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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２２２９—２００８进出口食品中稻瘟灵残留量检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犻狊狅狆狉狅狋犺犻狅犾犪狀犲狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２００８１１１８发布２００９０６０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前 言本标准的附录Ａ和附录Ｂ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局。本标准主要起草人：杨长志、康庆贺、吴岩、李刚、刘永、王传松、吴岚、程阳。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２２２９—２００８食品伙伴网进出口食品中稻瘟灵残留量检测方法１ 范围本标准规定了进出口食品中稻瘟灵残留量的气相色谱和气相色谱质谱检测方法。本标准适用于大米、玉米、柑橘、苹果、菠菜、大葱、松籽仁、葵花籽仁、茶叶、鱼、牛肝、鸡肾、蜂蜜及牛奶中稻瘟灵残留量的检测和确证。２ 方法提要试样中残留的稻瘟灵用正己烷或正己烷丙酮、乙腈提取，提取液浓缩后，经石墨炭黑固相萃取柱、中性氧化铝固相萃取柱、氟罗里硅土固相萃取柱、ＨＬＢ固相萃取柱净化，用气相色谱仪检测、气相色谱质谱仪检测和确证，外标法定量。３ 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水。３．１ 丙酮：色谱纯。３．２ 正己烷：色谱纯。３．３ 乙腈：色谱纯。３．４ 甲醇：色谱纯。３．５ 磷酸氢二钠。３．６ 磷酸二氢钠。３．７ 氯化钠。３．８ 无水硫酸钠：经６５０℃灼烧４ｈ，置于干燥器内备用。３．９ 正己烷丙酮溶液（２＋１，体积比）。３．１０ 正己烷丙酮溶液（８５＋１５，体积比）。３．１１ 正己烷丙酮溶液（８＋２，体积比）。３．１２ ３０％甲醇溶液：取３００ｍＬ甲醇，加入７００ｍＬ水，混匀。３．１３ ８０％甲醇溶液：取８００ｍＬ甲醇，加入２００ｍＬ水，混匀。３．１４ 饱和氯化钠溶液：称取３６ｇ氯化钠，用水溶解并稀释至１００ｍＬ。３．１５ 硫酸钠溶液（２０ｇ／Ｌ）：称取２０ｇ无水硫酸钠，用水溶解并稀释至１０００ｍＬ。３．１６ 磷酸盐缓冲液（０．２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．４）：称取磷酸氢二钠７１．６４ｇ和磷酸二氢钠３１．２１ｇ，分别用水溶解并稀释至１０００ｍＬ。量取磷酸氢二钠水溶液８１０ｍＬ和磷酸二氢钠水溶液１９０ｍＬ混合于１０００ｍＬ烧瓶中。３．１７ 稻瘟灵标准品（ｉｓｏｐｒｏｔｈｉｏｌａｎｅ，Ｃ１２Ｈ１８Ｏ４Ｓ２，ＣＡＳ５０５１２３５１）：纯度大于等于９９％。３．１８ 稻瘟灵标准溶液：准确称取适量稻瘟灵的标准品，用丙酮配成浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准储备液，标准储备液可在－１８℃条件下储存６个月；根据需要再用正己烷稀释成适当浓度的标准工作液，标准工作液可在０℃～４℃条件下储存３个月。３．１９ 石墨炭黑固相萃取柱：１０００ｍｇ，６ｍＬ。使用前依次用３ｍＬ丙酮、５ｍＬ正己烷活化。３．２０ 中性氧化铝固相萃取柱：１０００ｍｇ，６ｍＬ。使用前依次用３ｍＬ丙酮、５ｍＬ正己烷活化。备用。３．２１ 氟罗里硅土固相萃取柱：１０００ｍｇ，６ｍＬ。使用前依次用３ｍＬ丙酮、５ｍＬ正己烷活化。备用。３．２２ ＨＬＢ固相萃取柱：６０ｍｇ，３ｍＬ。使用前依次用３ｍＬ甲醇、３ｍＬ水活化。１犛犖／犜２２２９—２００８食品伙伴网４ 仪器和设备４．１ 气相色谱仪：配ＥＣＤ检测器。４．２ 气相色谱质谱联用仪：配负化学电离源。４．３ 电子天平：感量０．０１ｍｇ，０．０１ｇ。４．４ 固相萃取装置。４．５ 微波炉：６５０Ｗ。４．６ 粉碎机。４．７ 组织捣碎机。４．８ 离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ。４．９ 旋涡混合器。４．１０ 旋转蒸发器。４．１１ 氮吹仪。４．１２ 均质器：１２０００ｒ／ｍｉｎ。４．１３ 具塞玻璃离心管：１５ｍＬ、５０ｍＬ。４．１４ 无水硫酸钠柱：８．０ｃｍ×１．５ｃｍ（内径）玻璃柱，内装５ｃｍ高无水硫酸钠。５ 试样制备与保存５．１ 试样制备５．１．１ 柑橘、苹果、菠菜取有代表性样品约５００ｇ（不可用水洗涤），将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．１．２ 大葱取有代表性样品约５００ｇ（不可用水洗），将其可食部分切成约２ｃｍ的段，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．１．３ 玉米、大米、茶叶、松籽仁、葵花籽仁取有代表性样品约５００ｇ，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．