溶解，用１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠或１ｍｏｌ／Ｌ盐酸调整ｐＨ７．０后，加水定容至１Ｌ。３．１６ 呋虫胺标准物质：ｄｉｎｏｔｅｆｕｒａｎ，Ｃ７Ｈ１４Ｎ４Ｏ３，ＣＡＳ号：１６５２５２７００，纯度大于等于９８％。３．１７ 呋虫胺标准储备液：称取适量呋虫胺标准品，用丙酮正己烷（１＋１，体积比）配制成１．０ｍｇ／ｍＬ的标准储备液；０℃～４℃保存。保存期１年。３．１８ 呋虫胺标准工作液：根据需要用丙酮正己烷（１＋１，体积比）将储备液稀释配制成适用浓度的标准工作液。０℃～４℃保存。保存期１个月。３．１９ ＥｎｖｉＣａｒｂ／ＬＣＮＨ２固相萃取柱：５００ｍｇ／５００ｍｇ。ＳｕｐｅｌｃｌｅａｎＥＮＶＩＣａｒｂＳＰＥ９（石墨化非多孔碳）与ＳｕｐｅｌｃｌｅａｎＬＣＮＨ２ＳＰＥ（酰胺丙基甲硅烷基化硅胶）串联。３．２０ 滤膜：０．２μｍ。１犛犖／犜２２３１—２００８食品伙伴网４ 仪器和设备４．１ 液相色谱质谱／质谱联用仪：配备电喷雾离子源（ＥＳＩ）。４．２ 振荡器。４．３ 旋涡混合器。４．４ 旋转蒸发仪。４．５ 高速均质器。１００００ｒ／ｍｉｎ。４．６ 离心机。４．７ 离心管：１００ｍＬ。４．８ 分液漏斗：２５０ｍＬ、１５０ｍＬ。４．９ 粮谷粉碎机。４．１０ 食品捣碎机。４．１１ 花生粉碎机。５ 试样的制备与保存５．１ 试样制备５．１．１ 小麦、玉米取有代表性样品约５００ｇ，用粉碎机全部粉碎并通过２．０ｍｍ圆孔筛。混匀，装入洁净的容器内，密闭，标明标记。５．１．２ 水果、蔬菜、鱼、肉取有代表性样品约５００ｇ，将其可食用部分切碎后，用食品捣碎机将样品加工成浆状。混匀，装入洁净的容器内，密闭，标明标记。５．１．３ 花生取有代表性样品５００ｇ，用磨碎机全部磨碎。混匀，装入洁净的容器内，密闭，标明标记。５．２ 试样保存小麦、玉米、花生试样于０℃～４℃保存；鱼、肉及水果和蔬菜类试样于－１８℃以下冷冻保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。６ 测定步骤６．１ 提取６．１．１ 小麦、玉米、花生称取５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于１００ｍＬ离心管中，加２０ｍＬ水，放置５ｍｉｎ。加３０ｍＬ乙腈（３．１），于１００００ｒ／ｍｉｎ均质提取１ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ，提取液过滤至２５０ｍＬ分液漏斗中，残留物再用２０ｍＬ乙腈重复提取一次。合并提取液于分液漏斗中，依次加入２０ｇ氯化钠和６０ｍＬ磷酸缓冲液，振摇３ｍｉｎ。静置后，弃去水层。乙腈层加入５ｇ无水硫酸钠脱水后于４０℃旋转浓缩至近干。６．１．２ 水果、蔬菜称取１０ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于１００ｍＬ离心管中，加３０ｍＬ乙腈，于１００００ｒ／ｍｉｎ均质提取１ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ，提取液过滤至２５０ｍＬ分液漏斗中，残留物再用２０ｍＬ乙腈重复提取一次。合并提取液于分液漏斗中，依次加入２０ｇ氯化钠和６０ｍＬ磷酸缓冲液，振摇３ｍｉｎ。静置后，弃去水层。乙腈层加入５ｇ无水硫酸钠脱水后于４０℃旋转浓缩至近干。６．１．３ 鱼、肉称取１０ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于１００ｍＬ离心管中，加３０ｍＬ乙腈，旋涡混合均匀后于超声波中提取１５ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ，提取液过滤至２５０ｍＬ分液漏斗中，残留物再用２０ｍＬ乙腈重复提取一次。合２犛犖／犜２２３１—２００８食品伙伴网并提取液于分液漏斗中，依次加入２０ｇ氯化钠和６０ｍＬ磷酸缓冲液，振摇３ｍｉｎ。静置后，弃去水层。乙腈层加入５ｇ无水硫酸钠脱水后于４０℃旋转浓缩至近干。６．２ 净化６．２．１ 小麦、玉米、花生、鱼、肉提取物用２０ｍＬ正己烷溶解残留物，转入１５０ｍＬ分液漏斗中，分别用２０ｍＬ正己烷饱和乙腈对溶解液萃取２次，取下层溶液合并萃取液，４０℃减压浓缩干，加入２ｍＬ乙腈溶解。用１０ｍＬ乙腈预淋洗Ｅｎｖｉｃａｒｂ／ＬＣＮＨ２（５００ｍｇ／５００ｍｇ）小柱，弃去流出液。注入上述所得溶液，再用２０ｍＬ乙腈淋洗，收集洗脱液，于４０℃旋转浓缩至近干，残留物用乙腈（３．１）溶解，定容至２．０ｍＬ，过０．２μｍ滤膜，供液相色谱质谱／质谱测定。６．２．２ 蔬菜、水果用１０ｍＬ乙腈预淋洗Ｅｎｖｉｃａｒｂ／ＬＣＮＨ２（５００ｍｇ／５００ｍｇ）小柱，弃去流出液。注入上述所得溶液，再用２０ｍＬ乙腈淋洗，收集洗脱液，于４０℃旋转浓缩至近干，残留物用乙腈（３．１）溶解，定容至２．０ｍＬ，过０．２μｍ滤膜，供液相色谱质谱／质谱测定。６．３ 测定６．３．１ 液相色谱质谱／质谱条件ａ） 色谱柱：ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＵｐｌｃＢＥＨＣ８１．７μｍ；ｂ） 流动相：水（Ａ）和乙腈（Ｂ）梯度见表１；表１ 流动相梯度时间／ｍｉｎ流速／（ｍＬ／ｍｉｎ）Ａ／％Ｂ／％０．０００．２５６０４００．３００．２５６０４０２．０００．２５３０７０２．５００．２５６０４０ ｃ） 柱温：３０℃；ｄ） 流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ；ｅ） 进样量：１０μＬ；ｆ） 质谱条件：参见附录Ａ。６．３．２ 液相色谱质谱／质谱检测根据样液中被测物含量，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准工作溶液与样液等体积参插进样测定，标准工作溶液和待测样液中呋虫胺的响应值均应在仪器检测的线性范围内。６．３．３ 确证如果样液与标准工作溶液的质量色谱图中，在相同保留时间有色谱峰出现，允许偏差小于±２．５％，所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内（允许范围见表２）。则可判断样品中存在相应的被测物。在６．３．１条件下，呋虫胺标准物的液相色谱质谱谱图参见附录Ｂ。表２ 使用定性液相色谱质谱时相对离子丰度最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０６．４ 空白试验除不加样品外，均按上述步骤进行。７ 结果计算与表述用色谱数据处理机或按式（１）计算样品中呋虫胺残留量。３犛犖／犜２２３１—２００８食品伙伴网犡＝犃×犮×犞犃ｓ×犿……………………………（１） 式中：犡———试样中呋虫胺残留量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；犃———样品溶液中呋虫胺的峰面积；犮———呋虫胺标准工作液的浓度，单位为微克每升（μｇ／Ｌ）；犞———样品溶液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———呋虫胺标准工作溶液的峰面积；犿———最终样液代表的试样质量，单位为克（ｇ）。８ 测定低限和回收率８．１ 测定低限本方法呋虫胺的测定低限：小麦、花生、玉米、菠菜、苹果、胡萝卜、紫苏叶、肉及鱼中呋虫胺残留量的检测低限为１０μｇ／ｋｇ。８．２ 回收率样品的添加浓度及回收率的实验数据见表３。表３ 添加浓度及回收率的实验数据样品名称添加浓度／（μｇ／ｋｇ）回收率／％小麦１０６５．００～７２．００２０７０．４５～８０．００４０７５．７５～８５．００胡萝卜１０６９．７０～８０．２０２０７７．８０～８７．６０４０８０．４０～９２．００玉米１０６９．００～７８．００２０７６．５０～８５．２０４０７８．４０～８７．５０花生１０６３．２０～７１．６０２０６８．４０～８１．００４０７８．５０～８５．００苹果１０７３．６０～８２．２０２０７８．４０～８５．４５４０８２．００～９０．２０紫苏１０６９．５０～８５．７０２０７８．４５～９０．００４０８３．００～９３．５０菠菜１０７５．４０～８２．６０２０７８．００～８７．００４０７９．４０～９５．５０猪肉１０６５．５０～７８．００２０７４．５０～８４．３０４０７８．５０～９０．００马哈鱼１０６４．００～７８．５０２０７４．５０～８５．４５４０７９．２０～９４．２０４犛犖／犜２２３１—２００８食品伙伴网附 录 犃（资料性附录）质谱／质谱和多反应监测条件１）表犃．１ 质谱／质谱条件电离方式ＥＳＩ＋毛细管电压３．０ｋＶ源温度１２０℃去溶剂温度３５０℃锥孔气流氮气，５０Ｌ／ｈ去溶剂气流氮气，６００Ｌ／ｈ碰撞气压氩气，３．１０×１０－６Ｐａ监测模式多反应监测表犃．２ 多反应监测条件化合物母离子子离子驻留时间／ｓ锥孔电压／Ｖ碰撞能量／ｅＶ呋虫胺２０２．９１２８．８ａ１５６．８０．１００．１０２０２０１２１０ ａ离子用于定量。１） 非商业性声明：附录Ａ所列参数是在ＷａｔｅｒｓＱｕａｔｔｒｏＰｒｅｍｉｅｒ质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。５犛犖／犜２２３１—２００８食品伙伴网附 录 犅（资料性附录）标准物质色谱图图犅．１ 呋虫胺液相色谱质谱／质谱多反应监测色谱图６犛犖／犜２２３１—２００８食品伙伴网犉狅狉犲狑狅狉犱犃狀狀犲狓犃狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狀犻狀犳狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲狅犳狋犺犲犆犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犃犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犃犱犿犻狀狊狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犾狅狀犵犱犪犳狅狅犱狊狋犪犳犳犮狅．，犔狋犱．犜犺犲犿犪犻狀犱狉犪犳狋犲狉狊狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