１．４ 牛肝、鸡肾、鱼取有代表性样品约５００ｇ，将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将充分捣碎均匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．１．５ 蜂蜜取有代表性样品约５００ｇ。对于无结晶的样品将其搅拌均匀；对于有结晶析出的样品，在密闭情况下，将样品置于不超过６０℃的水浴中温热，待样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温。在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．２ 试样保存玉米、大米、茶叶、松籽仁、葵花籽仁、蜂蜜和牛奶等试样于４℃以下保存；柑橘、苹果、菠菜、大葱、牛肝、鸡肾和鱼等试样于－１８℃以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。６ 测定步骤６．１ 提取６．１．１ 玉米、大米、松籽仁、葵花籽仁称取试样约５ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入５ｇ无水硫酸钠（３．８）和２０ｍＬ乙腈（３．３），用均质器以１００００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液转移至１００ｍＬ浓缩瓶２犛犖／犜２２２９—２００８食品伙伴网中。再用２０ｍＬ乙腈重复提取一次，合并提取液于同一１００ｍＬ浓缩瓶中，５５℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入６ｍＬ正己烷（３．２）溶解残渣待净化。６．１．２ 柑橘、苹果、菠菜、牛肝、鸡肾、鱼称取试样约５ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入１０ｇ无水硫酸钠和２０ｍＬ正己烷丙酮（３．９）溶液，用均质器以１２０００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于１００ｍＬ浓缩瓶中。再用２０ｍＬ正己烷丙酮（３．９）溶液重复提取一次，合并提取液于同一１００ｍＬ浓缩瓶中，４５℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入５ｍＬ正己烷溶解残渣待净化。６．１．３ 茶叶称取试样约２ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入４ｍＬ饱和氯化钠溶液（３．１４），在旋涡混合器上充分混合０．５ｍｉｎ，放置０．５ｈ，加入２０ｍＬ乙腈，用均质器以１００００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液转移至１００ｍＬ浓缩瓶中。再用２０ｍＬ乙腈重复提取一次，合并提取液于同一１００ｍＬ浓缩瓶中，５５℃旋转浓缩约５ｍＬ。将浓缩提取液转移至２５０ｍＬ分液漏斗中，加入１００ｍＬ硫酸钠溶液（３．１５）和４０ｍＬ正己烷，振摇２ｍｉｎ，静置分层，将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于２００ｍＬ浓缩瓶中。再用４０ｍＬ正己烷重复提取一次，合并提取液于同一２００ｍＬ浓缩瓶中，４５℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入５ｍＬ正己烷溶解残渣待净化。６．１．４ 蜂蜜称取试样约５ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入１５ｍＬ水和５ｍＬ丙酮（３．１），在旋涡混合器上充分混合０．５ｍｉｎ。然后加入５ｇ氯化钠（３．７）和２０ｍＬ正己烷，在旋涡混合器上充分混合２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于１００ｍＬ浓缩瓶中。再用２０ｍＬ正己烷重复提取一次，合并提取液于同一１００ｍＬ浓缩瓶中，４５℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入６ｍＬ３０％甲醇溶液（３．１２）溶解残渣待净化。６．１．５ 牛奶称取试样约５ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入２ｇ氯化钠和２０ｍＬ正己烷丙酮（３．９）溶液，在旋涡混合器上充分混合２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于１００ｍＬ浓缩瓶中。再用２０ｍＬ正己烷重复提取一次，合并提取液于同一１００ｍＬ浓缩瓶中，４５℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入６ｍＬ正己烷溶解残渣待净化。６．１．６ 大葱称取试样约５ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，置于微波炉（中火）中处理４０ｓ，加入２ｇ氯化钠和２０ｍＬ乙腈，用均质器以１００００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，将上清液转移至预先加入１００ｍＬ磷酸盐缓冲溶液（３．１６）的２５０ｍＬ分液漏斗中。再用２０ｍＬ乙腈重复提取一次，合并提取液于同一２５０ｍＬ分液漏斗中，加入４０ｍＬ正己烷，振摇２ｍｉｎ，静置分层，将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于２００ｍＬ浓缩瓶中。再用４０ｍＬ正己烷重复提取一次，合并提取液于同一２００ｍＬ浓缩瓶中，４５℃旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入５ｍＬ正己烷溶解残渣待净化。６．２ 净化６．２．１ 玉米、大米、松籽仁、葵花籽仁、牛肝、鸡肾、鱼将上述样液全部转移到中性氧化铝固相萃取柱（３．２０）中，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，弃去流出液。再自上而下将中性氧化铝固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱（３．２１）串接，加入１０ｍＬ正己烷丙酮（３．１１）溶液洗脱，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液。洗脱液经６０℃氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容５ｍＬ，供气相色谱和气相色谱质谱仪测定。６．２．２ 柑橘、苹果、菠菜、大葱将上述样液全部转移到石墨炭黑固相萃取柱（３．１９）中，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，弃去流出液。再自上而下将石墨炭黑固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱串接，加入１０ｍＬ正己烷丙酮３犛犖／犜２２２９—２００８食品伙伴网（３．１０）溶液洗脱，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液。洗脱液经６０℃氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容５ｍＬ，供气相色谱和气相色谱质谱仪测定。６．２．３ 茶叶将上述样液全部转移到石墨炭黑固相萃取柱中，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，弃去流出液。再自上而下将石墨炭黑固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱串接，加入１０ｍＬ正己烷丙酮（３．１０）溶液洗脱控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液。洗脱液经６０℃氮吹仪吹干。用６ｍＬ３０％甲醇溶液（３．１２）溶解残渣转移到ＨＬＢ固相萃取柱（３．２２）中，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，弃去流出液。加入１４ｍＬ８０％甲醇溶液（３．１３）溶液洗脱，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液。洗脱液经６０℃氮吹仪吹至约３ｍＬ后，准确加入２ｍＬ正己烷和５ｍＬ硫酸钠水溶液，在旋涡混合器上充分混合２ｍｉｎ，在３０００ｒ／ｍｉｎ下离心３ｍｉｎ。取上清液供气相色谱和气相色谱质谱仪测定。６．２．４ 蜂蜜将上述样液全部转移到ＨＬＢ固相萃取柱上，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，弃去流出液。加入１４ｍＬ８０％甲醇溶液（３．１３）溶液洗脱，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液。洗脱液经６０℃氮吹仪吹至约３ｍＬ后，准确加入５ｍＬ正己烷和５ｍＬ硫酸钠水溶液，在旋涡混合器上充分混合２ｍｉｎ，３０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ。取上清液供气相色谱和气相色谱质谱仪测定。６．２．５ 牛奶将上述样液全部转移到氟罗里硅土固相萃取柱上，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，弃去流出液。加入１０ｍＬ正己烷丙酮（３．１０）溶液洗脱，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ～２ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液。洗脱液经６０℃氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容５ｍＬ，供气相色谱和气相色谱质谱仪测定。６．３ 测定６．３．１ 气相色谱条件ａ） 色谱柱：Ｒｔｘ１７０１石英毛细管柱，３０ｍ×０．２５ｍ